国家自然科学基金(81271391)
- 作品数：16 被引量：51H指数：4
- 相关作者：戴宜武吴月奎马建华秦家振高兵兵更多>>
- 相关机构：北京军区总医院安徽医科大学首都医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脐血源神经干细胞在SDF-1/CXCR4趋化下对脑出血大鼠神经损伤恢复的作用被引量：4
- 2019年
- 目的探讨移植的脐血源神经干细胞(UCBNSCs)在基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)作用下对脑出血大鼠神经功能修复的影响。方法(1)体外迁移实验中,将UCBNSCs置入Transwell小室的上室,在下室中分别加入0、30、60和120ng/mL浓度的SDF-1。(2)体内实验中,将60只脑出血模型大鼠按照随机数字表法分为UCBNSCs移植组和对照组,每组30只。造模后2d分别向2组大鼠颅内移植UCBNSCs悬液10μL和等量的磷酸盐缓冲液(PBS),同时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记内源性神经干细胞。分别于移植后1d、1周、2周对2组大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS)。移植后2周处死全部大鼠,进行SDF-1、BrdU、血管内皮生长因子(VEGF)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及双肾上腺皮质激素(DCX)免疫荧光染色;同时采用转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)检测试剂盒检验细胞凋亡情况。结果(1)体外实验中,UCBNSCs中能够检测到CXCR4的表达;60ng/mLSDF-1对UCBNSCs迁移作用最大,与其他浓度SDF-1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)体外实验中,移植2周后,UCBNSCs组大鼠室管膜下区BrdU标记的细胞数量增多,BrdU/DCX、BrdU/GFAP细胞数量明显比对照组增多,差异有统计学意义(P<0.05);UCBNSCs移植组脑损伤区神经营养因子VEGF阳性细胞数[(88.30±7.21)个/视野]明显高于对照组[(53.20±4.45)个/视野],差异有统计学意义(t=4.144,P=0.000);UCBNSCs移植组脑损伤区凋亡细胞的数量[(34.30±2.44)个/视野]明显低于对照组[(47.70±1.98)个/视野],差异有统计学意义(t=4.266,P=0.001)。移植后2周时UCBNSCs组mNSS评分[(6.40±0.163)分]明显低于对照组[(7.50±0.17)分],差异有统计学意义(t=4.714,P=0.002)。结论SDF-1/CXCR4可以趋化移植的UCBNSCs到达脑出血损伤区,促进大鼠神经功能恢复,其作用机制可能与促进神经发生、VEGF的分泌和抑制细胞凋亡有关。
- 马建华李鑫戴宜武
- 关键词：脑出血
- miR-184对小鼠神经干细胞增殖的影响及其机制被引量：2
- 2017年
- 目的观察miR-184对小鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响及其机制。方法构建包装pHBLV-U6-GFP-miR-184基因过表达和pHBLV—U6-GFP-sh-miR-184基因干扰慢病毒载体和各自对照无义序列慢病毒载体，分离培养孕14d的CD1胎鼠大脑侧脑室下区的NSCs并鉴定。实验细胞分为过表达对照组、miR-184过表达组、干扰对照组和miR-184干扰组，各组细胞在感染对应的慢病毒后，用嘌呤霉素进行抗性筛选。筛选后，继续培养细胞至3代，实时定量PCR进行miR-184过表达验证。通过targetScan、iRTarBase、miRanda等软件预测 miR—184的靶基因并进行内源性验证，采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）细胞渗入实验观察各实验组的增殖情况，通过Western blotting实验和实时定量PCR观察各组Notch信号通路相关蛋白Hes1和Hes5及其mRNA的表达情况。结果免疫荧光染色显示，90％的分离培养细胞呈巢蛋A（nestin）和Y性别决定转录因子2（Sox2）双阳性，miR-184过表达组的miR—184表达量是过表达对照组的（67．63±7．53）倍，差异具有统计学意义（P〈0．05）。Brdu细胞渗入实验结果显示与各自对照组比，miR-184过表达组的细胞增值率是过表达对照组的（1．47±0．