长春市科技计划项目(2006104)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：苏冠方左玲裴颖隋桂芹赵惠敏更多>>
- 相关机构：吉林大学第二医院解放军第208医院农安县人民医院更多>>
- 发文基金：长春市科技计划项目吉林省科技厅白求恩医学专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血管内皮生长因子受体KDR基因胞外段1—3区基因转染抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的研究被引量：2
- 2011年
- 目的评价脂质体介导的血管内皮生长因子受体KDR基因胞外段1-3区（KDRn3）基因转染抑制氧诱导的视网膜新生血管的效果。方法选1周龄C57Bl／6N小鼠置于氧浓度为75％±2％的氧箱中5d。回到正常环境中诱导视网膜新生血管模型。在小鼠离开氧箱的当日，向转染组小鼠玻璃体腔注射脂质体pEGFP—N1／KDRn3复合物1μl；脂质体对照组注射等量脂质体；空白对照组小鼠注射等量PBS。回到正常环境中后5d，采用视网膜铺片及视网膜冰冻切片在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白在视网膜的表达；采用荧光标记的右旋糖酐血管灌注下视网膜铺片方法观察视网膜新生血管的分布并测量无灌注区面积；组织学切片观察比较突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数量。多组比较采用方差分析，有统计意义后进行两两比较的叮检验。结果转染组视网膜铺片见视网膜局部散在点状绿色荧光信号，空白对照组与脂质体对照组未见绿色荧光信号；视网膜冰冻切片见转染组视网膜神经节细胞层、内核层部分细胞胞质内见绿色荧光表达，空白对照组与脂质体对照组视网膜各层未见绿色荧光表达；视网膜铺片观察可见空白对照组与脂质体对照组在无灌注区边缘均可见新生血管芽及荧光渗漏，转染组见新生血管芽明显减少，生后第17天A、B、C3组新生血管模型小鼠各组视网膜无灌注区面积分别为（1．33±0．49）、（2．75±0．70）、（2．12±0．35）mm^2，组间比较差异有统计学意义（F=17．61，P〈0．01）。正常对照组及A、B、C组视网膜表面突破内界膜的血管内皮细胞核计数分别为0．20±0．51、13．58±2．48、23．05±3．40及21．70±2．89，组间比较差异有统计学意义（F=1085．25，P〈0．05）。结论pEGFP—N1／KDRn3基因转染可不同程度抑制氧诱导C37B1／6J小鼠视网膜新生血管的生长。
- 左玲栾永昕裴颖隋桂芹苏冠方
- 关键词：血管内皮生长因子受体2转染视网膜新生血管化小鼠
- KDRn3蛋白在人脐静脉血管内皮细胞中的表达及对其增殖的抑制作用被引量：1
- 2008年
- 目的观察KDRn3蛋白在人脐静脉血管内皮细胞中的表达及对其增殖的抑制作用。方法将质粒pEGFP-N1/KDRn3扩增并鉴定后,以脂质体介导转染人脐静脉血管内皮细胞,培养一定时间后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中KDRn3的含量,MTT法检测KDRn3蛋白对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响。结果转染后48h,在荧光显微镜下可见pEGFP-N1/KDRn3转染组人脐静脉血管内皮细胞发出绿色荧光,72h发出绿色荧光的细胞增多,强度增强;转染后24、48和72h,细胞培养上清中KDRn3含量与转染前比较均提高,且差异有显著意义;转染后48和72h,pEGFP-N1/KDRn3转染组与对照组比较,细胞增殖有明显的抑制,且差异有显著意义。结论KDRn3蛋白可在人脐静脉血管内皮细胞中表达,并能抑制其增殖。
- 左玲栾永昕裴颖赵惠敏苏冠方
- 关键词：血管内皮生长因子受体基因转染人脐静脉血管内皮细胞细胞增殖
- 增强型绿色荧光蛋白基因与人血管内皮生长因子受体KDR基因胞外1-3区域融合表达载体的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与人血管内皮生长因子受体KDR基因胞外1-3区域(KDRn3)的融合基因真核表达载体,为研究KDRn3在抑制视网膜新生血管性疾病中的作用奠定基础。方法以质粒pcDNA3.1/KDRn3为模板,PCR扩增KDRn3基因,将目的片段克隆至pMD18-T载体,其产物双酶切后连接到质粒pEGFP-Nl中。结果酶切及琼脂糖电泳分析表明提取及纯化的重组质粒含有目的基因片段,大小正确。结论成功构建了EGFP与人KDRn3的融合基因真核表达载体pEGFP-N1/KDRn3。
- 左玲苏冠方栾永昕
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白真核表达载体
- 脂质体介导质粒pcDNA3.1/KDRn3基因在转染小鼠视网膜组织中的表达及定位
- 2010年
- 目的:将真核表达质粒pcDNA3.1/KDRn3以脂质体介导转染C57BL/6J小鼠视网膜组织,观察其表达及定位。方法:首先对真核表达质粒pcDNA3.1/KDRn3进行扩增和酶切鉴定,然后将20只健康C57BL/6J小鼠随机分成对照组及玻璃体腔注射后2、5、7和14d组,每组4只鼠8眼。注射组每眼玻璃体腔注射脂质体pcDNA3.1/KDRn3复合物1μL,分别于注射后2、5、7及14d摘除眼球,制成石蜡切片,用KDRn3蛋白免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察KDRn3蛋白表达及定位。结果:XhoⅠ和BamHⅠ进行双酶切,切下900bp大小片段,与目的片段大小一致,表明该质粒确实为KDRn3。注射后2d在视网膜神经节细胞层细胞胞浆内可见红色荧光信号,注射后5和7d组视网膜神经节细胞层、内核层部分细胞胞浆内可见红色荧光信号;注射后14d视网膜神经节细胞层、部分内核层细胞胞浆内可见红色荧光信号,但发出红色荧光信号的细胞数明显减少。结论:阳离子脂质体可有效将pcDNA3.1/KDRn3基因转染小鼠视网膜组织,并得到持续表达。
- 左玲栾永昕姜扬裴颖苏冠方
- 关键词：血管内皮生长因子受体基因转染视网膜
