国家自然科学基金(39770797)
- 作品数：16 被引量：59H指数：6
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- 变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗对唾液变形链球菌和牙菌斑的影响被引量：4
- 2003年
- 目的 了解变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠唾液变链菌和牙面菌斑的影响。方法 2 8d龄 Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为 pc DNA3 - pac组、pc DNA3 - gtf B组、pc DNA3 - pac联合pc DNA 3 - gtf B组、变形链球菌灭活全菌组、pc DNA3空载体组和 PBS液组 ,进行三次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型 ,作诱龋实验 3个月。唾液变链菌计数和菌斑计分。结果 唾液变链菌菌落计数和牙面菌斑计分在 pc D-NA3与 PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合基因疫苗和灭活全菌细胞免疫组最低 ,各组间有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 pc DNA3 - gtf B和 pc DNA3 - pac具有明显的免疫抑菌作用 。
- 杨德琴刘天佳曹福娴杨锦波刘建国
- 关键词：变形链球菌表面蛋白葡糖基转移酶基因疫苗唾液变形链球菌牙菌斑
- 变形链球菌表面蛋白及葡糖基转移酶基因疫苗的防龋动物实验被引量：3
- 2003年
- 杨德琴刘天佳曹福娴刘建国杨锦波
- 关键词：变形链球菌表面蛋白葡糖基转移酶基因疫苗龋病动物实验
- 变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗防龋动物实验:Keyes龋齿计分研究被引量：6
- 2004年
- 目的 :了解变形链球菌基因疫苗 pcDNA3 pac和 pcDNA3 gtfB的免疫防龋效果。 方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组 (A组 )、pcDNA3 gtfB组 (B组 )、pcDNA3 pac联合 pcDNA3 gtfB组 (C组 )、变形链球菌灭活全菌组 (D组 )、pcDNA3空载体组 (E组 )和PBS液组 (F组 )进行 3次双侧颌下腺腺周注射免疫。建立定菌鼠模型 ,诱龋 3个月 ,根据Keyes经典评分方法从龋损范围及深度进行龋损综合评估和比较。结果 :龋损牙面计分在 pcDNA3与PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合免疫和灭活全菌细胞最低 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;窝沟龋各级计分 :E级龋在单基因疫苗组 ,联合疫苗组、灭活全菌细胞组无区别 (P >0 .0 5 ) ,而PBS组和 pcDNA3组则较低 (P <0 .0 1) ;Dm级、Ds级则是联合免疫组与灭活全菌细胞组最低 ,单基因疫苗免疫组较高而PBS和 pcDNA3组最高 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;Dx级四个免疫组发生率很低或不发生 ,显著低于PBS组和pcDNA3组 (P <0 .0 1)。结论 :重组质粒pcDNA3 gtfB和pcDNA3 pac具显著有效的免疫防龋作用 ,以联合基因疫苗免疫最好 ,是理想的防龋决策之一。
- 杨德琴刘天佳曹福娴庄姮刘建国杨锦波
- 关键词：变形链球菌膜蛋白质类基因疫苗
- 防龋基因疫苗pcDNA3-PAc不同途径免疫BALB/c小鼠的实验研究被引量：8
- 2010年
- 目的:观察防龋基因疫苗pcDNA3-PAc经不同途径免疫BALB/c小鼠后的免疫效果。方法:重组质粒pcDNA3-PAc经颌下腺区皮下注射、股四头肌注射和鼻腔黏膜滴注免疫BALB/c小鼠,共免疫2次,每次间隔2周。分别于首次免疫前1d和免疫后第1、2、4周采集血液和唾液样品,采用酶联免疫吸附方法检测血清特异性IgG抗体和唾液特异性IgA抗体。结果:各实验组免疫后1周血清和唾液中特异性抗体水平开始升高,第4周时达最高水平。颌下腺区皮下注射免疫产生的唾液IgA和股四头肌注射免疫诱导的血清IgG抗体水平明显高于其它实验组(P<0.05)。颌下腺区皮下注射免疫和鼻腔黏膜滴注免疫可诱导较高水平的唾液IgA和一定水平的血清IgG;股四头肌注射免疫诱导的血清特异性IgG抗体水平较高(P<0.05),而唾液IgA抗体水平不如颌下腺区皮下注射免疫和鼻腔黏膜滴注免疫(P<0.05)。结论:防龋基因疫苗pcDNA3-PAc能够诱导动物机体产生有效的系统免疫应答和黏膜免疫应答。
- 岳朝晖刘建国王晶赵靖王伟姜晶管晓燕张剑
- 关键词：变异链球菌表面蛋白抗原基因疫苗龋病
- 变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋实验研究:唾液和血清抗体水平测定被引量：7
- 2003年
- 目的 将基因疫苗pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠 ,观察唾液和血清抗体的变化 ,证实基因疫苗的免疫原性。方法 36只Wistar大鼠分为 6个免疫组 :pcDNA3_pac ,pcDNA3_gtfB ,pcDNA3_pac联合pcDNA3_gtfB ,阳性对照灭活变形链球菌 ,阴性对照pcDNA3及PBS液组。建立龋攻击定菌鼠模型 3个月 ,各组大鼠均以 10 0 μg剂量免疫定菌鼠 3次 ,ELISA法检测唾液SIgA和血清IgG水平。 结果 疫苗组在首次免疫后第 33天(第 5周 )都出现较高水平的唾液SIgA ,在第 75天 (第 11周 )后达最高水平 ,并持续至实验结束。成组单因素方差分析唾液SIgA水平在总体上各实验组间存在差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,q检验分析在联合免疫组和全菌细胞组最高 ,单基因疫苗免疫组次之 ,pcDNA3与PBS组最低 ;血清IgG水平在 4个免疫组之间没有差异 (P >0 0 5 ) ,但都高于空白及阴性对照组 (P <0 0 5 )。结论 pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB腺周途径免疫定菌Wistar大鼠 ,能有效诱导唾液SIgA和血清IgG抗体产生 。
