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副鸡禽杆菌分子生物学研究进展被引量：2: 2011年; 副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎的致病菌,主要引起鸡的生长发育受阻,产蛋量下降,给养鸡业带了相当大的经济损失。随着分子生物学技术的不断应用,副鸡禽杆菌的鉴定、分型技术、免疫保护相关基因和抗原分析等分子水平上的研究已取得了新的进展。综述了近年来有关副鸡禽杆菌的研究概况,为今后的相关研究提供参考。; 梁玉荣王雪敏吕学泽张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌分子生物学鉴定分子分型技术抗原分析

副鸡嗜血杆菌基因文库的构建与筛选被引量：3: 2012年; 为了筛选副鸡嗜血杆菌的体内表达基因,提取了副鸡嗜血杆菌的全基因组,构建了副鸡嗜血杆菌基因组的pET系统表达文库。运用PCR及核酸内切酶(SalⅠ+NdeⅠ)鉴定基因文库,并以病原菌吸附后的康复血清作为探针,采用菌落原位杂交的方法对基因文库进行筛选。结果显示,重组质粒中有0.5～2kb的片段插入,99%的基因包含在基因文库中;重复筛选后得到的阳性克隆再经过PCR与SalⅠ+NdeⅠ酶切鉴定后定向测序,并对测序结果在NCBI上进行分析后发现筛选获得的基因中,有1个表达为转运谷氨酰还原酶、1个表达为转录终止因子,1个表达为荚膜合成域2,还有2个表达为保守假想蛋白。结果表明,本研究应用体内诱导抗原技术(IVIAT)筛选到了一些副鸡嗜血杆菌体内诱导表达基因,并对基因的功能做了初步探讨,在找寻副鸡嗜血杆菌在体内生存以及致病关键基因的道路上前进了一步,为传染性鼻炎的预防和治疗积累了有价值的资料。; 王雪敏梁玉荣吕学泽张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡嗜血杆菌

副鸡禽杆菌aroA基因克隆及序列分析: 2012年; 旨在建立一种方便、高效的同源保守基因克隆方法,并对副鸡禽杆菌aroA基因进行克隆和结构分析。本试验以副鸡禽杆菌国际标准株145(C-3)基因组DNA为模板,用CODEHOP软件设计针对aroA基因的兼并引物,并运用改进的染色体步移方法扩增aroA基因序列;对该核酸序列及其编码蛋白进行结构分析并与该菌其他血清型及相关细菌进行序列比对分析。结果显示,获得了完整的aroA基因,全长1 293 bp。该基因编码由430个氨基酸组成的多肽,具有2个功能位点和5个抗原表位位点。不同血清型间氨基酸序列同源性为88.1%-100%,与其他相关细菌核酸同源性为75%以上。首次将兼并PCR和改进的染色体步移技术结合起来对副鸡禽杆菌aroA基因全长进行扩增研究,得到了预期的结果。; 吕学泽梁玉荣贺云霞张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌基因克隆蛋白结构分子进化

副鸡禽杆菌外膜蛋白GcbG的表达及免疫效果研究被引量：5: 2016年; 为研究副鸡禽杆菌外膜蛋白GcbG的免疫原性,克隆了副鸡禽杆菌荚膜蛋白合成相关的编码基因gcbG,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-gcbG,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行诱导表达。结果表明,重组菌在28℃培养条件下经1mmol/L的IPTG诱导6h可分泌表达GcbG蛋白,且其表达量最高。Western-blot分析表明,所表达的蛋白能与副鸡禽杆菌阳性血清发生特异性免疫印迹反应,说明所表达的蛋白具有较好的反应原性。动物试验表明,所表达的蛋白能为鸡提供较好的保护力。上述试验结果为进一步研究荚膜蛋白的生物学特性及亚单位疫苗的开发奠定了基础。; 赵成全路明华李淑芳张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌原核表达动物试验

副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2基因的克隆及表达被引量：1: 2013年; 为了获得副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2分泌性蛋白分子,克隆了该蛋白编码序列,约1 081bp,成功构建pET28a-OmpP2原核表达质粒,并将其转化到大肠埃希菌BL21(DE3)菌株。经0.4mmol/L终浓度IPTG、32℃诱导5h后,目的蛋白表达量最高。Western blot检测表明,该蛋白与副猪嗜血杆菌阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白有良好的反应原性,为今后研究OmpP2的生物学特性及对HPS的血清学诊断、亚单位疫苗的开发奠定了基础。; 赵成全冉多良路迎迎路明华贺云霞张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副猪嗜血杆菌克隆原核表达

免疫活性肽的研究进展被引量：11: 2011年; 免疫活性肽是源于蛋白质的多功能化合物,具有促进和调节免疫功能的作用;其以活性高、来源广、稳定性强等优点受到国内外的广泛关注,并进行了大量的探究与试验。作者对不同来源的各种活性肽作一概述。; 吕学泽王雪敏梁玉荣王宏俊

副鸡禽杆菌的指纹图谱分型被引量：3: 2011年; 为了探索副鸡禽杆菌的新型分型方法,以肠杆菌基因间共有重复序列(ERIC)和随机核苷酸多态性片段(RAPD)为靶序列进行PCR扩增,对所得指纹图谱用POPGENE和MEGA4.0软件进行遗传距离的计算和聚类分析。结果显示,2种方法均能得到丰富﹑稳定的指纹图谱,其多态性为85.7%(18/21);10个国际标准株、血清C型疫苗株以及4个国内分离株可分为11个谱型,聚为4类。划分的11个谱型可以和现有分型方法中的不同亚型一一对应,提示这种方法可以区分不同血清亚型。表明指纹图谱技术可以有效地区分不同菌株,从而为分子流行病学调查和疫苗研制提供了参考。; 王雪敏吕学泽梁玉荣贺云霞张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌 ERIC-PCR RAPD-PCR 聚类分析

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北京市自然科学基金(6102009)