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睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因插入失活突变体构建及降解特性分析被引量：3: 2009年; 睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是革兰氏阴性菌,能够以各种类固醇化合物作为唯一碳源和能源,生物信息学分析发现睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因编码蛋白属于LuxR-type转录调控蛋白.利用同源重组原理构建teiR基因插入失活突变体C.mut,初步研究了teiR基因在类固醇代谢途径中的作用,以及对睾丸酮丛毛单胞菌关键降解酶3a-HSD/CR的表达影响.结果发现,teiR基因插入失活突变体C.mut在LB培养基中的生长速率不受影响,突变体C.mut抑制了teiR基因和关键降解酶3a-HSD/CR的表达,同时突变体C.mut丧失了以睾丸酮作为碳源进行生长的能力.结果表明teiR基因调节睾丸酮丛毛单胞菌类固醇代谢,同时teiR基因表达对3a-HSD/CR基因的表达是必需的.; 陈建秋潘大仁艾育芳周以飞潘菲林彬辉; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌同源重组类固醇

改良睾丸酮丛毛单胞菌降解鸡粪甾体化合物的研究被引量：2: 2010年; 微生物对有机污染物的降解速率受到环境因素的影响。利用经改良的睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosterone C.t)的3种菌株降解鸡粪中的甾类物质污染,探讨建立改良菌降解鸡粪中甾类物质污染的最佳条件。试验结果表明,经过基因改造的3种菌株Pktac-A8、C.test+Pa、C.test+Pb中,以C.test+Pa菌株对胆固醇降解率最大,且与其他菌株之间差异达到极显著水平。各菌株降解胆固醇的最适温度为30℃;最佳降解时间为15天;鸡粪含水量为66.7%时是降解胆固醇的最适宜湿度。; 艾育芳潘大仁周以飞陈建秋庄肃静潘菲; 关键词：鸡粪睾丸酮丛毛单胞菌生物降解胆固醇

环境中胆固醇降解菌的分离与鉴定被引量：3: 2011年; 本研究利用富集培养法从水塘底的污泥中分离出12株能以胆固醇为唯一碳源生长的菌株,并初步筛选出4株降解能力较强的菌株,这4个菌株在30℃、200r/min的培养条件下,96h内对30μg/mL的胆固醇的降解率分别为51.25%、36.65%、55.62%和29.59%。且它们适合生长的pH范围广,均在第12h后进入生长的稳定期。其中2个菌株(L4、L5)经形态特征以及16SrDNA序列分析,初步鉴定为肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)。; 艾育芳潘大仁周以飞彭康李姜平; 关键词：生物修复降解菌胆固醇 RDNA

早晚熟油菜的RAPD分析及特异片段的克隆被引量：3: 2009年; 以油菜晚熟植株(RG-8)及其早熟突变株系(RG-8M)叶片为材料,利用优化的RAPD反应体系对145条10 bp的随机引物进行了筛选,其中S265扩增得到1条RG-8特异性片段。将这条差异片段回收、克隆及测序,获得686 bp的序列。序列分析结果表明,这个片段与白菜型油菜和萝卜中的部分核苷酸序列同源性较高,均达到80%以上。由这个序列推导出的氨基酸序列与拟南芥中的shikimate kinase(莽草酸激酶)具有66%的同源性。该RAPD标记可以用来作为区分早晚熟油菜的一个指标。; 艾育芳刘旭周以飞潘大仁; 关键词：油菜 RAPD 克隆

