湖北省自然科学基金(2008CDB058)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：马立新曾毓芳陈雅兰屠俊张桂敏更多>>
- 相关机构：湖北大学滨州医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金武汉市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 新型甘露聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2012年
- 构建土壤基因组文库,通过功能筛选得到一水解底物魔芋粉的阳性克隆,测序后,序列分析表明:该基因全长为1 530 bp,包含一个糖基水解家族26结构域,编码510个氨基酸,相对分子质量为56 438。此基因推导的氨基酸序列与Cellulomonas fimi的Man26A和Cellvibrio japonicus的mannanase A氨基酸序列同源性分别为64.3%、38%。将此基因的成熟肽的编码序列克隆到表达载体pHBM905上,得到重组质粒pHBM730,将pHBM730经SalI酶切线性化后转化3株毕赤酵母GS115、KM71、SMD1168,该甘露聚糖酶基因在这3种毕赤酵母中均实现分泌表达。将此3种重组毕赤酵母GS115(pHBM730)、KM71(pHBM730)、SMD1168(pHBM730)诱导产酶,对这3种重组酶进行相关的酶学性质研究。分析表明,在KM71中表达量最高,其最适反应pH值均约为6.6,最适反应温度均约为45℃。在最适反应条件下测得其酶活力为19.64 U。此结果为瓜尔豆胶降解产物的工业化应用提供了参考。
- 武玉永谭秀华马立新
- 关键词：Β-甘露聚糖酶毕赤酵母克隆分泌表达酶学性质
- rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体的构建被引量：2
- 2011年
- 将一段含有质粒ColE1复制起始区(ori)和氨苄青霉素抗性基因(bla)的DNA片段插入到酿酒酵母rDNA片段中部的EcoRI或HpaI位点之间,在pYES2载体的基础上构建了两个rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体pHBM367E或pHBM367H。将黑曲霉糖化酶基因导入载体pHBM367H,获得表达载体pHBM166。为生物安全性的考虑,pHBM166经HpaI酶切去掉2.2kb的ColE1ori和bla片段后转化酿酒酵母Y33菌株,获得不含任何抗生素抗性基因的工程菌。随后,对糖化酶基因在酿酒酵母中的表达、稳定性进行了分析,结果显示,rDNA介导的糖化酶基因在酿酒酵母中的表达呈现不同的剂量效应,挑选高表达的菌株传80代之后仍能保持其产糖化酶的稳定性。
- 张桂敏曾毓芳陈雅兰屠俊何家亨马立新
- 关键词：酿酒酵母糖化酶生物安全性
