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2010年六安市肠道病毒71型的分子流行病学特征被引量：4: 2011年; 目的:探讨六安市手足口病患者中EV71的流行趋势及其基因特征,为手足口病的进一步防控提供科学依据。方法:六安市疾控中心从手足口病患儿中采集咽拭子标本进行肠道病毒核酸检测,选取其中8份EV71核酸阳性标本进一步进行VP1全基因序列测定,结果使用Bioedit和DNA Star软件与世界各地EV71各型参考株及我国大陆的EV71流行株序列进行对比分析,构建种系进化树。结果:8株病毒核酸VP1基因全长均为891个核苷酸,编码297个氨基酸,与我国大陆分离的C4a基因型最为相近,核苷酸同源性在96.7%～99.4%之间,氨基酸同源性在97.0%～100%之间;而与A、B基因型参考株差异较大,核苷酸同源性分别为82.6%～83.2%、83.1%～85.0%;氨基酸同源性分别为96.6%～97.0%、96.0%～97.7%;说明本文的8株病毒均属于EV71 C4a基因型。结论:六安市2010年EV71流行株在种系进化上与我国大陆近几年分离的毒株具有较高的同源性,同属于C4a基因型,目前C4a亚型病毒在我国大陆可能有较广泛的分布和传播。本研究对于肠道病毒的基础研究和防范EV71在中国的大规模暴发与流行具有重要意义.; 常宏伟张文艳范玉珍李开春李朝阳俞海洋何军丁业荣杨卫高大维; 关键词：肠道病毒71型 VP1基因分子流行病学进化树

HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究被引量：1: 2013年; 目的观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMVAD169株能跨种属感染MEF提供依据。方法将100TCID50HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达。结果观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMVAD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势。结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖。; 吉阳任鹏陈敬贤王明丽; 关键词：人巨细胞病毒小鼠胚胎成纤维细胞

实验室快速检测细胞株支原体污染的方法研究: 2010年; 目的建立快速可靠的实验室检测细胞株培养中支原体污染的方法。方法采用DNA荧光染色试剂对本实验室11株细胞进行荧光染色观察与分析；同时从常见污染细胞的支原体16SrRNA中选择两段高度保守的核酸序列，作为支原体引物，采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）法对同一批细胞株进行检测，并对两种检测结果进行比较。结果采用DNA荧光染色法检出11株细胞中有2株细胞出现阳性，阳性率为18．2％；采用PCR方法检测11株细胞，有4株细胞出现阳性，阳性率为36．4％。通过两种方法比较可以发现：DNA荧光染色法检测结果阳性的细胞株用PCR方法检测结果也是阳性。结论上述两种方法均能有效地检出细胞株中的支原体污染，DNA荧光染色法虽较PCR法灵敏度低，但操作简便易观察；而PCR法成本较高，将两种方法结合应用，对DNA荧光染色法可疑阳性的标本再进行PCR检测，既提高阳性检出率，又节约了成本。; 张玮王明丽; 关键词：支原体属聚合酶链反应污染

HCMV-HIV 共感染患者 HCMV gN 基因型分析: 2015年; 目的：了解HIV感染者中人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus， HCMV）糖蛋白N （ glycoprotein N， gN）的型别分布；探讨HCMV-HIV共感染对患者疾病进程的影响及不同gN基因型感染与获得性免疫缺陷综合征（ acquired immuno-deficiency syndrome，AIDS）发病和相关死亡的关系。方法对359例HIV感染者进行HCMV pp65抗原血症检测，利用HCMV gN（UL73）基因巢式PCR扩增HCMV活动性感染患者全血DNA，限制性核酸内切酶MboⅠ、ScaⅠ和SalⅠ对巢式PCR产物进行限制性片段长度多态性分析（ restricted fragment length polymorphism analysis， RFLP），队列随访研究不同型别HCMV感染与AIDS患者发病和死亡的关系。结果 HCMV pp65抗原血症检测发现，359例HIV感染者中HCMV活动性感染患者28例，对其中20例HCMV活动性感染患者的全血DNA样本进行PCR-RFLP分析，结果表明，HIV感染患者中HCMV gN基因型分布如下：gN-3a，4／20（20％）；gN-1，4／20（20％）；gN-4b，1／20（5％）；gN-4d，1／20（5％）；混合感染，10／20（50％）；在随访期内，HCMV UL73基因阳性的HIV感染者更易转变为AIDS患者（RR＝9．78），且gN-1和gN-4型感染者发病和相关死亡风险是其他基因型的4．6倍（P＜0．05）。结论 HCMV活动性感染可能会加速HIV感染者疾病进程，其中以gN-1和gN-4型HCMV活动性感染相对危险度最高。; 俞俊岭吴建军胡中旺类延花李国兰张文昌赵俊张俊玲甘霖余莉陈敬贤王明丽; 关键词：人类免疫缺陷病毒人巨细胞病毒限制性片段长度多态性分析

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核细胞稳定表达及其免疫反应性的初步研究被引量：5: 2015年; 目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒（VZV）糖蛋白E（g E）的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选出稳定表达VZV g E的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV g E的mRNA,Western blot和间接免疫荧光法检测g E的免疫反应性,表达产物经Ni2＋-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-Ig G抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到g E的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,g E具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有g E融合蛋白,表达量约为0.632 mg/ml,纯度约为90%。ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-Ig G抗体,总阳性率为81.89%,特异度和灵敏度分别为93.75%和88.24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA血清学检测方法有助于VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。; 伊兴旭陈敬贤甘霖王明丽; 关键词：水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E 血清学试验