液-质联用分析锦锈杜鹃叶黄酮类成分被引量：4: 2012年; [目的]采用高效液相色谱—电喷雾离子阱质谱技术对锦锈杜鹃叶中的黄酮类化合物进行分析和鉴定。[方法]色谱条件为:Wa-ters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A相为水(含浓度0.1%甲酸),流动相B相为无水甲醇;梯度洗脱程序:0～24 min,31%～42%B;24～30 min,42%～50%B;30～35 min,50%～60%B;35～40 min,60%B;进样量20μl;流速为0.7 ml/min;柱温30℃;检测波长356 nm。质谱条件为:电离源:电喷雾离子源;负离子模式扫描;干燥气温度:350℃;干燥气体积流量(N2):10 L/min;雾化气压力275.8 KPa;毛细管电压:3.5 KV,毛细管出口电压100 V;质量扫描范围:m/z 200～700。使用ESI离子源,负离子模式下采集数据。[结果]通过与文献数据和部分标准品对照,推断出锦锈杜鹃叶中含有5个黄酮类化合物,分别是金丝桃苷、异槲皮苷、广寄生苷、槲皮苷、槲皮素。[结论]液质联用技术具有快速、准确、有效的特点,是一种相对较好的定性测定方法。其对锦锈杜鹃叶中的黄酮类化合物进行分析和鉴定,为今后锦锈杜鹃的应用提供了一定的理论依据。; 张梅潘大仁周以飞朱秋强王少铭; 关键词：高效液相色谱黄酮

睾丸酮降解菌的分离鉴定及降解特性: 2014年; 为筛选获得具有降解环境雄激素的菌株，从福建莆田的土壤中分离得到1株能够高效降解睾丸酮的菌株，命名为C53-20。该菌经过常规的形态和16SrDNA序列同源性分析，鉴定为克雷伯氏肺炎菌（Klebsiella pneumonia）。该菌在35～40℃、pH6.0～8.0具有较高的降解活性，其最适值分别为温度37℃和pH6.5。该菌能够以睾丸酮为唯一碳源生长，12h内对1mmol·L-1睾丸酮的降解率为45％。该菌的筛选获得为进一步研究与睾丸酮降解相关的微生物基因提供资源。; 白泽方潘大仁霍煜璟李清; 关键词：降解菌睾丸酮 RDNA

早熟油菜成花相关基因LFY的克隆与分析被引量：4: 2012年; 以甘蓝型油菜晚熟品种RG-8的早熟突变体RG-8M为材料,通过同源克隆法得到1个LEAFY(LFY)同源基因,命名为BnLFY。该基因cDNA全长为1 310bp,包含1个长为1 248bp的开放阅读框,编码415个氨基酸。序列分析表明,推测的氨基酸序列含双子叶植物LFY类蛋白特有的N端脯氨酸富集区、中央酸性区、亮氨酸拉链结构以及富含赖氨酸与精氨酸的碱性区;且与几种十字花科植物LFY类蛋白的氨基酸序列一致性均在84%以上。转录表达分析表明,BnLFY基因在油菜中为组成型表达。; 艾育芳陈观水周以飞张梅潘大仁; 关键词：油菜早熟成花

TeiR融合蛋白分离及多克隆抗体的制备: 2009年; 提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pET28a中,经酶切验证后获得teiR基因表达载体pET28a-teiR.将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,添加终浓度为1 mmol.L-1的IPTG进行诱导,提取细菌总蛋白进行蛋白的SDS-PAGE电泳.并根据融合蛋白特性,利用Ni-NTA Spin Column对TeiR融合蛋白进行分离纯化,经分离纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出单一条带.进一步以获得的TeiR融合蛋白为抗原,制备兔抗TeiR多克隆抗体,经ELISA测定该抗体的效价为1∶10000,该抗体与睾丸酮丛毛单胞菌天然TeiR蛋白反应良好,说明该抗体特异性良好.; 陈建秋艾育芳潘大仁周以飞潘菲林彬辉郭玉春; 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌多克隆抗体

油菜早熟突变体成花过程中叶片多胺代谢研究被引量：7: 2011年; 以甘蓝型油菜品种‘福油-4’、RG-8晚熟及其早熟突变体(RG-8M)为材料,研究成花过程中叶片多胺代谢的变化规律,结果表明:较低含量的多胺(主要是腐胺和亚精胺)有利于油菜花芽分化的起始,含量的增加有利于花芽的发育,抽薹越早的品种其体内多胺含量越早到达较高水平。多胺氧化酶(PAO)活性的变化趋势与多胺总量的变化较一致,它们之间呈极显著正相关,说明高活性的PAO也是有利于成花的。; 艾育芳陈观水周以飞潘大仁宁文君; 关键词：油菜早熟成花多胺

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福建省自然科学基金(2008J0041)