05）倍，而miR—184干扰组的细胞增值率是干扰对照组的（0．84±0．03）倍．差异均具有统计学意义（P〈0．05）。iRTarBase和miRanda软件预测，Numblike蛋白（Numbl蛋白）作为miR-184的潜在靶基因，miR—184可以下调Numbl蛋白的表达，miR-184过表达组和miR-184干扰组的Numbl相对表达量分别是各自对照组的（0．73±0．07）倍、（1．30±0．05）倍，差异均具有统计学意义（P〈0．05），但miR—184并不能改变Numbl mRNA的表达水平。miR-184可抑制Numb1蛋白的表达．使Notch信号通路的下游相关蛋白Hes1和Hes5及其mRNA表达升高，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-184通过在蛋白翻译水平抑制Numb1�
- 黄佛宝张昊驹刘钰罡罗丹徐如祥戴宜武
- 关键词：神经干细胞NOTCH信号通路蛋白
- R-脊椎蛋白3对小鼠神经干细胞增殖及Wnt/β-catenin通路的影响被引量：2
- 2018年
- 目的 观察R-脊椎蛋白3（Rspo3）对小鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响及其机制。方法 分离、悬浮培养孕14-15 d的CD1胎鼠大脑侧脑室下区（SVZ）NSCs并通过免疫荧光法鉴定。取第3代处于对数生长期的NSCs分为实验组和对照组，体积各为1 mL。实验组添加储存浓度为50 μg/mL的Rspo3蛋白0.8 μL（终浓度40 ng/mL），对照组添加等体积的NSCs培养液。干预后6 h通过BrdU细胞渗入实验法检测2组NSCs增殖情况。干预后4 h和8 h采用Western blotting实验检测β-catenin蛋白的表达。结果 免疫荧光染色结果显示90%以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性。经过诱导分化后，部分细胞呈神经元核抗原或胶质纤维酸性蛋白阳性，证明实验中提取分离的细胞为NSCs。BrdU细胞渗入实验法显示实验组细胞增殖率为1.56±0.03，明显高于对照组（1.04±0.04），差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blotting实验显示4 h和8 h时实验组β-catenin蛋白相对表达量分别为1.09±0.10、1.20±0.13，对照组分别为0.56±0.05、0.83±0.04，实验组明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Rspo3蛋白可在体外促进小鼠NSCs增殖，其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。
- 王瑞峰张昊驹戴宜武徐如祥
- 关键词：神经干细胞WNT/Β-CATENIN信号通路
- 脐血源神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤及其差异基因表达被引量：2
- 2014年
- 目的 评估脐血源神经干细胞（UCBNSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI）后大鼠后肢功能恢复情况,并通过基因芯片筛选出移植治疗后对照组和实验组差异表达基因,分析相关基因与损伤脊髓功能恢复的关系,以期为SCI的基因治疗打下基础. 方法 50只健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（n=10）、磷酸盐缓冲液（PBS）注射组（n=20）、UCBNSCs移植组（n=20）.假手术组仅在显微镜下行T9-11椎板打开,不做其他处理.后2组打开T9-11椎板后横断脊髓,制作大鼠脊髓全断模型.1周后UCBNSCs移植组行UCBNSCs（1×10^9/L细胞悬浮液10μL）脑室穿刺移植,PBS注射组用PBS代替.移植术后1d、1周、2周、4周、6周、8周分别对3组大鼠行血脑屏障（BBB）行为评分.第8周分别取PBS注射组和UCBNSCs移植组各7只SD大鼠,取得SCI处组织样本,行基因芯片分析,筛选出差异表达基因. 结果 PBS注射组和UCBNSCs移植组造模后均出现了瘫痪、尾部活动障碍及排尿功能障碍等.随着时间的延长,2组后肢功能均有所恢复,在术后2周、4周、6周和8周2组间差异具有统计学意义（P＜0.05）.芯片分析筛选出24个差异表达基因,其中表达上调有20个,表达下调有4个. 结论 UCBNSCs移植治疗大鼠SCI有确切疗效,通过基因芯片分析推测其可能通过分化为神经元、增加损伤微环境中神经营养因子表达、抑制炎症反应和促进损伤局部的氧供等方式发挥作用.
