国家自然科学基金(81171590)
- 作品数：9 被引量：15H指数：3
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- 小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定被引量：1
- 2015年
- 为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d^7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。
- 王艳红张波李波张蓓蓓于倩颜超华慧汤仁仙郑葵阳
- 关键词：小鼠肝内胆管上皮细胞
- 性别差异对类风湿性关节炎大鼠模型的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察性别差异对类风湿性关节炎大鼠模型的影响。方法健康成年SD大鼠40只，雌雄各半，随机分4组：雄性、雌性对照组，雄性、雌性模型组。模型组大鼠尾根部皮内注射Ⅱ型胶原及弗氏完全佐剂诱导类风湿性关节炎模型。观察建模后第1、2、3、4、5、6周大鼠的一般情况、体重、踝关节直径、关节炎指数评分的变化情况。结果与雄性模型组相比，雌性模型组大鼠关节炎症状出现早且急性期维持时间长，踝关节直径增加更明显，关节炎指数评分较高。结论采用注射胶原法诱导大鼠类风湿性关节炎动物模型，雌性大鼠更易于建模。
- 秦苏萍李慧李向阳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：类风湿性关节炎性别动物模型
- Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究被引量：1
- 2014年
- 目的分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用。方法选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的m RNA表达情况。结果与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P<0.05);分别为(19.9332±1.98180)U/L、(64.3699±14.53874)U/L、(46.7455±6.27572)U/L、(99.0038±25.34329)U/L、(46.7590±8.85478)U/L和(50.3374±14.19886)U/L。感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的m RNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P<0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P<0.05)。结论 Nrf2和Trx1 m RNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用。
- 韦艳霞于倩李阳刘宜升王庆苓汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫硫氧还蛋白-1天冬氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶
- p38MAPK抑制剂对小鼠急性移植物抗宿主病的发生及小肠损伤的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580对小鼠异基因骨髓造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生及小肠损伤的影响。方法用60只BALB／c小鼠作为受鼠，分为正常对照组、单纯照射组、模型组和干预组，每组15只。单纯照射组、模型组和干预组小鼠均接受7．5Gyy射线全身照射。C57BL／6小鼠作为供鼠，取其骨髓细胞及脾细胞经尾静脉输注给接受照射后的受鼠，建立小鼠aGVHD模型。干预组为aGVHD模型小鼠给予SB203580干预，末次给药48h后处死。模型组小鼠为aGVHD模型仅给予等量二甲基亚砜。移植后观察小鼠的一般状态和生存情况。移植后10d取各组小鼠小肠组织，采用RT-PCR、Westernblot及免疫组化方法检测磷酸化p38MAPK、Fas、FasL的表达。结果干预组小鼠的体重下降程度为（13．00±0．50）％，轻于模型组的（25．00±0．75）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；干预组小鼠的aGVHD的临床评分（3．33±0．82）低于模型组（6．33±1．36），差异有统计学意义（P〈0．05）；干预组小鼠的小肠组织中磷酸化p38MAPK、Fas、FasL的相对表达水平分别为1．43±0．02、0．81±0．03、0．97±0．03，均显著低于模型组的1．76±0．05、1．52±0．04、1．48±0．04。结论SB203580可抑制aGVHD小鼠小肠组织中p38MAPK通路的活化，减少Fas和FasL信号通路所引起的细胞凋亡，有效减轻aGVHD的发生及靶器官小肠的损害。
- 张翠平李小翠汤仁仙李向阳郑葵阳曾令宇
- 关键词：移植物抗宿主病小肠FAS配体
- 快速斑点酶标法检测抗丝聚蛋白抗体
- 2014年
