国家自然科学基金(81101704)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：林红唐小军刘琼琼朱进冯振卿更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学江苏省血液中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京市医学科技发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析被引量：1
- 2013年
- 目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长、增殖和侵袭特性的影响。方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2)。用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力。结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖、克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多。结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用。
- 刘玉唐小军曹清丁贵鹏张慧林王欢郑峰徐凛锋林红
- 关键词：NIH3T3真核表达
- 人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：2
- 2014年
- 目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。
- 王欢刘琼琼唐小军徐鑫褚楚熊四平郑峰童华朱进冯振卿林红
- 关键词：真核表达系统CHO胰腺癌
- 人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化被引量：5
- 2012年
- 目的 :探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件。方法 :将含有抗Trop-2 Fab抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度、诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性。结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值。结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础。
- 王小英林红张慧林仇金荣丁贵鹏唐小军陈汐敏唐甜刘琼琼冯振卿朱进
- 关键词：原核表达免疫学检测
