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重组腺病毒载体Ad5-EGFP感染人树突状细胞的研究: 2009年; 目的探讨重组腺病毒载体AdS—EGFP感染人树突状细胞（dendritic cell，DC）的最佳条件。方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞（PBMC），再以黏附法分离出单核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）等细胞因子诱导培养出DC，动态观察细胞形态，流式细胞仪检测其表面标志。AdS—EGFP以梯度感染复数值（MOI）10、100、200、400、600、800、1000pfu／cell感染人DC，于感染后24、48h，荧光倒置显微镜观察增强的绿色荧光蛋白（EGFP）表达，KS400型图像分析仪测定感染后48h的感染效率。结果MOI从10-800pfu／cell时，EGFP阳性细胞数量逐渐增多，感染效率和病毒滴度呈量效关系，当MOI为800pfu／cell时可获得较佳的感染效率，EGFP阳性细胞数量达到峰值，感染率达到95．25％。结论Ad5-EGFP是感染人DC的较理想载体，通过选择恰当的MOI值能提高细胞对重组腺病毒的摄人，从而提高感染效率。; 谢军平罗文娟侯晓华熊亮李晓陶晓南; 关键词：基因转导树突状细胞

小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养方法的比较研究: 2009年; 目的探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞（dendritic cells，DC）的方法。方法分离、纯化6周龄C57BL／6小鼠骨髓单核细胞，以含10％胎牛血清、20ng／ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和10ng／ml重组小鼠白细胞介素-4（IL-4）的RPMI-1640培养基培养7d，然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激组和TNF-α＋脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）刺激组。继续培养48h后，观察各组细胞形态，检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHC II。结果培养9d后，两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长。TNF—α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组（P〈0．01），但显著低于TNF—α＋LPS刺激组（P〈0．05）。3组均高表达CD11c，各组间无显著差异；而CD80、CD86和MHC II表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组（P〈0．01），TNF-α＋LPS刺激组显著高于单纯TNF—α刺激组（P〈0．05）。结论联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高，分泌IL-6、IL-12增加。; 谢军平罗文娟李晓熊亮侯晓华陶晓南; 关键词：树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子白介素-4 肿瘤坏死因子-Α 脂多糖

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湖北省卫生厅科研基金(JX3A05)