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感染茶尺蠖的重组家蚕核型多角体病毒的构建: 目前防治茶尺蠖的方法主要是化学方法,但化学杀虫剂毒杀害虫的同时也毒杀其天敌并导致农药残留,而生物方法体现出独特的优越性。为了解决茶尺蠖饲养复杂而导致茶尺蠖核型多角体病毒（EoNPV）繁殖困难,通过Bac-to-Bac系统...; 郭睿刘卫星潘中华刘林彭景琨薛仁宇曹广力朱越雄贡成良; 关键词：BMNPV 重组病毒; 文献传递

家蚕hop基因的克隆及序列分析被引量：1: 2012年; JAK激酶HOP是JAK/STAT信号途径的重要组成成员,在信号传导中发挥重要作用。为研究家蚕的JAK/STAT途径,通过RT-PCR克隆家蚕的hop基因(Bmhop)的cDNA,序列测定结果显示:Bmhop开放读码框为1 924 bp,编码638个氨基酸残基;结构分析结果显示:BmHOP具CRD_FZ、Kringle、转膜区域和PKc超家族蛋白激酶催化结构域TyrKc,每个结构域均可形成特定的三级结构;基于基因芯片的数据分析结果显示:Bmhop在家蚕5龄第3天的睾丸、卵巢、头部、脂肪体、中肠、马氏管中均有表达,但表达水平较低;基于TyrKc结构域序列的进化分析指出:昆虫HOP并不完全按物种聚类,BmHOP单独形成1个分枝,HOP在进化过程有TyrKc结构域扩增和TyrKc结构域组合事件发生。本研究结果为探讨BmHOP在JAK/STAT信号途径中的作用方式以及hop基因进化提供新的线索。; 梁聪彭景琨曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕 JAK/STAT信号通路基因克隆

家蚕SOCS-2基因的克隆与序列分析: 2012年; SOCS基因是JAK/STAT信号通路的负调节基因。为了了解家蚕SOCS基因(BmSOCS)的遗传变异与进化,通过电子克隆获得了SOCS cDNA基因序列,结果显示家蚕基因组中至少存在4种BmSOCS基因,BmSOCS-2基因存在可变剪接。通过RT-PCR从家蚕中扩增得到1个BmSOCS-2基因(BmSOCS-2A),测序结果表明,该792 bp片段含有完整的ORF,由4个外显子组成,编码263个氨基酸残基,分子量为28.8 ku。结构分析显示,BmSOCS-2A有5个α螺旋结构,存在典型的SH2结构域和SOCS结构域。基因芯片数据分析显示,BmSOCS-2在家蚕雌雄性腺组织中表达量最高。进化分析表明,SOCS以不同种类聚类在一起,表明各种SOCS基因家族在各昆虫物种形成前就已产生。; 杨李阳彭景琨薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕电子克隆

基于RNA-Seq技术检测分析家蚕卵巢发育高表达基因被引量：3: 2013年; 为了从分子水平解析家蚕卵巢发育和卵子发生的机制,对家蚕卵巢组织进行深度RNA测序,并对高表达基因进行KEGG通路富集分析。取5龄3 d、5龄6 d及化蛹2 d的家蚕卵巢分别抽提RNA,并合成cDNA,将3组样品混合后进行RNA-Seq测序,得到的总reads条带数为6 306 078,平均长度为100 bp,其中clean reads达到98.87%,测序饱和度良好,证明测序数据真实可靠。clean reads对应的基因数为9 609个。以家蚕Actin3基因为参照,计算所测基因的log2(Fold_change),将log2(Fold_change)>2的基因定义为高表达基因,共有66个基因为高表达基因。利用KEGG通路富集分析发现这些基因主要集中在能量代谢、蛋白质合成、信号转导等路径中。研究结果为理解家蚕卵巢发育及卵子的发生提供了新的线索。; 宋作伟黄茉莉薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕卵巢

非转座子载体介导的转基因家蚕表达hIL-28A被引量：1: 2011年; 为了探讨非转座子载体介导转基因家蚕表达外源基因的可能性,将hIL-28A克隆进昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,构建了重组载体pIZT/V5-His-hIL-28A.利用精子介导法将该重组载体导入家蚕卵,通过绿色荧光筛选并结合PCR、DNA杂交等分子鉴定,证实成功获得了转基因家蚕.Western blotting结果显示,转基因家蚕表达重组hIL-28A的分子质量为25 ku,ELISA检测结果显示,hIL-28A在G3代转基因蚕、后部丝腺、脂肪组织冻干粉中的含量分别为0.198、0.320和0.238 ng/g.表明通过非转座子载体介导可以将外源基因导入家蚕基因组并实现外源基因的表达.; 崔琳琳薛仁宇陆叶曹广力贡成良; 关键词：转基因家蚕精子介导法

家蚕drk基因的克隆及生物信息学分析被引量：1: 2012年; 受体下游激酶(downstream of receptor kinases,DRK)是JAK/STAT信号途径的重要组成成员,在信号传导中发挥重要作用。为了研究家蚕的JAK/STAT途径,本研究通过RT-PCR克隆了家蚕的drk基因(Bmdrk)的cDNA,序列测定结果显示:Bmdrk开放读码框为639 bp,编码212个氨基酸残基。结构分析显示:BmDRK由SH3和SH22种结构域形成了SH3-SH2-SH3的结构形式。基于SH3-SH2-SH3结构域序列的进化分析指出昆虫DRK蛋白序列高度同源,结构与基本功能相似。DRK在进化过程有侧翼1个SH3结构域丢失的事件发生。研究结果为探讨Bmdrk在JAK/STAT信号途径中的作用方式以及drk基因进化提供了新的线索。; 王洋彭景琨曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕 JAK/STAT信号通路基因克隆

