广东省医学科学技术研究基金(A2012078)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 噬菌体抗体库中筛选特异结合新甲型H1N1病毒scFv分子的研究
- 2012年
- 目的从人源化噬菌体抗体库中筛选到能高亲和性、特异结合新甲型H1N1流感病毒的单链抗体,为分析H1N1病毒抗原中和表位的活性位点和人源化治疗单抗奠定基础。方法将细胞培养的新型H1N1病毒毒株,经超速离心浓缩纯化后,获得纯的新甲型H1N1病毒,以新甲型H1N1病毒为靶蛋白,以亲和结合为原理,筛选噬菌体scFv抗体文库,经过3轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆。结果经过3轮富集性的亲和筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了4株能特异结合新甲型H1N1病毒,而不结合季节性H1N1病毒的单链抗体分子,且PCR扩增都得到了长为368、527和935bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段。结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合新甲型H1N1病毒的单链抗体片段,可为进一步研发新甲流的H1N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定新甲型H1N1病毒中的抗原决定簇提供结构信息。
- 吴锦银武婕
- 关键词：噬菌体文库
- 2011—2015年广东省H3N2亚型流感病毒血凝素基因变异和进化分析被引量：4
- 2015年
- 目的揭示2011-2015年广东地区甲型H3N2毒株血凝素（HA）基因进化特征和变异特点。方法采用时空抽样方法抽样，测定2011—2015年广东甲型H3N2毒株HA核苷酸序列，同时检索全球HA序列作为对照，采用MEGA5．05、BEAST v1．7．0和BioEdit7．1．3软件对HA基因核苷酸序列进行比对和分析。结果广东48株H3N2流感病毒的HA序列核苷酸同源性为96．4％-100．00％，2013-2015年广东H3N2亚型流感病毒HA基因与南半球疫苗株A／Switzerland／9715293／2013的同源性为97．8％～98．7％，抗原性较为接近。序列系统进化分析显示，其进化规律都是沿着树枝主干随着时间推移向上延伸，广东毒株主要分布在3C．3a分支，2015年部分毒株出现在3C.2a分支。2011—2015年HA基因共出现116个氨基酸位点突变，其中12个氨基酸位点突变涉及4个抗原表位，N241D（N225D）和K192C突变发生在受体结合部位和其中的190螺旋区内。结论2011-2015年广东甲型H3N2毒株HA抗原变异明显，抗原变异的积累可能出现抗原漂移和流感暴发，应该加强流感病原学监测，及时发现新的流感变异株，为流感防控和降低流感对公众健康危害提供科学依据。
- 梁丽君倪汉忠张欣曾宪鍫邹丽容李来庆宋颖超黄平武婕
- 关键词：流感病毒H3N2亚型血凝素
