广东省医学科学技术研究基金(B2005083)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 相关作者：罗微温茜马骊金丹王小宁更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学华南理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省医学科学技术研究基金广东省科技攻关计划更多>>
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- TNFR Ⅰ-IgGFc融合基因重组腺病毒表达载体的构建及其在骨髓基质干细胞的表达
- 2007年
- 目的构建携带人肿瘤坏死因子受体Ⅰ-胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体（Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc），体外转染兔骨髓基质干细胞（BMSCs），探讨转TNFR Ⅰ-IgGFc基因的BMSCs治疗类风湿关节炎的可行性。方法将TNFR Ⅰ-I如Fc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316，与辅助质粒pBHGlox△E1，3Cre共转染HEK293细胞，重组产生Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc，PCR鉴定毒种正确后，进行扩增、纯化和滴度测定，转染培养至第2代BMSCs，利用RT—PCR、原位杂交、免疫组化方法，检测转染后细胞中TNFR Ⅰ-IgGFc的转录和表达。结果成功构建了Ad-TNFR Ⅰ-IgGFc，感染性滴度达3×10^10 TCID50／mL，转染后BMSCs在mRNA和蛋白水平均有TNFR Ⅰ-IgGFc表达。结论构建的Ad—TNFR Ⅰ-IgGFc可有效转染BMSCs，并在其中高效表达，为将表达TNFR Ⅰ-IgGFc基因的BMSCs用于类风湿关节炎治疗的实验研究提供了基础。
- 温茜马骊金丹崔建德罗微王小宁
- 关键词：肿瘤坏死因子腺病毒载体骨髓基质干细胞
- 重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染人气道上皮细胞及其表达的实验研究
- 2008年
- 目的构建携带人可溶性肿瘤坏死因子受体I胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体(Ad-sTNFRI-IgGFc),体外转染正常人气道上皮细胞株(HBE135-E6E7),探讨重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染气道上皮治疗支气管哮喘的可行性。方法将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染培养HBE135-E6E7,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR、免疫组化检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的表达和转录。结果成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc,感染性滴度达3×1010TCID50/ml,转染后HBE135-E6E7在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达。结论构建的Ad-sTNFRI-IgGFc可有效转染HBE135-E6E7,并在其中高效表达,并能拮抗TNF活性,为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。
- 苏瑾尤长宣蔡绍曦马骊温茜罗微黄泳塔
- 关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体腺病毒载体气道上皮细胞
- 重组腺病毒Ad-HGF转染骨髓基质干细胞及其表达的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的构建人肝细胞生长因子(HGF)重组腺病毒表达载体,体外转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),检测HGF基因表达,探讨转HGF基因的BMSCs治疗股骨头缺血性坏死(ANFH)的可行性。方法利用RT-PCR方法,从共表达人HGF-Met的NIH3T3-H0细胞株中扩增人HGFcDNA,插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒共转染HEK293细胞,重组产生重组腺病毒Ad-HGF,PCR鉴定毒种正确后,在293细胞中扩增、纯化,TCID50法测定感染性滴度,然后感染BMSCs,RT-PCR、原位杂交、免疫组化检测转染后细胞中HGF的转录和表达。结果成功制备了Ad-HGF,感染性滴度为2.6×1010TCID50/ml,转染后的BMSCs在mRNA和蛋白水平均有HGF表达。结论获得高表达人HGF基因的BMSCs,为其用于早期ANFH的治疗奠定了基础。
- 温茜马骊金丹崔建德罗微王小宁
- 关键词：腺病毒载体骨髓基质干细胞生物治疗
