河北省科技攻关计划(06276102D-30)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：王俊霞宋淑霞郑龙尤红煜刘福英更多>>
- 相关机构：河北医科大学更多>>
- 发文基金：河北省科技攻关计划河北省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Flt3L与CCL5细胞因子佐剂对HBc抗原DNA疫苗特异性免疫应答的促进作用被引量：2
- 2008年
- 观察真核重组表达质粒pFlt3L及pCCL5对携带HBc抗原的DNA疫苗诱导的抗原特异性免疫应答的促进作用。将pFlt3L及pCCL5分别用脂质体的方法转染Hep G2细胞,然后采用骨髓细胞增殖及趋化小室实验检测细胞上清Flt3L及CCL5两种细胞因子的生物学活性。将pFlt3L和pCCL5两种重组质粒单独或联合使用与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法免疫小鼠,采用MTT法检测脾淋巴细胞增殖、流式细胞仪检测脾CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性。结果:骨髓细胞增殖及趋化实验证实了Flt3L及CCL5均有生物学活性。pFlt3L和pCCL5单独或联合使用均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P<0.05),提高小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达量(P<0.05或P<0.01),IL-4表达水平在各组无显著区别(P>0.05),Flt3L+CCL5组小鼠脾细胞特异性CTL活性显著高于其他各组(P<0.05)。pFlt3L和pCCL5表达质粒联用可显著促进小鼠Th1型细胞因子的表达,并对带HBc抗原的DNA疫苗的免疫应答具有促进作用。
- 刘春燕张艳郑龙尤红煜王俊霞刘须宋淑霞
- 关键词：DNA疫苗抗原特异性免疫应答
- HLA-A＊0201／Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用被引量：1
- 2008年
- 目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Westernblot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈。结果:RT-PCR、FCM和Westernblot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。
- 宋淑霞闫彩珍郑龙尤红煜王俊霞刘福英
- 关键词：肿瘤动物模型基因共转染MAGE-3PIRES
- 人黑色素瘤抗原MAGE-3肿瘤疫苗的构建及其诱导HLA-A*0201转基因小鼠CTL活性的观察
- 2007年
- 目的通过基因工程的方法获得人黑色素瘤抗原MAGE-3的DNA和蛋白疫苗,并观察其对HLA-A*0201转基因小鼠的CTL活性的影响。方法用RT-PCR的方法,从人黑色素瘤细胞株A375中扩增MAGE-3的cDNA片段,分别将其插入到pcDNA3.1/V5-His真核和pET32a原核表达载体。将pcDNA-MAGE-3转染B16肿瘤细胞观察其是否能在真核细胞中表达;将pET32a-MAGE-3转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE观察融合蛋白表达情况。并用镍柱亲和层析的方法纯化融合蛋白。然后,采用DNA疫苗初次免疫和蛋白疫苗加强的策略免疫HLA-A*0201转基因小鼠,LDH方法检测CTL活性。结果酶切结果证实,成功地构建了pcDNA-MAGE-3真核表达载体和pET32a-MAGE-3原核表达载体,并在真核细胞B16和原核细胞大肠杆菌中获稳定表达,原核表达产物为融合蛋白且分布于包涵体。用DNA疫苗进行初次免疫,镍柱纯化的融合蛋白加强免疫后,可成功地诱导HLA-A*0201转基因小鼠CTL活性。结论成功地获得了MAGE-3肿瘤抗原,为进一步完善MAGE-3肿瘤疫苗打下了基础。
- 宋淑霞刘贵然郑龙王俊霞刘福英
- 关键词：CTL活性
