国家自然科学基金(30901106)
- 作品数：9 被引量：28H指数：4
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- 水温和水流对日寿金鱼孵化率、孵化时间和正品率的影响
- 2012年
- 设置18、21、24、27℃4个温度梯度和静水、微流水2种水流状态进行日寿金鱼孵化，统计各组孵化时间、孵化率及正品率。结果表明：1）水温越高，孵化时间越短，同等条件下，微流水孵化时间短于静水孵化的时间；2）18-27℃，水温对于鱼卵孵化率的差异不显著；3）水温对于金鱼孵化出的正品率差异显著。21℃时金鱼孵化出的正品率最高，达到75％左右，而在18、24、27℃这3个温度梯度仅能够达到55％左右，明显低于21℃时的正品率。实验数据表明：水温21℃采用微流水进行日寿金鱼的繁育较易取得理想效果。
- 马斌王峰程顺峰赵侠
- 关键词：水温水流孵化率正品率
- 两种致病性弧菌外膜蛋白抗原特性的分析被引量：3
- 2011年
- 采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)和苯甲基磺酰氟(PMSF)两种方法提取两种海洋致病性弧菌——鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri和秦皇岛弧菌Vibrio qinhuangdaorasp.nov.的外膜蛋白,并应用SDS-PAGE分析了其外膜蛋白的构成。电泳图谱显示,相对分子质量为44 000、36 000、34 000、26 000、23 000的蛋白条带为两种弧菌外膜蛋白中的共有条带。采用Western-Blotting法比较了两种弧菌外膜蛋白抗原性的异同,结果表明,鱼肠道弧菌外膜蛋白中相对分子质量分别为46 000、43 000、34 000、32 000、28 000、26 000的结构蛋白可同时与两种弧菌抗血清发生反应;秦皇岛弧菌外膜蛋白中相对分子质量分别为46 000、26 000的结构蛋白可同时与两种弧菌抗血清发生反应。两种弧菌中均存在相对分子质量为46 000、26 000的外膜蛋白,且具有共同的抗原性。
- 王忠邓灯刘慧程顺峰张晓君王文琪
- 关键词：外膜蛋白抗原性
- 鱼肠道弧菌间接ELISA快速检测法的建立被引量：7
- 2013年
- 为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。病原菌检测灵敏度为每孔105 cfu/mL。抗血清与迟缓爱德华氏菌、杀鲑气单胞菌、恶臭假单胞菌、鱼肠道弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻胶弧菌、秦皇岛弧菌8种水产致病菌的交叉反应结果呈阴性。用该法检测人工感染后的牙鲆和健康牙鲆,在发病鱼的肝脏、肾脏、脾脏、腹水等处检测出病原菌而健康鱼则为阴性。该技术能够准确、快速检测出鱼肠道弧菌。
- 吴晓春邓灯程顺峰刘慧姜令绪
- 牙鲆秦皇岛弧菌HQ010712-1外膜蛋白及其抗原性分析被引量：6
- 2010年
- 采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)和苯甲基磺酰氟(PMSF)2种方法提取秦皇岛弧菌HQ010712-1(Vibrio qinhuangdaora sp.nov.)外膜蛋白,结果显示Sarkosyl法提取效果较好,且所提取的主要外膜蛋白分子量为102kD、45kD、39kD、36kD、30kD、28kD、24kD、22kD;为比较该菌株与弧菌属其他细菌外膜蛋白组分及抗原性异同,以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻胶弧菌(Vibrio alginolyticus)为对照,电泳图谱显示4种弧菌外膜蛋白的分子量主要集中在22～48kD之间;利用抗秦皇岛弧菌HQ010712-1血清的免疫印迹表明菌株HQ010712-1外膜蛋白中分子量为45kD、36kD的蛋白条带呈现阳性反应,其他3种弧菌外膜蛋白中均有与该抗血清反应的条带,且分子量为36kD的反应带为菌株HQ010712-1、副溶血弧菌、溶藻胶弧菌共有。本研究旨在为进一步筛选和研究致病性弧菌的共同保护性抗原提供参考。
