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新型肺炎链球菌疫苗研究进展被引量：1: 2009年; 肺炎链球菌是肺炎、脑膜炎、败血症、中耳炎和鼻窦炎的主要致病菌。目前针对肺炎链球菌疾病的预防主要是以多糖为基础的23价多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗，但因其有血清型的限制，应用有很大的局限性。因此以肺炎链球菌表面毒力因子或蛋白为基础的、无血清型限制的肺炎链球菌蛋白疫苗将成为新型肺炎链球菌疫苗发展的方向，此文综述了肺炎链球菌蛋白疫苗的研究进展。; 徐江红陈兵; 关键词：疫苗细菌蛋白质类

基因工程技术制备中耳炎肺炎球菌疫苗新型蛋白载体被引量：1: 2006年; 目的应用基因工程技术制备中耳炎肺炎球菌疫苗新型载体——肺炎球菌溶血素(pneumolysin,Pn)。方法根据报道的Pn基因序列,设计一对各带有一个限制性内切酶位点的引物,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从肺炎球菌基因组DNA中扩增出Pn基因,对该基因片段进行酶切、回收后克隆入表达载体pET-28a,并转化至大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞中。在培养基中加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导Pn基因的表达,用超声波破菌后,经固化镍树脂亲和吸附和纯化在羧基端带有6个组氨酸的重组Pn蛋白。结果通过常规克隆方法和PCR技术,成功构建Pn基因,DNA测序证实基因构建正确,表达产物相对分子质量约52 000,表达量约占总菌体蛋白的8％。结论利用基因工程技术可以克隆Pn基因,并获得该基因在宿主菌中的表达。采用固化镍树脂亲和纯化技术制备出重组Pn蛋白,为进一步研制肺炎球菌多糖和其自身蛋白结合的新型中耳炎疫苗提供参考。; 陈兵戴文佳王正敏陈泽宇迟放鲁李忠明; 关键词：中耳炎肺炎球菌疫苗抗链球菌溶血素

肺炎球菌溶血素基因的克隆: 2006年; 目的应用基因工程技术克隆肺炎球菌溶血素(pneumolysin,Pn)基因,为研制中耳炎蛋白多糖结合疫苗奠定基础。方法根据Walker等肺炎球菌溶血素基因序列(GenBankaccessionno.X52474),设计一对各带有一个限制性酶切位点的引物,运用PCR从肺炎球菌的染色体DNA扩增出肺炎球菌溶血素基因。对该PCR产物进行酶切、回收,并将其克隆入表达载体pET-28a,然后转化至大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞中。结果通过常规基因克隆方法和PCR技术,成功构建重组体,酶切鉴定和基因测序证实构建正确。结论利用基因工程技术成功克隆了肺炎球菌溶血素基因。; 陈兵戴文佳王正敏李忠明; 关键词：疫苗中耳炎溶血素类

肺炎链球菌自溶素基因的克隆、表达及蛋白纯化被引量：3: 2009年; 目的克隆肺炎链球菌自溶素(LytA)基因并在大肠埃希菌中表达及蛋白纯化。方法用PCR方法从肺炎链球菌基因组中克隆肺炎链球菌自溶素基因,然后将其插入原核表达载体pET32a(+),构建pET32a(+)-LytA重组质粒,经IPTG诱导使该基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,亲和层析法纯化目的蛋白,将获得的蛋白用Western blot鉴定。结果扩增出的DNA序列与GenBank中的LytA基因序列一致,成功构建了pET32a(+)-LytA重组质粒并在大肠埃希菌中高效表达,所表达的蛋白经Western blot证实为肺炎链球菌自溶素融合蛋白。结论成功克隆了肺炎链球菌自溶素基因,并将其在大肠埃希菌中表达、纯化,为新型肺炎链球菌疫苗的研制奠定了基础。; 徐江红陈兵章德广郭建顾凌澜; 关键词：肺炎链球菌

肺炎球菌荚膜多糖和溶血素结合疫苗的制备及其免疫原性的研究被引量：5: 2006年; 目的研制肺炎球菌荚膜多糖(PS)与肺炎球菌溶血素(蛋白)偶联结合疫苗。方法用PCR扩增肺炎球菌溶血素(Pn)基因,将其克隆入表达载体pET-28a质粒中,然后转化大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞,并以IPTG诱导进行蛋白质表达,对所得蛋白质用固相Ni-NTA树脂作纯化,再用SDS-PAGE鉴定表达的纯化蛋白(rPn)。以福尔马林脱毒rPn,去除其溶血活性,然后用氨基还原法将脱毒的rPn与PS(19F血清型)偶联结合,加入铝佐剂制备成疫苗。以该疫苗腹腔注射接种小鼠,用ELISA法检测小鼠血清中抗PS及抗Pn的抗体水平。结果成功扩增和克隆了Pn基因,经诱导表达得到rPn蛋白,纯化后纯度达90％以上。PS与Pn结合物经凝胶层析柱分离,其洗脱峰较PS与Pn二峰明显前移。用该结合疫苗免疫的小鼠血清中抗PS(19F)抗体及抗Pn抗体的效价均明显高于阴性对照组(P＜0．01)。结论用基因工程技术制备的肺炎球菌溶血素作为蛋白载体,脱毒后与肺炎球菌多糖偶联而成的结合疫苗能在小鼠体内诱导出明显的免疫应答反应。; 陈泽宇陈兵王正敏戴文佳邓月; 关键词：肺炎球菌肺炎球菌溶血素免疫应答

肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗的研制及其在幼小鼠体内诱导的免疫应答被引量：3: 2005年; 目的研制肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗,并通过幼小鼠的动物实验检测其免疫原性。方法用19F 型肺炎球菌多糖以氨基还原法分别与牛血清白蛋白及鸡卵清蛋白偶联结合,以凝胶柱纯化,加入铝佐剂制备成疫苗,然后分别以3种不同多糖含量的结合疫苗腹腔接种3wk 龄幼小鼠,每隔2wk 复种一次,接种3次后采血。多糖对照组幼小鼠以19F 型肺炎球菌多糖疫苗接种,阴性对照组以0.15 M PBS 接种。用 ELISA 法检测动物血清中抗肺炎球菌多糖抗体水平。结果经层析后肺炎球菌多糖蛋白结合物的 OD 峰值较多糖及载体蛋白的各自峰值均明显前移,以多糖含量分别为0.25μg、1.0μg、4.0μg的结合疫苗接种的3组幼小鼠血清中抗肺炎球菌多糖抗体平均滴度分别为1:400、1:800、1:1600,多糖对照组为1:50(P<0.05)。结论已建立制备肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗的方法,该疫苗能在幼小鼠体内引起明显的免疫应答。; 陈泽宇陈兵王正敏李忠明宋丹迟放鲁; 关键词：肺炎球菌中耳炎免疫预防多糖蛋白结合疫苗肺炎球菌多糖免疫应答

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