山西省科技攻关计划项目(022073-1)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：山西医科大学第二医院山西大学更多>>
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- 凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达被引量：1
- 2010年
- 本研究以含有fⅨ cDNA的pcDNA3.1质粒为模板构建4种包含不同类型无义突变的fⅨ真核表达载体并进行鉴定,实现其在COS-7细胞中的表达。采用以PCR为基础的定点突变法体外构建fⅨ基因无义突变体,并通过DNA序列分析进一步鉴定证实;应用脂质体转化技术将野生型、突变型fⅨ表达载体分别瞬时转染COS-7细胞,采用实时定量PCR鉴定fⅨ mRNA在各组的相对表达水平。结果表明,4个突变型质粒除相应位点的无义突变外,未见其它突变,提示无义突变载体构建成功。实时定量PCR鉴定表明,各突变组真核表达载体已成功转染COS-7细胞株并能转录为mRNA。结论:采用以PCR为基础的定点突变法可在体外构建fⅨ真核表达载体,并可在COS-7细胞中表达,其转录过程中不引发mRNA降解,这为进一步研究无义突变引起FⅨ功能丧失及表达量降低的机制和治疗研究提供了物质基础。
- 聂欣杨林花柴宝峰申泉张媛张耀方陈剑芳
- 关键词：凝血因子IX真核表达载体血友病B
- 应用遗传多态性连锁分析进行血友病A家系分析被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨提高血友病A患者及家系成员的基因诊断、携带者检出的诊断率的途径。方法:对两个血友病A家系成员进行BclI位点和St14VNTR多态位点基因连锁分析。结果:运用BclI位点,家系a中Ⅱ3得到明确诊断;家系b中Ⅱ2为携带者,其中因家系b中Ⅱ1为99/99bp,呈纯合子,故无法对Ⅲ2、Ⅲ3做出判断。应用St14VNTR多态位点,家系a中女性Ⅱ2为携带者;家系b中先证者Ⅲ1的母亲Ⅱ1在该位点呈纯合子,故无法对Ⅲ2、Ⅲ3做出诊断,同样家系b中先证者Ⅱ5的母亲Ⅰ2亦为纯合子,故无法对Ⅱ2作诊断。该家系在此位点无信息,不能作诊断。结论:联合应用多个遗传多态性标志可以提高血友病A的诊断率和确保对携带者分析的正确率。
- 杨林花郭艳丽郭志萍侯丽虹刘秀娥
- 关键词：血友病A多态性
