国家自然科学基金(81072337)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李娟鞠文张士尧徐坤原野更多>>
- 相关机构：吉林大学吉林出入境检验检疫局更多>>
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- 重组钩端螺旋体多抗原位点同源合成基因的表达及其抗原性鉴定
- 2012年
- 目的:构建重组钩端螺旋体(钩体)优势抗原表位原核表达系统,以期获得高纯度的钩体优势抗原表位重组融合蛋白,为进一步研究钩体快速检测方法奠定基础。方法:利用基因重组的方法构建表达质粒pET-rLP。经IPTG诱导后,获得高效表达带组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,包涵体蛋白经尿素变性溶解,采用镍离子亲和纯化,利用SDS-PAGE、Western blotting和间接ELISA法鉴定。结果:在相对分子质量为20 000处有1条特异性蛋白条带,为重组钩体优势抗原表位融合蛋白;ELISA结果显示其可与钩体阳性血清特异性结合,而与其他血清无交叉反应。结论:成功构建重组钩体优势抗原表位原核表达系统,并获得高纯度的重组钩体优势抗原表位融合蛋白。
- 张士尧浦昀徐坤李金华原野鞠文李娟
- 关键词：钩端螺旋体原核表达融合蛋白活性鉴定
- 杂多化合物抗乙型肝炎病毒活性及机制研究
- <正>乙型肝炎是严重影响人类健康的重大传染病之一,积极开展乙型肝炎防治研究具有重要意义。本研究根据乙型肝炎病毒在体内复制过程特点,利用杂多化合物的抗病毒特点和分子可设计性,设计合成了一系列对乙型肝炎病毒具有较好抑制作用的...
- 李娟齐燕飞徐坤
- 关键词：杂多化合物抗病毒乙型肝炎病毒转基因鼠
- 文献传递
- 单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用被引量：2
- 2012年
- 目的:制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(LM)多克隆抗体,并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用。方法:复苏并扩大培养LM标准菌株,制备灭活疫苗免疫家兔,采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离,经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein GHP进行IgG纯化,采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价。得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联,并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中LM的方法。结果:制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364g.L-1,效价为1∶12 800～1∶25 600,与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应,与斯氏李斯特菌有弱交叉反应;致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品,阳性检出率为87.5%,最低检出抗原含量为0.039 8g.L-1。结论:制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体;建立的LAT方法特异性强,敏感性较高,重复性好,便于基层推广使用,为LM的现场检测提供了一种新手段。
- 鞠文宋秀玲原野张士尧方珍徐坤李娟孟日增
- 关键词：单增李斯特菌多克隆抗体乳胶凝集试验
- 新型多酸化合物NCW-6的毒理学安全性评价被引量：1
- 2012年
- 目的:评价具有抗病毒活性的多酸化合物NCW-6的安全性,阐明NCW-6的毒性及潜在的危险。方法:依据新药临床前毒理学评价方法进行NCW-6经口急性毒性实验和致畸敏感期实验。急性毒性实验中,将健康的昆明小鼠随机分为7组,每组10只,雌雄各半;给药剂量最低为4 000.00 mg.kg-1、最高为6 000.00mg.kg-1,组距为400.00mg.kg-1;经口灌胃1次给药,观察给药后14d小鼠的中毒表现,记录死亡数,用Bliss法计算半数致死剂量(LD50);致畸敏感期实验中,孕鼠随机分为5组,每组至少20只;给药组剂量分别为91.7、366.8和1 467.5mg.kg-1;阴性对照组给予5mL.kg-1蒸馏水,于受孕后第6～15天连续给药,每天灌胃1次;阳性对照组于妊娠第10天一次灌胃给予130mg.kg-1的维甲酸;各组孕鼠于孕期第20天颈椎脱臼处死,检查受孕情况,记录黄体数、活胎数、死胎数和吸收胎数等,做胎鼠一般外观检查(体质量、身长、尾长和外观有无异常),取胎鼠雌雄各半行内脏形态检查和骨骼形态检查。结果:急性毒性实验,NCW-6的LD50为5 869.9mg.kg-1,属于无毒化合物。致畸敏感期实验,3个给药组孕鼠的体质量和增重与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),各给药组胎鼠的平均体质量、身长、尾长以及平均胎质量、窝质量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),各给药组胎鼠外观、内脏畸形率、骨骼畸形率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NCW-6属于无毒化合物,且对大鼠无致畸作用,具有深入研究开发的价值。
- 原野李金华王娟张士尧鞠文齐燕飞李娟徐坤
- 关键词：急性毒性毒理学
