国家自然科学基金(3072198)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 家蝇Cecropin基因的原核表达及表达产物的免疫学鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的克隆家蝇抗菌肽基因Cecropin A,进行原核表达,制备兔抗家蝇幼虫血清鉴定表达产物。方法在GenBank中检索家蝇Cecropin A基因序列,设计特异性引物,从家蝇幼虫组织总RNA中RT-PCR扩增Cecropin A成熟肽(Ma-tureCecropin,MC)基因,克隆入原核表达载体pET32a中,并转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白。用家蝇幼虫匀浆液免疫家兔,获得多抗血清,双向琼脂扩散实验鉴定多克隆抗血清的效价。Western blotting鉴定纯化后的重组蛋白质。结果重组蛋白质Thiore-doxin(硫氧还蛋白,Trx)-MC,经兔抗家蝇幼虫血清鉴定正确。结论天然MC在原核表达系统中得到正确表达。
- 王炜郑学礼
- 关键词：家蝇CECROPIN多克隆抗体