- 杨德琴刘天佳曹福娴杨锦波刘建国
- 关键词：变形链球菌表面蛋白葡糖基转移酶基因疫苗唾液
- 抗龋基因疫苗pcDNA3-gtfB整合宿主细胞基因组DNA的可能性研究被引量：7
- 2003年
- 目的 用基因疫苗pcDNA3_gtfB免疫大鼠 ,探讨基因疫苗整合入宿主细胞的可能性。方法 将 36只Wistar大鼠分为两组 ,一组为pcDNA3_gtfB颌下腺免疫组 ,另一组为PBS缓冲液颌下腺对照组。取Wistar大鼠颌下腺、肾脏、肝脏、心脏、肺脏、脑组织 ,以对照组 6种组织基因组DNA为模板 ,加入不同梯度拷贝数的pcDNA3_gtfB ,采用Pyrobest聚合酶PCR反应体系 ,确定PCR反应敏感性。以免疫组 6种组织基因组DNA为模板 ,检测pcDNA3_gtfB的整合率。结果 本实验PCR体系的检测水平为在 1 0 0 0 0个组织细胞核中能检测出一个pcDNA3_gtfB拷贝(1∶1 0 0 0 0 ) ,在此检测水平下 ,免疫组 6种组织基因组DNA中未发现整合。结论 pcDNA3_gtfB整合入宿主细胞基因组DNA的概率不超过 1∶1 0 0 0 0 。
- 杨锦波刘天佳李继遥
- 关键词：基因组DNA龋病
- 变形链球菌表面蛋白真核表达载体pcDNA3-PAc的构建Ⅲ.变形链球菌表面蛋白PAc编码基因pac的体外扩增被引量：2
- 2003年
- 目的获取完整的变形链球菌表面蛋白PAc的编码基因 pac。 方法建立扩增长片段目的基因的PCR反应体系 ,根据文献报道的 pac核苷酸序列设计引物 ,使用通用缓冲液和高纯度的质粒 pPC4 1DNA为模板 ,经PCR扩增 pac基因。 结果扩增产物经琼脂糖电泳和分子量鉴定 ,为单一的 4 .7kb条带。结论成功地从质粒 pPC4 1DNA模板上扩增到全长 4 .7kb的完整 pac基因 。
- 刘建国刘天佳周学东杨德琴张义正王海燕
- 关键词：变形链球菌基因克隆聚合酶链反应
- 变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因转基因黄瓜植株的获得及鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的:经农杆菌介导将变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因导入黄瓜,获得转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的研究提供实验基础。方法:利用双元载体pCAMBIA2301构建变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合质粒(PAcA-ctxB)的植物表达载体p2355-PAcA-CTB;电转化法导入农杆菌EHA105;采用叶盘转化法转化黄瓜,转基因植物经过卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测目的基因鉴定。结果:成功得到转基因黄瓜植株,卡那霉素抗性筛选、GUS基因染色、PCR及Southern blot杂交分析检测证实目的基因PAcA-ctxB已整合至黄瓜基因组中。结论:获得了含有变异链球菌表面蛋白A区与霍乱毒素B亚单位嵌合基因的转基因黄瓜植株,为转基因可食防龋疫苗的进一步研究提供了实验基础。
- 吴家媛刘建国马欣荣洪献忠吴志刚张剑梁文红
- 关键词：变异链球菌霍乱毒素B亚单位
- 变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋动物实验:体质量影响研究被引量：4
- 2003年
- 目的 :了解变形链球菌基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠体质量的影响。方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组、pcDNA3 gtfB组、pcDNA3 pac联合pcDNA3 gtfB组、变形链球菌灭活全菌阳性对照组、pcDNA3空载体阴性对照组和PBS液空白对照组 ,进行 3次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型及诱龋实验 3个月 ,于实验开始和结束时测定体质量。结果 :基因疫苗免疫组体质量与 pcD NA3及PBS组无显著差异 (P >0 .0 5) ,而灭活全菌细胞免疫组体质量显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :pcD NA3 gtfB和pcDNA3 pac对大鼠体质量无不良影响 。
- 杨德琴刘天佳曹福娴刘建国杨锦波
- 关键词：变形链球菌表面蛋白葡糖基转移酶基因疫苗动物实验体质量
- 变形链球菌表面蛋白pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP真核表达质粒的构建被引量：8
- 2000年
- 目的 :构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP ,即表面蛋白氨基端与中央区T、B细胞表位的两个基因疫苗。方法 :通过PCR扩增 ,获得分别编码变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区T、B细胞表位的两个目的基因pac A和pac P。将它们与真核穿梭表达载体pcDNA3进行体外重组 ,并转化大肠杆菌XL1 Blue ,采用菌落原位杂交筛选出阳性克隆子后 ,抽提重组质粒 ,进行酶切鉴定、Southern杂交分析和DNA序列测定。结果 :真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP构建正确 ,目的基因pac A和pac P定向插入至真核表达载体中 ,插入的相位正确 ,未改变目的基因的阅读框架。结论 :真核表达质粒pcDNA3 pacA与pcDNA3 pacP分别包含了变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区免疫显性T、B细胞表位的编码基因 ,为基因疫苗进一步研究奠定基础。
- 郭丽宏刘天佳陈舟
- 关键词：变形链球菌表面蛋白抗原真核表达质粒龋齿