- 目的建立一种快速、简便的抗丝聚蛋白抗体（anti-filaggrin antibody,AFA）的检测方法。方法采用快速斑点酶标法（Rapid-Dot-ELISA,R-Dot-ELISA）检测15份AFA阳性的类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者和15份AFA阴性的正常健康者血清的AFA。检测中采用不同浓度的丝聚蛋白、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体,摸索检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA和ELISA法检测100例RA患者和150例包括系统性红斑狼疮（SLE）、强直性脊柱炎等非RA的自身免疫病患者和50例健康者血清的AFA,比较两种方法检测AFA的一致性,并判断R-Dot-ELISA检测AFA对RA的诊断价值。结果丝聚蛋白浓度为40-160μg/m L,封闭液为含1%BSA和10%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80-1∶320是较合适的检测条件。R-Dot-ELISA与ELISA法检测AFA,结果一致率为98%（r=0.947,P〈0.05）,对RA诊断的敏感度、特异度等统计学指标无差异。结论 R-Dot-ELISA检测AFA快速、简便,且对RA的诊断具有较高的敏感性及特异性,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。
- 秦苏萍李慧王晓天李小翠郑葵阳汤仁仙
- 关键词：类风湿性关节炎
- PI3K／Akt通路在脑缺血Bad线粒体转位中的神经保护作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase／Akt，P13K／Akt）通路在缺血性脑中风B细胞白血病-2（Bcell lewkmia-2，Bcl-2）细胞死亡受体拮抗剂（antagonistofcelldeath，Bad）线粒体转位及神经元凋亡中的重要作用。方法制作大鼠全脑缺血模型，腹腔注射bpV（pic），应用免疫沉淀和免疫印迹法检测脑缺血复灌1天海马CAl区神经元Bad线粒体转位和细胞色素c释放，TUNEL法检测复灌3天神经元凋亡。结果与缺血复灌组和溶剂对照组相比，bpV（pic）组海马CAl区神经元Bad与Aktl的结合增多，Bad与B—cell lymphoma—extralarge（Bcl-X1）的结合、线粒体细胞色素c的释放和神经元凋亡明显减少（P〈0．05）。结论P13K／Akt通路在大鼠脑缺血复灌Bad线粒体转位及神经元凋亡中发挥了重要作用。
- 王晓天刘晓梅尤红娟李小翠秦苏萍汤仁仙郑葵阳
- 关键词：BADPI3KAKT脑缺血
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析 TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析
- 2014年
- 目的 分析小鼠华支睾吸虫感染后小鼠肝脏中Toll样受体5（TLR5）的表达情况.方法 随机选取C3H/HeN雌性小鼠,经口感染35个华支睾吸虫囊蚴建立感染模型.分别在感染0（对照组）、1、7、28、56、84天处死小鼠,取肝脏组织行如下处理：①苏木精-伊红（H-E）染色观察小鼠肝脏病变;②采用免疫组织化学染色观察小鼠肝脏组织TLR5表达情况;③采用逆转录聚合酶链反应（RT-PC R）检测肝脏中TLR5的表达水平.结果 ①肝脏病理结果显示,与对照组小鼠相比,感染第1、7天小鼠肝脏汇管区出现炎症细胞浸润,第28天可观察到肝细胞排列紊乱,出现纤维组织增生和胆管增生;②免疫组织化学染色显示,TLR5在感染华支睾吸虫第1天、7天、28天的小鼠肝内表达增高,其主要表达于汇管区肝细胞、肝胆管上皮细胞和纤维化区域的成纤维细胞;③RT-PCR结果显示,小鼠肝脏中TLR5 mRNA表达量在感染第1天、7天、28天明显高于对照组.结论 C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫可上调肝脏组织TLR5的表达,提示TLR5可能在宿主抵抗华支睾吸虫感染中起着一定的作用。
- 徐江涛张波王林王艳红张曼曼华慧颜超刘相叶刘转转汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫
- TLR3和IRF3在华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠中表达的初步分析被引量：4
- 2013年
- 目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,收集粪便检查华支睾吸虫虫卵.同时,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝脏中Toll样受体（TLRs）中的TLR3和IRF3的mRNA的表达情况.结果 自感染后第20~30天检查出华支睾吸虫虫卵;肝脏病理学结果显示,与正常组小鼠相比,随着时间的增加,感染组小鼠肝脏汇管区由少量炎症细胞浸润、胆管上皮反应性增生发展到在该区域出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润,表明华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠模型成功建立.与正常组相比,感染组自感染后第1天起TLR3和IRF3的mRNA表达均升高（P〈0.01）,均在第84天开始下降.结论 华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠后可激活TLR3-TRIF途径,提示TLR3-TRIF途径可能在华支睾吸虫致病过程中起了一定的作用.
- 刘瀛颜超华慧李向阳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫
