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国家自然科学基金(30671859)

作品数：11 被引量：32H指数：2
相关作者：方峰舒赛男罗丹田佳周玉峰更多>>
相关机构：华中科技大学深圳市妇幼保健院华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>

文献类型

  • 11篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 11篇医药卫生
  • 2篇生物学
  • 1篇化学工程

主题

  • 9篇细胞
  • 8篇巨细胞
  • 8篇巨细胞病毒
  • 6篇鼠巨细胞病毒
  • 5篇神经干
  • 5篇神经干细胞
  • 5篇干细胞
  • 4篇神经干细胞分...
  • 4篇细胞分化
  • 4篇基因
  • 4篇分化
  • 4篇干细胞分化
  • 2篇双杂交系统
  • 2篇体外
  • 2篇先天
  • 2篇酵母
  • 2篇酵母双杂交
  • 2篇酵母双杂交系...
  • 2篇MYC
  • 2篇PROTEI...

机构

  • 9篇华中科技大学
  • 1篇华中科技大学...
  • 1篇广州市儿童医...
  • 1篇深圳市妇幼保...

作者

  • 9篇方峰
  • 8篇舒赛男
  • 6篇田佳
  • 6篇罗丹
  • 6篇周玉峰
  • 5篇刘兴楼
  • 5篇李革
  • 5篇王慧
  • 3篇周华
  • 3篇张慧娟
  • 2篇王惠
  • 2篇张菊
  • 2篇杜小弋
  • 1篇葛海霞

传媒

  • 4篇中华微生物学...
  • 2篇实用儿科临床...
  • 1篇中国病理生理...
  • 1篇神经解剖学杂...
  • 1篇Chines...
  • 1篇Journa...
  • 1篇中华实用儿科...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2012
  • 4篇2011
  • 3篇2010
  • 3篇2009
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
先天性巨细胞病毒感染研究新进展被引量：23
2013年
人巨细胞病毒（HCMV）是 β 疱疹病毒家族中最大的病毒之一，在世界范围均有较高的感染率。HCMV是引起先天性感染最常见的病毒，感染全世界约1% 的新生儿，往往导致神经系统后遗症，对儿童的健康成长带来很大的影响。低毒高效抗病毒药物及疫苗的缺乏和社会大众对 HCMV 的关注度偏低，是造成高发病率的主要原因。现就近年来对先天性HCMV感染现状、诊疗、预防及远期随访等方面的进展作一综述。
张菊方峰
关键词：先天性巨细胞病毒感染抗病毒药物
酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库中鼠巨细胞病毒即刻早期蛋白M122相互作用蛋白的研究被引量：1
2010年
目的 应用酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库中与鼠巨细胞病毒即刻早期蛋白M122相互作用的宿主因子,为进一步研究巨细胞病毒的致病机制奠定实验基础.方法将诱饵质粒pGBKT7-M122转化酵母菌AH109,Western blot检测诱饵蛋白在酵母细胞中的表达.阳性重组AH109菌株与小鼠脑cDNA文库进行配合,在色氨酸、亮氨酸、组氨酸和腺嘌呤缺陷培养基（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）和铺有Ⅹ-α-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade平板上进行筛选,提取阳性酵母菌质粒,转化大肠杆菌后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.将阳性文库质粒与诱饵质粒共同转化酵母AH109感受态细胞,重新验证其在酵母中的相互作用,同时阳性文库质粒与空载体pGBKT7亦被用同样的方法转入AH109感受态细胞,以排除阳性文库质粒的自激活作用.结果筛选出与M122蛋白相互作用的21种已知基因编码的蛋白质和3种未知基因编码的蛋白,其中21种已知蛋白分别为：突触融合蛋白8（syntaxin 8,Stx8）、磷酸葡萄糖变位酶2（phosphoglucomutase 2,Pgm2）、Shaker型电压依赖性钾通道的β1亚单位（potassium voltage-gated channel,shaker-related subfamily,beta member 1,Kcnab1）、19型胶原蛋白（collagen,type ⅪⅩ,alpha 1,Col19a1）、古蛋白1（archain 1,Arcn1）、胞嘧啶核苷酸激酶（cytidylate kinase,Cmpk）、热休克蛋白DnaJ同系物A亚家族成员1[DnaJ（Hsp40）homolog,subfamily A,member 1,Dnaja1]、Na＋、K＋ATP转运酶β3亚单位（ATPase,Na＋/K＋ transporting,beta 3 polypeptide,Atp1b3）、SH3结构域GRB2样相互作用蛋白1[SH3-domain GRB2-like（endophilin）interacting protein 1,Sgip1]、锚蛋白重复域17（ankyrin repeat domain 17,Ankrd17）、无义介导的mRNA 降解因子Smg-7同系物（Smg-7 homolog,nonsense mediated mRNA decay factor,Smg7）、精子相关抗原9（sperm associated antigen 9,Spag9）、FK506结合蛋白1A（FK506 binding protein 1a,Fkbp1a）、MYST组蛋白乙酰转�
王慧周玉峰舒赛男罗丹田佳张慧娟杜小弋方峰
关键词：酵母双杂交系统蛋白质相互作用
鼠巨细胞病毒干扰神经干细胞分化相关基因表达的体外研究被引量：1
2011年
目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）对体外培养神经干细胞（NSCs）wnt信号通路下游分化相关靶基因表达的影响，以探讨CMV先天感染致胎脑发育异常的分子机制。方法体外分离培养BALB／c胎鼠NSCs，用感染复数（MOI）为5、1和0．1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养，Western blot法检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2蛋白表达水平的动态变化，real-timeRT-PCR检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路关键分化基因ngn-1mRNA水平的动态变化。结果感染组c-mye蛋白表达量在分化培养后第0．5-5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组cyclinD1蛋白表达量在第0．5天和1天显著低于正常对照组（P〈0．05）；在第2天和3天显著高于正常对照组（P〈0．05）；在第4天和5天，MOI=5组显著低于其他3组（P〈0．05）；感染组ngn-1蛋白表达量在第1～5天显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-1mRNA水平在第0．5～5天均显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组ngn-2蛋白表达先降后升，与正常对照组先升后降相反，MOI=0．1和1组峰值后移至感染后第5天，且明显低于正常对照组峰值（P〈0．05）。MOI=5组未表现出明显的峰值，各感染组ngn-2表达量在感染后1d明显低于正常对照组（P〈0．05）；感染后2d，MOI=5组明显低于正常对照组（P〈0．05）；在感染后3、4、5d，各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组（P〈0．05）。感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显。结论MCMV感染明显抑制NSCs Wnt信号通路分化相关基因c-myc和ngn-1蛋白表达，抑制ngn-1mRNA表达，并诱导cyclinD1和ngn-2蛋白表达紊乱，其效应随感染滴度增加而更为显著。MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一。
田佳刘兴楼方峰王慧张慧娟罗丹周玉峰李革
关键词：神经干细胞WNT信号通路CYCLIND1
鼠巨细胞病毒影响神经干细胞分化及分化基因的表达
目的:研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对体外培养神经干细胞（NSCs）分化及分化基因表达的影响,探讨CMV先天感染致脑发育异常的机制。方法:体外分离培养和鉴定BALB/c胎鼠NSCs,检测细胞分化潜能,用感染复数（MOI...
罗丹舒赛男周玉峰刘兴楼田佳王惠周华李革方峰
关键词：巨细胞病毒神经干细胞细胞分化
文献传递
小鼠巨细胞病毒即刻早期基因M122酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用的检测被引量：2
2010年
目的构建小鼠巨细胞病毒(MCMV)即刻早期基因M122的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-M122,并检测其自激活作用及对酵母AH109菌株有无毒性作用,用于筛选小鼠胚胎脑cDNA文库。方法采用反转录(RT)-PCR的方法扩增MCMV的M122基因片段,并将其插入到pMD18-Tsimple vector,构建重组质粒pMD18-T-M122。用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将重组质粒酶切鉴定,并测序。测序正确的pMD18-T-M122重组质粒和载体pGBKT7-BD分别用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ进行双酶切,凝胶回收M122基因片段及pGBKT7-BD载体片段。将回收的M122基因片段和pGBKT7-BD载体片段,用T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建诱饵质粒pGBKT7-M122。对pGBKTT-M122进行酶切鉴定,测序。将测序正确的pGBKT7-M122转化AH109酵母感受态细胞,转化菌液涂布于营养缺陷培养基SD/-Trp平板和SD/-Trp/X-α-Gal平板。空载体质粒pGBKT7-BD和阳性质粒pCL作为对照亦被转入AH109酵母感受态细胞,转化菌液分别涂布于SD/-Trp平板和SD/-Leu/X-α-Gal平板。观察平板上菌落的颜色、数量及大小。结果1.成功构建了用于酵母双杂交筛选的诱饵载体pGBKT7-M122,其在SD/-Trp/X-α-Gal平板上的菌落为白色。2.转化有重组质粒pGBKT7-M122和空载体质粒pGBKT7的酵母菌株AH109,在2个SD/-Trp平板上长出的菌落大小一致数量相当。结论构建的诱饵质粒pG-BKT7-M122无自激活作用,对酵母菌株AH109亦无毒性。能够用于酵母双杂交系统以筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白分子。
王慧田佳罗丹刘兴楼舒赛男张慧娟方峰
关键词：诱饵载体酵母双杂交系统自激活作用小鼠巨细胞病毒
M122蛋白与宿主因子Myst4的相互作用位点被引量：1
2011年
目的明确M122蛋白与宿主因子Myst4相互作用的位点。方法以诱饵载体pGBKT7-M122为模板,采用PCR方法扩增不同长度大小的M122基因片段,并将其分别插入至pMD-T simple载体,构建含有不同长度M122基因片段的重组质粒。将构建成功的各个重组质粒分别用限制性内切酶EcoRI和SalI进行双酶切鉴定,并送测序。将测序正确的重组质粒采用同样的内切酶进行双酶切,凝胶回收试剂盒回收不同长度大小的M122基因片段,并将其分别亚克隆至pGBKT7-BD载体构建含有不同长度M122基因片段的诱饵质粒。将构建成功的各个诱饵质粒分别用限制性内切酶EcoRI和SalI进行双酶切鉴定,并送测序。将测序正确的各个诱饵质粒分别与pGADT7-Myst4质粒共同转化至酵母菌株AH109感受态细胞,转化后的酵母细胞分别涂板于营养缺陷培养基SD/-Trp/-Leu和SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-Gal平板。M122与宿主因子Myst4相互作用的位点通过营养缺陷筛选确定。结果成功扩增了编码不同M122蛋白突变体的基因片段,并将其正确插入诱饵载体,构建了含有不同长度大小M122基因片段的诱饵质粒;通过酵母双杂交筛选明确了M122蛋白与宿主因子Myst4相互作用的结合位点位于M122蛋白的1～148氨基酸。结论 M122蛋白的1～148氨基酸是其与宿主因子Myst4相互作用所必需的,为研究M122蛋白在MCMV致神经系统损伤的分子机制中的作用提供了实验基础。
王慧张菊舒赛男刘兴楼李革方峰
关键词：巨细胞病毒
Identification of proteins that interact with murine cytomegalovirus early protein Ml12-113 in brain
2011年
Background Murine cytomegalovirus （MCMV） early protein Ml12-113 is involved in viral DNA replication and believed to play a crucial role in the viral pathogenesis. To investigate the biological function of Ml12-113 protein in the pathogenesis of the brain disorders caused by cytomegalovirus （CMV）, a screening for proteins interacting with Ml12-113 was performed by a yeast two-hybrid system. Methods Bait plasmid pGBKT7-M112-113 was constructed and transformed into AH109 yeast. After confirmation of the expression of MCMV Ml12-113 in yeast, the bait yeast was mated with a prey yeast containing mouse brain cDNA library plasmid to screen the proteins interacting with M 112-113. Interactions between Ml12-113 and the obtained proteins were verified by yeast two-hybrid assay and chemiluminescent co-immunoprecipitaion. Results Two proteins interacting with M112-113 were identified, including metastasis-associated 1 （MTA1） and zinc finger, CCHC domain containing 18 （ZCCHC18）. Ml12-113 protein could interact with MTAt or ZCCHC18 in yeast and mammalian cells. Conclusion The interactions of Ml12-113 with MTA1 or ZCCHC18 may be related to the pathogenesis of MCMV-associated disease in central nervous system.
WANG Hui LIU Xing-lou SHU Sai-nan HUANG Yong-jian FANG Feng
关键词：CYTOMEGALOVIRUSBRAIN
MCMV影响神经干细胞cyclins表达和细胞周期进程的体外实验研究被引量：4
2010年
目的:观察鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对体外培养神经干细胞(NSCs)细胞周期进程和cyclins表达的影响,探讨MCMV感染致脑发育异常的机制。方法:本实验体外分离、培养和鉴定BABL/C胎鼠NSCs,以感染复数(MOI)为5,1和0.1的MCMVsmith毒株感染NSCs并于感染后1,2,3,4,5,6d收集细胞,采用Cyclin/DNA双参数流式细胞术检测感染细胞cyclinA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE的表达和细胞周期时相的动态变化,观察MC-MV对感染NSCs细胞周期进程的影响。结果:体外分离培养的NSCs呈球样生长,神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性,并可进一步分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和NF-200阳性的神经元;各感染组cyclinA,cyclinB1,cy-clinD1和cyclinE的表达均上调,其中MOI=0.1表达逐渐上升,在第6d达峰值,MOI=1组表达高峰在第4d,MOI=5组表达高峰在第3d;感染组G0/G1期细胞比率减少,S期和G2/M期细胞比率增加,其变化趋势与cyclins的表达基本一致,并随MOI的增加变化越明显。结论:Cyclin/DNA多参数流式细胞术可用于NSCs细胞周期的分析;MCMV可通过上调cyclinA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE的表达来影响NSCs细胞周期进程,并与MOI存在一定量效依赖关系;MCMV感染可诱导NSCs从G0/G1期进入S期,出现S期和G2/M期偏移和阻滞,影响NSCs细胞周期进程,这可能是CMV抑制NSCs增殖并导致先天性脑发育异常的重要机制之一。
罗丹舒赛男田佳王慧周玉峰葛海霞周华李革方峰
关键词：巨细胞病毒神经干细胞细胞周期细胞周期素
鼠巨细胞病毒抑制神经干细胞分化及分化基因表达的体外研究被引量：2
2009年
目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对体外培养神经干细胞（NSCs）分化及分化基因表达的影响，探讨CMV先天感染致神经损伤的机制。方法体外分离培养和鉴定BALB／c胎鼠NSCs并检测其分化潜能，用感染复数（MOI）为5、1和0．1的MCMVSmith毒株感染NSCs并进行分化培养，倒置显微镜下观察细胞形态学改变，流式细胞术检测分化细胞比率，免疫荧光法观察NSCs及其分化细胞标记物Nestin、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）表达的变化，采用MCMV早期抗原（EA）示踪感染过程（MOI=1），real—time RT-PCR检测分化早期NSCsWnt信号途径关键分化基因wnt-3和Wnt-7amRNA水平的动态变化。结果体外培养的NSCs呈球样生长，神经干细胞特异性标记Nestin表达阳性，并可进一步诱导分化为NF-200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞；分化培养后，感染组NSCs不能贴壁分化生长并逐渐出现肿胀，细胞Nestin表达下调缓慢并显著高于正常对照组，而GFAP和NSE表达显著低于正常对照组（P〈0．05），可检测到MCMVEA的阳性表达；分化培养3～9d，感染组Nestin阳性细胞比率显著高于正常对照组，GFAP和NSE阳性细胞比率显著低于正常对照组（P〈0．05）；感染组Wnt-3 mRNA水平在分化培养后第1～2天显著低于正常对照组（P〈0．05），感染组Wnt-7a mRNA水平在第0．5～2天明显低于正常对照组（P〈0．05）；感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显。结论MCMV感染可明显抑制NSCs向神经元和星形胶质细胞方向分化，导致分化细胞比率减少；下调或干扰NSCs Wnt信号途径分化基因Wnt4和Wnt-7a的表达；抑制NSCs分化及其分化基因表达的效应与MOI大小存在一定量效依赖关系；MCMV可能通过抑制NSCs分化基因的表达来抑制其分化，这可能是CMV先天感染致脑发育异常的重要机制之一。
罗丹周玉峰舒赛男田佳王惠周华李革方峰
关键词：巨细胞病毒神经干细胞分化
小鼠MCMV先天感染模型的构建及神经系统感染状况的观察
2012年
目的建立小鼠巨细胞病毒（MCMV）先天感染模型，并观察其脑组织的病理变化及感染状况。方法取孕11～13．5d的BALB／c鼠，模型组羊膜腔微量接种K181毒株（病毒量1×10^3PFU），对照组注射DMEM培养液。单独饲养5d后处死孕鼠，剖宫取出胎鼠，麻醉处死，取胎鼠脑组织制作冰冻切片。胎脑组织切片常规HE染色，光镜下观察病理学变化；采用免疫酶组化及免疫荧光法检测脑组织中的MCMV早期抗原。结果感染组胎鼠存活率为71．9％。与对照组相比，羊膜腔内接种MCMV病毒对胎鼠存活率、吸收胎率、死胎率及胎鼠头部重量无明显影响，但可致胎鼠体重降低。感染组胎鼠脑组织出现明显的病理变化。在宫内感染组，免疫酶学组化法发现脑室区、脑室管膜下区、大脑皮质和海马区可见病毒感染细胞；免疫荧光法观察到的主要感染部位与免疫酶组化法基本一致。结论通过羊膜腔内注射MCMV病毒成功建立MCMV先天感染小鼠模型，为研究MCMV先天感染致脑发育异常机制提供合适的整体研究模型。
杜小弋周玉峰刘兴楼舒赛男方峰
关键词：巨细胞病毒动物模型先天感染神经系统脑组织
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