辽宁省高校创新团队支持计划(2006T063)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 锌对人脐带血间充质干细胞的细胞周期蛋白D2和细胞周期蛋白依赖性激酶4含量的影响
- 2010年
- 目的探讨锌对人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood-drived mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)细胞周期蛋白D2(cyclin D2)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase4,CDK4)、DNA和总蛋白含量的影响。方法采用密度梯度离心法分离培养hUCBMSCs。传代培养时将实验分为7组,对照组采用含15%FBS的DMEM培养基行传代培养,6个锌处理组于上述培养基中加入ZnSO4?7H2O,使锌终浓度分别为0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5mg/L。用流式细胞仪检测第3代hUCBMSCs表面抗原CD29、CD34、CD44和CD45;MTT法检测细胞活性,筛选最佳锌浓度组定为实验组。取实验组和对照组第3代hUCBMSCs绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞DNA含量和增殖周期,Western blot检测总蛋白及cyclin D2和CDK4含量。结果 hUCBMSCs表面抗原CD29和CD44阳性表达率均>70%。MTT检测示,2.5mg/L浓度组细胞活性最高,定为实验组。培养7、14、28d,实验组hUCBMSCs的总蛋白含量、DNA含量、cyclin D2和CDK4含量均明显高于对照组(P<0.01);细胞增殖指数、S期细胞百分比均较对照组明显升高(P<0.01)。结论 0.5～4.5mg/L浓度的锌能增强hUCBMSCs活性,其中2.5mg/L为最佳浓度,可促进hUCBMSCs增殖和DNA复制,增加细胞cyclin D2、CDK4和总蛋白含量。
- 郑德宇杨依勇赵凯郑仕杰秦书俭
- 关键词：锌人脐带血间充质干细胞细胞周期蛋白D2
- 脐带血间充质干细胞的成骨诱导及与β-磷酸3钙的生物相容性被引量：3
- 2010年
- 目的探讨脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)的成骨诱导及与β-磷酸3钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)的生物相容性。方法在无菌条件下抽取人脐血,用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞,接种到含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中。单个核细胞行贴壁培养后,进行细胞形态学观察,绘制细胞生长曲线,分析细胞周期,检测细胞表面抗原;应用条件培养基进行成骨诱导后,应用免疫组织化学方法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)的表达,应用放免方法分析骨钙素(osteocalcin,OCN)的含量、荧光法检测细胞内钙离子的含量;与β-TCP复合培养后,用扫描电镜检测成骨诱导后的UCB-MSCs与β-TCP的生物相容性。结果采用Percoll(1.073g/ml)分离的脐血间充质干细胞大小较为均匀,梭形或星形的成纤维细胞样细胞。细胞生长曲线测定表明接种后第5d细胞进入指数增生期,至第9d后数量减少;流式细胞检测表明50%～70%细胞为CD29、CD45和CD105阳性;成骨诱导后,UCB-MSCs内AKP、培养基中的OCN含量和细胞内钙离子的含量均明显高于对照组(p<0.01);成骨诱导的细胞在β-TCP表面生长良好,细胞周围有白色的钙盐沉积。结论 UCB-MSCs成骨诱导后具有骨细胞特性,与β-TCP具有良好的生物相容性,可作为骨组织工程的种子细胞。
- 郑德宇杨依勇朱慧敏秦书俭姚素艳
- 关键词：生物相容性人脐血间充质干细胞
- 脂肪间充质干细胞的分离培养和鉴定被引量：5
- 2010年
- 背景:近年来的研究发现,在脂肪组织中也存在这与骨髓间充质干细胞类似的间充质干细胞。脂肪组织可以从美容吸脂中获得,来源丰富,取材方便,蕴藏着巨大的临床应用价值。目的:分离培养人脂肪间充质干细胞并检测其生物学特性。方法:用离心的方法获得人脂肪间充质干细胞,接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中行贴壁培养。并进行细胞形态学观察,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原。结果与结论:采用消化、离心分离获得的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样。细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期,至第9天后数量减少;流式细胞仪检测表明超过90%细胞为CD29、CD45和CD105阳性。提示体外分离培养脂肪间充质干细胞生长稳定,可作为组织工程的种子细胞。
- 姚素艳杨依勇秦书俭郑德宇
- 关键词：脂肪间充质干细胞流式细胞仪免疫细胞化学