家蚕JAK/STAT信号通路相关基因及对BmNPV感染应答初探: JAK/STAT信号通路是一条多种细胞因子共用的信号传导途径,其相关蛋白及基本功能在生物体中保守。本研究克隆、分析了家蚕JAK/STAT信号通路主要相关基因,主要包括BmSTAT,BmHOP,BmSOCS2,BmSOCS...; 张晓丽彭景琨马焕艳潘中华郑小坚曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕 JAK/STAT通路 BMNPV; 文献传递

基于16S rRNA基因序列分析家蚕肠道细菌的多样性被引量：19: 2015年; 家蚕肠道菌群与蚕体对营养物质的消化吸收及健康性密切相关。为了解家蚕肠道细菌的多样性及雌、雄个体间肠道细菌类群的差异,通过应用454焦磷酸测序技术检测细菌16S rRNA基因序列的方法分析家蚕5龄第3天雌、雄幼虫中肠内容物中的细菌类群,共发现5 578个分类操作单元(operational taxonomic units),包括14个门、21个纲、30个目、71个科、120个属的细菌,雌、雄个体在上述分类阶元共有的肠道细菌菌群分别为8、9、20、38和46种。在属水平上对细菌菌群构成的分析显示,雄蚕肠道中的主要优势细菌为代尔夫特菌属Delftia、橙单胞菌属Aurantimonas、肠球菌属Enterococcus、嗜糖假单胞菌属Pelomonas、青枯菌属Ralstonia、台湾温单胞菌属Tepidimonas、假单胞菌属Pseudomonas、阿斯普罗单胞菌属Aspromonas、甲基杆菌属Methylobacterium和葡萄球菌属Staphylococcus;雌蚕肠道中的主要优势细菌为代尔夫特菌属Delftia、橙单胞菌属Aurantimonas、假单胞菌属Pseudomonas、嗜糖假单胞菌属Pelomonas、佩特罗菌属Petrobacter、肠球菌属Enterococcus、台湾温单胞菌属Tepidimonas、狭义的梭菌属Clostridium sensu stricto、阿斯普罗单胞菌属Aspromonas。其中,雄蚕肠道中有23个属的细菌丰度是雌蚕的1.5倍以上,在雌蚕肠道中有7个属的细菌丰度是雄蚕的1.5倍以上,表明雌性与雄性家蚕肠道细菌类群的组成和比率存在明显差异。基于16S rRNA基因序列的聚类分析显示,家蚕肠道中的优势细菌属可分为2个大类。家蚕肠道细菌的多样性研究结果可作为探讨雌蚕和雄蚕经济性状差异的新线索。; 许刚孙振丽胡小龙薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：多样性 RRNA基因序列

家蚕质型多角体病毒基因组片段1中的假定重叠基因检测: 2014年; 生物信息学分析结果显示家蚕质型多角体病毒（BmCPV）基因组s1片段中含有-个假定的重叠基因ORFX。为了检测该重叠基因ORFX是否在RNA和蛋白质水平有相应的表达产物，用大肠杆菌表达的重组ORFX蛋白制备多克隆抗体，对感染BmCPV的家蚕中肠后部组织进行Westernblotting和免疫组化检测，结果在感染BmCPV第1～7天的家蚕中肠组织中没有检测到假定的ORFX蛋白。进一步基于假定重叠基因ORFX区域及其下游序列设计定量检测ORFX基因和s1片段转录本RNA总水平的引物RECPV-1／RECPV-2，以及定量检测S1片段转录本RNA水平的引物RECPV．3／RECPV-4，用引物Oligo（dT）／RECPV-2和Oligo（dT）／RECPV-4的反转录产物作为模板，对感染BmCPV的家蚕中肠组织中的S1片段转录本和假定的ORFX转录本进行定量PCR检测，结果在感染BmCPV第5～7天的中肠组织中均没有检测到假定的ORFX转录本。由此表明，BmCPV基因组S1片段中可能不存在假定的ORFX重叠基因。; 张仰齐曹广力何蕾薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕质型多角体病毒重叠基因定量PCR

基于RNA-Seq分析幼虫5龄期至化蛹初期家蚕卵巢发育中的细胞进程相关基因: 2013年; 细胞进程(cellular processes)包括物质转运和分解代谢、细胞运动、细胞生长和死亡及细胞通讯。为了解细胞进程相关基因对家蚕卵巢发育的影响,对幼虫5龄期至化蛹初期的家蚕卵巢组织进行转录组测序(RNA-Seq)。将去除低值序列的clean reads定位到来自家蚕的参考mRNA序列后,经过京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析发现,5龄至化蛹初期的家蚕卵巢中约有405个与细胞进程相关的基因,并包含与果蝇卵巢发育相关基因高度同源的基因。在这些基因中,与细胞的物质运输和代谢过程相关的基因有198个,与细胞运动相关的基因有22个,与细胞的生长和死亡相关的基因有109个,与细胞通讯相关的基因有76个。推测家蚕卵巢中的这些基因的功能与果蝇中的同源基因功能类似。研究结果为解析家蚕的卵巢发育及卵子发生的分子机制提供了新线索。; 殷亚娟曹广力黄茉莉薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕卵巢发育卵子发生

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国家自然科学基金(31072085)

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