IFN-λ及其抗病毒作用机制被引量：2: 2016年; 最近发现的Ⅲ型IFN家族由IFN-λ1、IFN-λ2、IFN-λ3（也称作IL-29、IL-28A、IL-28B）和IFN-λ4组成。IFN-λ通过结合IFN-λR1和IL-10R2组成的异二聚体受体复合物，激活Janus激酶一信号转导及转录活化因子信号通路，诱导IFN刺激基因的表达并发挥生物学作用。近年来，对IFN-λ抗病毒作用的研究十分广泛，IFNλ与HCV感染引起的免疫应答密切相关。IL-28B的单核苷酸多态性和新发现的IFN-λ4与HCV的自发清除也有关，预示IFN-λ在HCV感染治疗中具有潜在作用。此文介绍了IFM-λ的抗病毒作用机制及其在HCV感染临床治疗中的研究进展。; 陈薇赵俊王明丽; 关键词：干扰素类白细胞介素类抗病毒药肝炎丙型

人巨细胞病毒病毒体的组装研究新进展: 2013年; 阐明人巨细胞病毒(HCMV)病毒体的组装过程对研究HCMV致病分子机制有重要意义,同时可为抗病毒药物的设计与运用提供新的思路。HCMV组装可概括为两大阶段:初期为入核阶段,主要为核衣壳组装。在胞质中表达的病毒蛋白形成多种形式的多聚体并进入细胞核,在核内相互作用形成衣壳并将病毒DNA装入衣壳中,核衣壳初步形成。第二阶段为出核阶段,主要涉及被膜与包膜的组装。在核中形成的原始核衣壳出核移至胞质,最终在胞质中组装完成。此过程极其复杂,涉及众多蛋白间相互作用及宿主细胞的参与。值得一提的是,组装过程中多种蛋白的变异会导致病毒复制失败。组装完成的病毒体经修饰成熟释放出细胞后,再感染新的宿主细胞。本文对HCMV病毒体组装机制的最新研究作一综述。; 毛有胜贾淑芳计晓李增王明丽; 关键词：人巨细胞病毒核衣壳被膜包膜

6岁儿童罹患头部带状疱疹1例: 2015年; 1病例资料患儿，男，6岁，因眼睛疼痛1个月，头部皮疹伴瘙痒3周就诊。1个月前眼睛疼痛，被当地医院诊断为“角膜炎”，对症治疗后疼痛缓解。但约1周后，头部左侧出现水疱，呈带状分布伴瘙痒，左眼渐难以睁开。发病期内患儿无发热和咳嗽症状，饮食尚可，睡眠欠佳，大小便正常。患儿3年前接种过水痘疫苗，无水痘发病史，近期没有水痘接触史，既往史与家族史无特殊。查体：系统体检正常。皮肤科检查：左眼红肿，难睁开，右眼正常；头皮左侧带状分布较多簇集和散在的黑褐色痂，部分痂下浅溃疡（图1）。; 伊兴旭陈敬贤甘霖王明丽; 关键词：带状疱疹儿童

脐带血血浆在人巨细胞病毒垂直传播中的作用被引量：1: 2012年; 目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集51份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后,进行HCMV UL55基因的巢式PCR检测,并随机抽取其中18份脐带血白细胞进行HCMV pp65抗原血症检测。结果 51份新生儿脐带血白细胞HCMV UL55 DNA阳性数为16份,阳性率为31.4%;同时进行检测的51份脐带血血浆HCMV UL55 DNA阳性数为17份,阳性率为33.3%,新生儿脐带血白细胞与血浆的标本阳性率差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。以新生儿脐带血白细胞HCMVUL55 DNA巢式PCR结果为标准,利用血浆巢式PCR检测的灵敏度为75.0%(12/16),特异度为85.7%(30/35),阳性预测值为70.6%(12/17),阴性预测值为88.2%(30/34)。随机抽取其中18份新生儿脐带血白细胞进行pp65抗原血症检测,阳性标本数为6份,阳性率为33.3%;与此18份血浆DNA巢式PCR结果相比较,两者差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。结论脐带血血浆在HCMV垂直传播中起携带并传播病毒的作用。; 葛俊俞海洋金艳沈国泉任鹏李法锦汪晓婷吉阳赵蕾江龙凤陈敬贤王明丽; 关键词：婴儿巨细胞病毒疾病传播

新生儿人巨细胞病毒先天性感染危险因素筛查被引量：3: 2012年; 目的通过检测新生儿脐带血中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)IgG抗体和gB基因,了解新生儿HCMV感染情况,并结合临床资料分析产妇年龄、Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV-Ⅰ)IgG抗体阳性、孕周与HCMV先天性感染的相关性。方法收集2010年11月～2011年6月期间,某市妇幼保健院就诊的健康产妇所娩新生儿脐带血,共178例。采用ELISA法检测脐带血血清是否存在HCMV IgG和HSV-ⅠIgG抗体,巢式PCR检测HCMV gB基因。结果产妇HCMV IgG阳性率为99.44%(177/178);产妇HSV-ⅠIgG阳性率为83.71%(149/178);新生儿脐血HCMV gB阳性率为32.02%(57/178);产妇年龄和HSV-ⅠIgG抗体阳性不是发生HCMV先天性传播的危险因素。结论针对早产和过期产儿,应该加强其HCMV先天性感染的早期诊断。; 汪晓婷陈灵芝陈敬贤王明丽; 关键词：巨细胞病毒

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安徽省科技厅攻关项目(08010302179)

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