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广东省科技计划工业攻关项目(2010803160)
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余玉明
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人CD8+CD28一抑制性T淋巴细胞的体外扩增及其抗原特异性调节作用
2011年
目的探讨在体外大量扩增CD8+CD28一抑制性T淋巴细胞(Ts细胞)的方法,并检验其免疫调节作用。方法分离健康志愿者全血中CD8+T淋巴细胞,在含不同细胞因子和异体抗原提呈细胞(APC)的培养条件下进行体外扩增。应用流式细胞术对扩增过程中CD28一细胞亚群的比例进行监测。分为3组进行混合淋巴细胞培养,反应细胞均为CD4’T淋巴细胞:B-Am组以来源于原致敏供者的APC作为刺激细胞,I-APC组以HLA-A、B、DR全错配的无关供者的APC作为刺激细胞,Dynabeads组以包被有抗CD3和CD28单克隆抗体的免疫微球Dynabeads作为刺激细胞;扩增后的Ts细胞作为第三方调节细胞加入混合淋巴细胞培养中,测定其对CIN’T淋巴细胞增殖的抑制作用。结果在含白细胞介素2(IL-2)+IL-7+IL-15的培养条件下,CD8+T淋巴细胞培养后CD8+CD28T淋巴细胞亚群的比例最高(P〈0.05)。BAPc组不加入Ts细胞时,增殖的CD4+T淋巴细胞比例为66.7%,当加入的Ts细胞与反应细胞的比例分别为0.5:1、0.1:1和0.02:1时,增殖的CD4+T淋巴细胞比例分别为16.5%、34.1%和62.6%。Ts细胞对CIN’T淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,而在I—Apc组和Dynabeads组中,此抑制作用不明显。结论应用含IL-2+IL_7+IL_15的培养条件联合异体APC刺激可以在体外大量扩增Ts细胞,扩增所得Ts细胞在体外对供者CD4+T淋巴细胞的增殖有明显抗原特异性抑制作用。
余玉明
刘艳君
邓文锋
于立新
关键词:
细胞培养技术
CD8阳性T淋巴细胞
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