山东省自然科学基金(Y2006D09)
- 作品数：15 被引量：102H指数：7
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- 相关机构：山东农业大学山东省畜牧兽医总站更多>>
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- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 禽波氏杆菌免疫荧光检测和抗体检测ELISA方法的建立与应用被引量：7
- 2008年
- 采用改良的Wooldridge法提取了禽波氏杆菌外膜蛋白(OMP),通过Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量为320μg/mL,SDS-PAGE电泳检测发现禽波氏杆菌P5株OMP含有5种成分,相对分子质量分别为58、47、41、36、24 ku;P8株OMP含有6种成分,相对分子质量分别为58、47、41、38、211、6 ku。将提取的禽波氏杆菌OMP免疫健康青紫兰兔,每周免疫1次,共免疫4次,获得了兔抗禽波氏杆菌OMP高免血清,以此高免血清建立了检测禽波氏杆菌的间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)方法,并对其工作条件进行了优化和筛选,试验结果表明间接ELISA抗原、抗血清最佳工作浓度分别为10μg/mL、1∶12 800,酶标二抗工作浓度为1∶5 000,最佳包被条件为4℃2、4 h,最佳封闭条件为37℃1、h;间接免疫荧光(IFA)兔高免血清释释度为1∶20,FITC标记羊抗兔IgG稀释度为1∶10,感作时间为45 min时,禽波氏杆菌特异性黄绿色荧光最清晰,非特异性荧光最弱。经临床检测证明该两种方法均具有简便、快速、特异性强的特点,为禽波氏杆菌病的流行病学、血清学调查和临床快速诊断奠定了基础。
- 杨春晓王小娥刘冠华肖海君崔金生朱瑞良
- 关键词：禽波氏杆菌OMP间接ELISA
- 禽波氏杆菌外膜蛋白A的克隆测序与生物信息分析被引量：5
- 2011年
- 本文旨在克隆禽波氏杆菌外膜蛋白OmpA的编码基因,并预测OmpA蛋白二级结构和B细胞抗原表位,从而探讨禽波氏杆菌外膜蛋白OmpA在免疫保护中所起的作用。作者对禽波氏杆菌的外膜蛋白ompA基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件和方法,对禽波氏杆菌OmpA蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行预测。禽波氏杆菌ompA基因全长597bp,编码199个氨基酸。二级结构以无规卷曲为主,有少量的α-螺旋和β-片层,少见β-转角;推测OmpA蛋白有5个B细胞优势抗原表位区域、2个糖基化位点。本研究为进一步分析禽波氏杆菌免疫机理、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定理论基础。
- 谭燕玲朱瑞良王慧王新建魏凯孙振红盛鹏程
- 关键词：禽波氏杆菌外膜蛋白AB细胞抗原表位
- 禽波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫原性的检测被引量：23
- 2007年
- 为研究禽波氏杆菌OMP的免疫原性,试验采用超声波破碎、TritonX-100处理技术提取了禽波氏杆菌OMP,采用Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量,进行了SDS-PAGE检测,然后制备油乳剂OMP免疫抗原,对1日龄雏鸡分别以0.3mL(OMP90μg)、0.5mL(OMP150μg)、0.8mL(OMP240μg)的剂量颈部皮下接种。结果:禽波氏杆菌OMP含量为300μg/mL;禽波氏杆菌OMP最佳免疫剂量为0.5mL/只;通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试,抗体效价在1:28以上能抵抗致死量禽波氏杆菌的攻击。据间接ELISA法检测的抗体水平可知,抗体的持续时间足以保护雏鸡避过易感日龄,试验发现OMP具有良好的免疫原性。本试验结果将为禽波氏杆菌OMP单克隆抗体的制备、快速诊断试剂盒的研制、亚单位疫苗的开发奠定良好的基础。
- 胡晓娜朱瑞良刘红珍毕建敏王伟李新苍
- 关键词：禽波氏杆菌外膜蛋白ELISA免疫原性
- 支气管败血波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫效果的检测被引量：3
- 2008年
- 本研究以小鼠为实验动物模型,研究支气管败血波氏杆菌的外膜蛋白(OMP)和其中的有效保护抗原成分(OMP68)的免疫原性及免疫保护作用。本研究利用改进的Wooldridge的方法提取了支气管败血波氏杆菌P11和P13的OMP,利用SDS-PAGE比较了2株之间差异,采用Western-blotting进行了分析并确定了P13菌株OMP(P13-OMP)中的有效保护性抗原成分,采用电洗脱方法获的分子量为68kD的P13-OMP有效保护抗原成分(OMP68),然后制备了油乳剂P13的全菌、P13-OMP和OMP68免疫抗原。抗体动态变化:将清洁级小鼠70只随机分成7组,10只/组,用油乳剂P13的全菌和不同剂量的P13-OMP和OMP68免疫抗原分别免疫,采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体水平并分析抗体动态变化;主动免疫保护试验:将清洁级小鼠80只随机分成8组,10只/组,分别采用制备的油乳剂P13-OMP(OMP25μg/只)、OMP68(25μg/只)和P13菌体免疫抗原在免疫10d后,分别用100LD50的P11和P13腹腔攻毒,然后统计保护率并分析免疫原所提供的免疫保护力。免疫P13-OMP和OMP68油乳剂抗原后,7d时,抗体水平开始逐渐上升,42d时,抗体水平分别达到215.3和214.8,然后逐渐下降,70d时,抗体水平分别达到29.1和210.2。主动免疫时,P11和P13攻毒的P13-OMP免疫组分别均得到9/10和9/10的保护,OMP68免疫组分别均得到9/10和10/10的保护,而P13全菌免疫组分别得到4/10和6/10保护,对照组全部死亡。P13-OMP和OMP68抗原均具有良好的免疫原性和免疫保护作用,为支气管败血波氏杆菌OMP亚单位疫苗的研制奠定了良好的理论基础。
