江西省自然科学基金(0640089)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：程晓曙鲍慧慧王玲陈琦李萍更多>>
- 相关机构：南昌大学第二附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 热休克蛋白22与心肌保护
- 2009年
- 热休克蛋白22是小分子热休克蛋白亚家族中的成员之一,广泛分布于哺乳动物的各种组织中,如心脏和骨骼肌等,分子量为21.6kD。近来研究发现,热休克蛋白22可通过促进细胞存活,抑制细胞凋亡,参与糖代谢及分子伴侣样作用,对缺血缺氧等应激损伤的心肌细胞具有显著保护作用。
- 鲍慧慧程晓曙
- 关键词：应激细胞凋亡分子伴侣
- 构建人热休克蛋白22基因真核表达载体pEGFP-N1／HSP22及在血管内皮细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 背景:已有实验证实,人热休克蛋白22(Heat shock protein22,HSP22)存在于人的多种组织中,但构建其真核表达质粒是否可转染人血管内皮细胞并完整表达。目的:构建pEGFP-N1/HSP22真核表达质粒并观察在内皮细胞中的表达。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/10在南昌大学第二附属医院分子中心完成。材料:pEGFP-N1真核表达质粒及DH5α为南昌大学第二附属医院分子中心保存,MCF-7细胞来源于南昌大学生化实验室馈赠,人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)株购至南京基凯生物技术公司。方法:采用反转录聚合酶链式反应从人MCF-7细胞中扩增热休克蛋白22基因,将热休克蛋白22基因连接到真核表达载体pEGFP-N1中,并转化DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定。用脂质体法将重组质粒转染人脐静脉血管内皮细胞。主要观察指标:荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应法及Western blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达。结果:①琼脂糖凝胶电泳检测聚合酶链反应扩增产物,热休克蛋白22基因片段长约613bp,与预期分子量相符,测序结果证实克隆完全正确;其阳性克隆进行酶切鉴定与热休克蛋白22理论值相符。②反转录-聚合酶链反应法检测转染的人脐静脉血管内皮细胞中有热休克蛋白22mRNA表达;Western blot检测可见一特异性热休克蛋白22蛋白条带存在。结论:成功构建了携带人热休克蛋白22及pEGFP-N1真核表达质粒,并验证已在人脐静脉血管内皮细胞中表达。
- 鲍慧慧程晓曙陈琦洪葵李萍王玲
- 关键词：热休克蛋白克隆转染
- 稳定表达人热休克蛋白22内皮细胞株的构建和鉴定
- 2011年
- 背景:热休克蛋白22的应激表达可能对缺氧复氧内皮具有一定的保护作用。目的:建立稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株。方法:EcoRⅠ/kpnⅠ双酶切鉴定真核表达重组质粒pEGFP-N1-HSP22。脂质体法以重组质粒pEGFP-N1-HSP22转染人脐静脉内皮细胞,G418筛选,获得G418抗性单克隆细胞。用荧光显微镜、RT-PCR及Western-blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达。结果与结论:经双酶切电泳检测重组质粒pEGFP-N1-HSP22符合预期大小片段。稳定转染的单克隆人脐静脉内皮细胞中,荧光显微镜观察到每个细胞均有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western-blot检测到热休克蛋白22mRNA和蛋白表达。说明成功获得稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株。
- 鲍慧慧陈琦王玲程晓曙
- 关键词：人脐静脉内皮细胞质粒
