国家自然科学基金(303230350)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：吴晓萍曾耀英何贤辉李校堃王通更多>>
- 相关机构：暨南大学解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组hFGF-10腺病毒促进角质形成细胞增殖被引量：3
- 2007年
- 目的:构建重组人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)腺病毒,并观察其对角质形成细胞增殖的影响,为探索新的皮肤组织工程种子细胞的来源奠定基础。方法:用PCR方法扩增得到人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)基因片段,与穿梭载体pAdTrack-CMV连接,获得的重组质粒pAdTrack-CMV-hFGF-10经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-hFGF-10,经酶切鉴定后转染HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增腺病毒。用重组腺病毒感染HaCat细胞,Western blotting检测培养上清中的重组hFGF-10。MTT法检测重组腺病毒对角质形成细胞增殖的影响。结果:成功构建了含hFGF-10基因的重组腺病毒,可高效感染HaCat细胞,培养上清与hFGF-10抗体呈阳性反应。重组腺病毒对角质形成细胞的增殖具有促进作用。结论:制备出的重组腺病毒感染HaCat细胞后分泌表达hFGF-10,并可促进HaCat细胞的增殖。
- 吴晓萍曾耀英
- 关键词：成纤维细胞生长因子10腺病毒细胞增殖HACAT细胞
- 地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡和ERK1/2 MAPK及钙离子浓度关系的研究被引量：7
- 2004年
- 目的 :研究胸腺细胞凋亡和ERK1/ 2途径及钙离子内流之间关系 ,以进一步探讨细胞凋亡可能的信号通路机制。方法 :以地塞米松 (DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型 ,通过流式细胞术和电镜测定模型的稳定性 ,利用激光扫描共聚焦分析测定细胞内 [Ca2 + ] i、SDS PAGE及Westernblot检测细胞内总量和磷酸化ERK1/ 2MAPK。结果 :仅在完全RMPI 1640培养基培养条件下 ,小鼠胸腺细胞自发凋亡百分率为 (2 90±0 62 ) % ,而在 2 5× 10 -6mol/LDEX诱导下 ,3h培养组 (12 70± 2 44) %、6h培养组 (53 55± 4 59) %发生了细胞凋亡 ,细胞内Fluo 3绿色荧光明显增强 ;正常细胞ERK1/ 2总量随时间变化不明显 ,而DEX刺激下 ,ERK1/ 2总量随时间呈递减趋势。结论 :DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中 ,磷酸化ERK1/ 2信号被迅速抑制 ,细胞内 [Ca2 + ] i迅速上升 ,推论磷酸化ERK1/ 2信号阻断与 [Ca2 + ]
- 王通曾耀英李校堃何贤辉肇静娴吴晓萍付小兵
- 关键词：钙离子ERK
- 腺病毒介导重组hKGF基因转染HaCat细胞及其表达被引量：2
- 2007年
- 将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF。采用Lipofectamine2000将pAdEasy-hKGF转染到HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有hKGF基因。获得的重组hKGF腺病毒感染颗粒可高效感染HaCat细胞。Western blot结果显示,重组腺病毒感染的HaCat细胞可分泌表达hKGF蛋白。
- 吴晓萍曾耀英贺芳
- 关键词：腺病毒同源重组分泌表达