- 肖海君闫振贵崔金生刘冠华王小娥杨春晓朱瑞良
- 关键词：支气管败血波氏杆菌小鼠外膜蛋白免疫原性
- 芦荟的功效及其在畜禽业的开发潜能被引量：2
- 2010年
- 芦荟属于多年生百合科常绿草本植物，具有肉厚多汁的特点，主产于热带和亚热带地区。芦荟含丰富的营养成分，含大量B族维生素，8种人体必需氨基酸，18种微量元素及大量糖类、蒽醌类物质等多种生物活性成分，具有抗菌、抗紫外线辐射、抗病毒、抗氧化、提高人体免疫机能等功能，并对肿瘤细胞和艾滋病病毒有抑制作用。
- 孙振红魏凯朱瑞良
- 关键词：芦荟属畜禽业亚热带地区生物活性成分抗紫外线辐射B族维生素
- 禽波氏杆菌分离株的16S rRNA基因序列分析被引量：10
- 2008年
- 采用PCR方法对本实验室分离保存的10株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株,扩增其16SrRNA基因的5′端片段(783bp),并测定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析软件将所获得的序列与GenBank中的禽波氏杆菌序列进行比较,由此构建禽波氏杆菌菌株的系统发育树。结果显示,10株禽波氏杆菌核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列的同源性为82.0%～82.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌核苷酸序列的同源性均为99.2%～99.9%,其中P9(山鸡波氏杆菌)、P11(兔支气管败血波氏杆菌)与P14(猪支气管败血波氏杆菌)分别发生1个核苷酸的缺失。本试验结果表明,16SrRNA序列分析是鉴定禽波氏杆菌的一种快速而准确的方法。
- 刘红芹朱瑞良胡晓娜王伟李新苍毕建敏刘红珍
- 关键词：禽波氏杆菌RRNA核苷酸序列
- 支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立和应用被引量：4
- 2009年
- 根据支气管败血波氏杆菌ptxA基因设计1对引物,扩增特异的872bp核酸片段,建立了应用PCR检测支气管败血波氏杆菌的方法。特异性试验结果表明,3株支气管败血波氏杆菌参考菌株均能扩增出872bp特异性的核酸片段,兔源性的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,PCR的最低检出限量为210个支气管败血波氏杆菌。利用建立的PCR检测方法对22株从山东省泰安地区某兔场采集的疑似兔支气管败血波氏杆菌病病兔鼻黏液棉拭子进行检测,结果19株为阳性。并同时进行普通血清学方法和细菌学方法,对检测结果进行了比较,结果显示,PCR方法阳性检出率高于其他检测方法。
- 肖海君崔金生翁立雪王小娥杨春晓曲朝杰朱彩霞刘冠华朱瑞良
- 关键词：支气管败血波氏杆菌PCR
- 鸡胚胎性病原菌多重PCR检测方法的建立被引量：14
- 2011年
- 为建立同时检测禽波氏杆菌(Bordetella avium)、沙门氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)4种导致鸡胚死亡病原菌的多重PCR方法,本研究根据B.avium的ompA基因、Salmonella的invA基因、E.coli的phoA基因和P.aeruginosa的toxR基因序列,各设计一对特异性引物进行多重PCR反应,并对反应体系和条件进行优化。结果显示,4对引物分别扩增出597bp、724bp、372bp和278bp的目的条带;并且特异性强不与其他非目的菌发生反应。经优化B.avium、P.aeruginosa和E.coli多重PCR检测灵敏度达到104cfu/mL,而Salmonella为103cfu/mL。本研究建立的多重PCR方法为相关病原菌的快速检测提供方法。
- 谭燕玲朱瑞良王慧王新建魏凯孙振红盛鹏程
- 关键词：禽波氏杆菌沙门氏菌绿脓杆菌多重PCR
- 兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测被引量：8
- 2008年
- 2004年,山东省某一大型养兔场的20~30日龄幼兔突然大批发病死亡。病兔早期精神不振,多数病兔鼻腔流出脓性鼻液,随着病程的延长逐渐表现为呼吸困难,并出现鼻鼾声,以体况瘦弱,腹泻为主要症状。从中主要分离到4株细菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性、血清学反应特性等将分离菌鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。然后对所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株进行(G+C)mol%含量的测定以及16SrRNA的扩增,结果(G+C)mol%含量为61.7%~62.4%,与Kersters K结果相符(61.6%~62.6%);而该菌16SrRNA核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为82.7%,与本实验室保存的禽波氏杆菌及兔败血波氏杆菌参考菌株S80103株同源性高,分别为99.7%和99.9%。利用所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株制备免疫原,通过免疫孕前母兔,使仔兔获得母源抗体,而使幼仔兔获得早期保护,效果较好。
- 王伟朱瑞良李新苍胡晓娜王永花
- 关键词：波氏杆菌免疫
- 奇异变形杆菌与沙门氏菌双重PCR检测方法的建立
- 偏简单目的:建立快速检测奇异变形杆菌与沙门氏菌的双重PCR方法。方法:根据奇异变形杆菌尿素酶合成的正向调节因子R基因(ureR)和沙门氏菌属侵袭性抗原保守基因(invA)设计特异性引物,建立其双重PCR检测方法,并对反应...
- 王慧朱瑞良谭燕玲魏凯王新建孙振红盛鹏程
- 关键词：奇异变形杆菌沙门氏菌双重PCR
- 文献传递
