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问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白OmpL1和LipL21抗原表位预测及鉴定被引量：2: 2008年; 目的筛选问号钩端螺旋体（简称钩体）属特异性外膜蛋白OmpL1和LipL21有效T和B细胞联合抗原表位，为研制多抗原肽（multiple antigenic peptide，MAP）疫苗提供基础。方法采用生物信息学方法预测OmpL1和LipL21分子中T和B细胞联合抗原表位。采用PCR扩增候选联合抗原表位片段并分别构建其噬菌体展示系统。分别以rOmpL1或rLipL21、黄疸出血群赖株、钩体患者抗血清为一抗，采用Western blot检测各抗血清与目的表位的免疫反应性及其强度。结果通过抗原表位预测，选择了高分值的4个OmpL1和2个LipL21联合表位。经扩增获得了预期的各抗原表位片段，各目的表位序列均准确插入噬菌体PⅢ蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述6个联合表位。其中LipL21的97-112和176-184表位对任-抗血清均显示相似强度的杂交条带。综合4个OmpL1表位对3种抗血清的不同Western blot结果及其实际意义，杂交信号从强到弱依次为173-191、87-98、297-320和59-78表位。结论所研究的6个联合表位均分别为LipL21和OmpL1的有效抗原表位，其中LipL21的97-112、176-184和OmpL1的87-98、173-191表位可应用于钩体MAP疫苗研制。; 林旭瑷潘建平罗依惠毛亚飞李立伟严杰

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定被引量：3: 2008年; 目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。; 姜久昆林旭瑷严杰薛峰; 关键词：免疫学鉴定

钩端螺旋体多抗原肽的构建及免疫性分析: 2008年; 目的构建问号钩端螺旋体（简称钩体）主要外膜蛋白OmpL1、LipL21和LipL32优势抗原表位的串联基因及其表达系统，了解该重组蛋白的免疫活性。方法采用噬菌体M13KE表面展示技术结合Western blot分析，鉴定了OmpL1、LipL21和LipL32的优势抗原表位，人工合成优势抗原表位串联基因并构建其原核表达系统。SDS—PAGE检测重组蛋白的表达情况；Western blot及ELISA鉴定重组蛋白的免疫活性。结果该合成基因在原核表达系统中得到了有效表达，且表达产物主要以可溶性形式存在。Western blot和ELISA结果显示该重组蛋白能与兔抗钩体全菌抗体及不同血清群的钩体病人血清中的抗体产生免疫反应。结论本研究成功构建了钩体多表位串联基因及其表达系统，所表达目的蛋白具有良好的免疫活性，且对不同血清群型抗体之间均有免疫原活性。; 林旭瑷隋玉娟毛亚飞严杰; 关键词：钩端螺旋体病多抗原肽免疫活性

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国家自然科学基金(30671863)