- 程顺峰邓灯张毅姜有声
- 关键词：外膜蛋白抗原性
- 鱼肠道弧菌单克隆抗体流式细胞术检测技术的研究被引量：3
- 2015年
- 以抗鱼肠道弧菌单克隆抗体为基础,结合流式细胞术,根据荧光信号强弱比例确定检测鱼肠道弧菌时所需单克隆抗体的最优反应量为200μL,最佳反应时间为45min。在最优反应条件下,抗鱼肠道弧菌单克隆抗体可特异性识别鱼肠道弧菌,阳性荧光信号比例达12.9%;对不同密度的鱼肠道弧菌进行重复性试验,变异系数均在5%以内,说明流式细胞术具有较好的精密度;人工感染健康牙鲆试验表明,流式细胞术检测法能快速从发病鱼的鳃、肝、脾、肾、腹水等部位检测出病原菌,而对照组为阴性;本试验建立的鱼肠道弧菌单克隆抗体流式细胞术检测技术为鱼肠道弧菌的快速检测提供了新方法。
- 邓灯吴晓春程顺峰孙小红胡春辉
- 关键词：单克隆抗体流式细胞术
- 鱼肠道弧菌外膜蛋白抗原性分析被引量：8
- 2010年
- 采用十二烷基肌氨酸钠法和苯甲基磺酰氟法提取鱼肠道弧菌外膜蛋白。SDS-PAGE图谱显示,PMSF提取的鱼肠道弧菌有19条带,Sarkosyl法提取的鱼肠道弧菌有14条带,其中111、105、87、78、61、58、53、48、45、40、36、33、32、31 kD蛋白带为2种方法共同条带,101、55、42、27、25 kD为PMSF法特有条带。此外,以制备的兔抗鱼肠道弧菌全菌血清为第一抗体,应用Western-blotting技术分析了鱼肠道弧菌外膜蛋白的抗原性,结果显示分子量为106、87、61、58、55、42、36、32 kD的8条蛋白带发生了免疫反应。
- 王忠邓灯程顺峰王仁杰秦志华王文琪
- 关键词：外膜蛋白抗原性
- 鱼肠道弧菌外膜蛋白疫苗对牙鲆免疫效果的初步研究被引量：5
- 2011年
- 为研究鱼肠道弧菌外膜蛋白疫苗对牙鲆的免疫效果,用该种疫苗对牙鲆进行了免疫试验。给牙鲆注射鱼肠道弧菌外膜蛋白疫苗,饲养25 d后分别用鱼肠道弧菌、鳗弧菌和溶藻弧菌进行攻毒,20 d后分别统计各组鱼的免疫保护率。结果表明,该疫苗对鱼肠道弧菌、鳗弧菌和溶藻弧菌的免疫保护率分别为84.6%、30.8%、33.3%。
- 张新明程顺峰
- 关键词：牙鲆免疫
- 鱼肠道弧菌单克隆抗体的制备及应用被引量：3
- 2013年
- 以鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri为抗原免疫小鼠,用PEG法将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,分别采用酶联免疫吸附(ELISA)技术和间接免疫荧光抗体(EFAT)技术筛选强阳性杂交瘤细胞株,亚克隆阳性细胞株,获得5株抗鱼肠道弧菌单克隆抗体(1C6、1D8、2D7、2D10、2E3)。Western blotting分析结果显示,单抗2D10与相对分子质量为44 200、36 700的鱼肠道弧菌蛋白发生特异性结合;用流式细胞术(FCM)检测单抗强度,结果显示阳性荧光比例为13.63%,阴性对照荧光比例不足1%;人工感染牙鲆试验结果表明,运用该单抗能够建立鱼肠道弧菌的快速诊断方法。
- 吴晓春邓灯刘慧程顺峰张晓君
- 关键词：单克隆抗体
- 鱼肠道弧菌免疫检测方法的研究被引量：3
- 2011年
- 采用灭活的鱼肠道弧菌作为抗原,制备兔抗血清,建立了鱼肠道弧菌的间接荧光抗体检测技术(indirect im-munofluorescence assay test,IFAT)、Western-blotting免疫印迹检测技术。IFAT结果显示阳性信号覆盖整个菌体,明亮,清晰,荧光信号呈长弧形且两端钝圆,与鱼肠道弧菌形状一致。Western-blotting结果显示共10条蛋白带发生免疫反应,其中6条蛋白带结果较清晰,显示出较强的特异性免疫反应,阴性对照组无条带。IFAT和Western-blotting结果说明所建立检测方法能够准确、快速的检测出鱼肠道弧菌。
- 刘慧邓灯王忠程顺峰孙玉霞
- 关键词：免疫印迹技术