- 吴月奎王尚武孙起军霍铁军马建华郭海若秦家振戴宜武徐如祥
- 关键词：脊髓损伤差异基因
- 脊髓损伤的干细胞治疗研究进展被引量：3
- 2014年
- 脊髓损伤是临床上常见的中枢神经系统的严重创伤，可造成运动、感觉障碍及自主神经功能紊乱，高位损伤者甚至影响呼吸循环功能，具有极高的致残率和致死率，给患者及家属带来严重的经济和精神负担，也造成了巨大的社会压力。外伤是脊髓损伤最常见的原因，常由交通事故、坠落及暴力打伤引起，其他常见的原因有肿瘤压迫、感染、医源性损伤等。
- 吴月奎王尚武戴宜武徐如祥
- 关键词：脊髓损伤干细胞
- CASK在癫痫大鼠模型中影响癫痫发作的机制研究被引量：3
- 2015年
- 目的 探讨钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）在氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型中不同时间点的表达及其参与癫痫发作的可能机制. 方法 30只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组（n=5）和实验组（n=25）,实验组在点燃后进一步按照随机数字表法分为1、3、7、14、30d5组（n=5）.通过免疫组化、免疫荧光和Western blotting实验分别检测CASK在模型鼠海马组织中的表达变化.另将21只成年健康SD大鼠按照随机数字表法分为3组（n=7）,分别为转染组、空病毒组、对照组,水合氯醛麻醉3组大鼠后分别注入等量的CASK-RNAi-LV、LV-scrRNAi和生理盐水,点燃1h内观察此3组大鼠行为学的改变,同时运用Western blotting检测转染组与对照组大鼠CASK复合物下游分子NMDAR2b在点燃后的表达. 结果 （1）免疫组化及荧光染色结果提示,CASK仅在神经元中表达,在神经胶质细胞中不表达;实验组CASK阳性细胞数明显多于对照组;且CASK在癫痫大鼠的海马组织中表达模式为1d降至最低,后逐渐增高,直到30 d.（2）转染模型相关实验结果提示,转染组（CASK表达被抑制）大鼠癫痫发作频率和发作级别（发作20 min后）均较空病毒组及对照组大鼠明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.对照组大鼠NMDAR2b在点燃1d后开始增高,3d达到高峰,10d下降;而转染组大鼠NMDAR2b在点燃后各个时间点的表达水平较对照组大鼠均明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 CASK在癫痫大鼠中的表达量明显增加,可能通过NMDAR2b途径影响癫痫的发生与发展.
- 刘震周艳杨艺党圆圆戴宜武
- 关键词：癫痫突触慢病毒
- 干扰RNA沉默tpd52基因对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探究沉默tpd52基因表达后对胶质瘤U87细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法将携带着shRNA-tpd52(抑制tpd52的核苷酸序列)、shRNA-NC(阴性对照的核苷酸序列)的慢病毒体外转染胶质瘤细胞系U87。在转染48 h后荧光显微镜下观察表达GFP细胞数量,采用荧光定量PCR、Western blot分别检测TPD52 mRNA及蛋白表达量,MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,Annexin V和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U87细胞转染率>90%,与shRNA-NC组及空白对照组相比较,shRNA-tpd52组细胞TPD52 mRNA及蛋白表达量明显减少(P<0.01),而且细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期被阻滞在G0/G1期、细胞凋亡比例明显增加(P<0.05)。结论沉默胶质瘤细胞中tpd52基因表达后,可以有效抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。
- 秦浩高兵兵孙移坤张昊驹刘晨侯江雷黄佛宝罗丹戴宜武
- 关键词：胶质瘤细胞增殖细胞凋亡
- VEGF、Sox-2、CXCR4在不同病理分级脑胶质瘤中的表达差异及临床意义被引量：4
- 2018年
- 目的探讨VEGF、Sox-2、CXCR4在脑胶质瘤中的表达相关性及其临床意义。方法用组织免疫荧光法检测50例不同病理分级的脑胶质瘤组织VEGF、Sox-2、CXCR4蛋白的表达。结果 VEGF、Sox-2、CXCR4在正常脑组织中表达阴性;随着脑胶质瘤病理分级的增加,VEGF、Sox-2、CXCR4的表达增加,且高级别组(Ⅲ～Ⅳ级)与低级别组(Ⅰ～Ⅱ级)相比差异有统计学意义(P<0.05);VEGF、Sox-2、CXCR4在脑胶质瘤中的表达率呈正相关(r1=0.733, r2=0.735,r3=0.771,P<0.05)。结论 VEGF、Sox-2、CXCR4与脑胶质瘤的进展有密切关系,且三者之间有显著相关性,在胶质瘤的进展中起相互协同作用,可作为判断胶质瘤恶性程度的指标。
