国家自然科学基金(81101723)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：吴海卫张雷李好胡若愚承燕更多>>
- 相关机构：南京大学南京军区南京总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠骨髓来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨自小鼠骨髓分离培养内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)的方法及其鉴定和生物学特性。方法:密度梯度离心法分离获取小鼠骨髓单核细胞,培养于EGM-2 SingleQuots培养液中,每天于倒置显微镜下观察EPC的形态。应用细胞免疫荧光法、流式细胞技术鉴定EPC表面抗原标志CD34、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2),荧光显微镜检测EPC吞噬DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-AC-LDL)及结合FITC标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-lectin)功能。结果:早期EPC呈长梭形,细胞群落可呈现线状、管状、网状生长状态,培养7 d后出现干细胞集落,并逐渐增多;培养3周后,细胞集落逐渐消失,细胞呈现铺路石样生长状态。培养获得的EPC绝大部分可同时表达细胞表面标记物CD34及VEGFR2,并具有吞噬DiI-AC-LDL及结合FITC-UEA-lectin功能。结论:自小鼠骨髓中分离、培养、纯化EPC是一种方便、经济、高效的培养方法。通过该方法培养获得的EPC增殖能力强,数量充足,生物学特性稳定。该方法对今后利用EPC进行细胞移植治疗的相关实验有着重要意义。
- 胡若愚承燕李好张雷景华吴海卫
- 关键词：内皮祖细胞骨髓干细胞小鼠
- 小鼠同种异体内皮祖细胞移植治疗急性肺损伤的相关研究被引量：1
- 2014年
- 目的:观察外源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)移植对急性肺损伤(ALI)小鼠受损肺组织的保护作用并探讨其机制。方法:选用转基因EGFP-BALB/c小鼠作为细胞移植供体,获得骨髓单核细胞,体外培养扩增获得足够数量的表达绿色荧光蛋白的EPCs(EGFP-EPCs)。选用野生型BALB/c小鼠18只,随机分为假手术组、ALI组及EPC治疗组,每组6只。假手术组气管内滴注PBS,其后经尾静脉注射PBS;ALI组气管内滴注脂多糖溶液,其后经尾静脉注射PBS;EPC治疗组气管内滴注LPS,其后经尾静脉注射EGFP-EPCs。各组小鼠术后3 d处死,留取肺组织标本。荧光显微镜下观察各组肺组织中EGFP-EPCs表达情况,HE染色评价各组肺组织损伤程度并进行肺损伤指数评分,比较各组肺组织湿干重比,行肺组织CD34免疫组化染色并测定肺微血管密度(MVD)。结果:各组小鼠建模过程顺利,无围手术期死亡。EPC治疗组小鼠肺组织冰冻切片中可观察到均匀附着于血管内皮的绿色荧光表达,而假手术组及ALI组则未见明显的绿色荧光。HE切片显示:LPS可致严重的肺组织损伤,而EPC治疗组肺损伤程度较ALI组明显减轻,肺损伤指数明显低于ALI对照组(P<0.001)。肺组织湿干重比ALI组明显高于假手术组(P<0.001),而EPC治疗组较ALI组明显降低(P<0.05)。免疫组化染色显示:EPC治疗组肺组织切片中CD34的表达明显增加,MVD值均明显高于假手术组及ALI组(P<0.001)。结论:对ALI小鼠行外源性EPC移植治疗,输入体内的EPC可定向迁移并黏附于受损的肺毛细血管内皮,直接参与肺毛细血管内皮修复及重建,维持肺毛细血管内皮完整性,减少炎症细胞向肺间质、肺泡内的浸润及对肺组织的炎性损伤。同时,外源性EPC治疗提高了EPC向受损肺组织归巢及受损肺组织内的血管新生。
- 胡若愚承燕李好张雷景华吴海卫
- 关键词：内皮祖细胞细胞移植急性肺损伤小鼠
- 大鼠体外循环后肺损伤的实验研究被引量：3
- 2014年
- 目的研究大鼠体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)后肺脏损伤及其相关机制。方法 24只雄性SD大鼠随机均分成两组:伪手术组(Sham组)和体外循环组(CPB组),Sham组建立CPB模型管道,不进行体外循环;CPB组建立体外循环后流量逐步调至最大[≥100 ml/(kg·min)]维持转流60 min。于转流开始前(T0)和转流结束后(T1)、术后1 h(T2)、术后2 h(T3)、术后12 h(T4)行血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)因子检测及动脉血气分析。术后12 h(T4)获取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织检测TNF-α、MMP-9浓度及肺组织和和核转录因子NF-κB(nuclear transcription factor-Kappa B,NF-κB)的表达水平,并行组织学检查。结果 CPB组CPB后大鼠血清、肺组织及BALF中炎症因子TNF-α、MMP-9均较Sham组明显上升,CPB组肺组织NF-κB蛋白表达水平显著高于Sham组(P<0.05);组织学检查发现CPB组表现为中性粒细胞浸润、肺间质水肿、出血、透明膜形成和坏死等病理变化。结论 CPB可导致肺组织NF-κB激活,上调TNF-α、MMP-9等炎症因子表达,引起肺损伤。
- 黄海嵘张雷李德闽吴海卫易俊申翼董国华李忠东王常田
- 关键词：体外循环炎症因子肺损伤