- 李鑫马建华戴宜武
- 关键词：VEGFCXCR4胶质瘤
- 岩藻黄素对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响被引量：5
- 2016年
- 目的观察岩藻黄素对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法未经处理的U87细胞作为对照组,不同浓度岩藻黄素处理的U87细胞作为实验组,比较各组细胞生存率、细胞凋亡率及自噬体、自噬溶酶体数目和分布,另比较细胞亚显微结构、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型/微管相关蛋白1轻链3Ⅰ型(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、酵母自噬基因6同系物(Beclin1)。结果 12.5、25、50、75μmol/L岩藻黄素处理组细胞生存率分别为93.19%±5.88%、73.05%±2.33%、49.95%±1.59%、25.95%±1.40%,对照组为100.00%±1.35%,25、50、75μmol/L岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05。25、50μmol/L岩藻黄素处理组细胞凋亡率分别为12.00%±0.56%、31.97%±1.83%,对照组为2.97%±0.21%,各岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05。25、50μmol/L岩藻黄素处理组细胞LC3-GFP融合蛋白转移至自噬体膜并呈斑点状分布于细胞质内,且斑点数目随药物浓度的升高而增加;对照组LC3-GFP融合蛋白弥散分布在胞质中。镜下可见对照组正常的细胞器结构;50μmol/L岩藻黄素处理组可见大量的自噬小泡、自噬体及自噬溶酶体,其中可见尚未完全降解线粒体结构。25、50μmol/L岩藻黄素处理组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ分别为0.86±0.05、0.89±0.04,对照组为0.65±0.01,各岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05;25、50μmol/L岩藻黄素处理组Beclin1相对表达量分别为0.39±0.02、0.59±0.04,对照组为0.23±0.01,各岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05。结论岩藻黄素可有效抑制U87细胞增殖,并诱导自噬的发生。
- 刘钰罡孙移坤戴宜武
- 关键词：岩藻黄素胶质瘤
- GDF11对小鼠神经干细胞增殖及TGF-β／Smads、Wnt／β-连环蛋白信号通路的影响被引量：6
- 2017年
- 目的探讨生长分化因子11（GDF11）对小鼠神经干细胞增殖及转化生长因子-β（TGF—β）／Smads、Wnt／β-连环蛋白信号通路关键蛋白表达的影响。方法分离培养及诱导分化孕14dCD1胎鼠大脑侧脑室下区的神经干细胞，采用免疫荧光染色鉴定神经干细胞特异性蛋白巢蛋白、SOX2，以及在诱导分化后鉴定神经元标志物神经核抗原（NeuN）和星型胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。取第3代神经干细胞分为实验组和对照组，实验组添加GDF11（终浓度40ng／mL）．对照组添加等体积完全培养液。采用EdU法检测2组细胞增殖情况，采用Westem blotting于培养1h、6h时检测2组细胞Smad2／3、磷酸化（p）-Smad2／3、Smad4、β-连环蛋白表达。结果免疫荧光染色显示90％以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性，诱导分化后部分细胞呈NeuN或GFAP阳性。细胞增殖实验显示：与对照组EdU阳性细胞比例（0．24±0．03）相比，实验组EdU阳性细胞比例（0．34±0．05）明显提高，差异有统计学意义（P〈0．05）。Western blotting结果显示：实验组P—Smad2／3、Smad4和β-连环蛋白表达在培养1h、6h时均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论GDF11可在体外促进小鼠神经干细胞增殖，其机制可能与TGF-β／Smad、Wnt／β-连环蛋白信号通路激活有关。
- 张昊驹黄佛宝泰浩戴宜武徐如祥
- 关键词：神经干细胞
