国家自然科学基金(30972567) 作品数:10 被引量:19 H指数:3 相关作者: 叶彬 张静 蔡辉 赵毅峰 孔璟 更多>> 相关机构: 重庆医科大学 青海大学 青海省地方病预防控制所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
超声造影剂协同下的高强度聚焦超声对包虫原头蚴酶活性的影响 被引量:5 2013年 为探索高强度聚焦超声结合适宜比例的微泡造影剂对离体细粒棘球绦虫原头蚴酶活性的影响,实验分离包虫原头蚴,在原头蚴悬液中加入比例为1:80的微泡造影剂(含氟脂质体微泡),以声功率为50W的高强度聚焦超声波辐照30s,辐照后悬液涂片作酶组织化学染色,检测原头蚴三磷酸腺苷酶、葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示,超声剂量相同时,微泡造影剂组的原头蚴三磷酸腺苷酶和琥珀酸脱氢酶活性明显低于单纯超声辐照组(P<0.05);葡萄糖-6-磷酸酶活性有一定降低;阴性对照组无酶反应物产生。高强度聚焦超声结合微泡造影剂能增强对离体原头蚴三磷酸腺苷酶和琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。 孔璟 蔡辉 叶彬 张静 韩秀敏 杨永海 李发琪关键词:包虫 原头蚴 高强度聚焦超声 微泡造影剂 三磷酸腺苷酶 葡萄糖-6-磷酸酶 高吸水性树脂协同高强度聚焦超声对细粒棘球绦蚴原头节细胞酶活性的影响 2015年 目的为探索高吸水性树脂(Super Absorbent Resin,SAR)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对离体细粒棘球绦蚴原头节酶活性的影响。方法将离体原头节悬液(每mL含有2 000个原头节),分为4组:I组(仅原头节悬液)、Ⅱ组:仅SAR组(0.01gSAR)、III组(单纯HIFU照射)、IV组(HIFU照射+0.01gSAR)、Ⅴ组(HIFU照射+0.1gSAR)。以声功率为100w的高强度聚焦超声波辐照30s,辐照后悬液涂片进行台盼兰及经冰冻切片酶组织化学染色,观察原头节形态学改变,并用半定量方法检测原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示当超声剂量一定时,原头节的形态改变与SAR剂量有正效应关系,SAR量越大,其破坏程度越高。正常原头节透亮、外形完整,各实验组原头节深染或结构崩解。单纯HIFU照射组在作用60s时,原头节死亡率为80.1%;HIFU结合不同量SAR两组原头节在HIFU作用10s时,其死亡率分别为87.82%和89.1%。加入SAR后再经过HIFU照射各组原头节内细胞葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性降低,明显低于单纯超声组(P<0.05),阴性对照组无酶反应物产。结论 SAR能增加HIFU辐照对原头节的急性杀伤作用,使原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶活性和琥珀酸脱氢酶活性均显著低降低,从而影响其活力。 张静 王梦莹 叶彬 赵毅峰 韩秀敏 李发琪 王琦关键词:高吸水性树脂 高强度聚焦超声 葡萄糖-6-磷酸酶 高强度聚焦超声结合微泡造影剂杀伤原头蚴的效果 被引量:9 2011年 目的探讨高强度聚焦超声结合不同比例微泡造影剂对离体原头蚴的杀伤效应。方法在原头蚴悬液中加入不同比例的微泡造影剂(含氟脂质体微泡),以相同超声功率及辐照时间作用(治疗声功率为50W,辐照时间为30s)。台盼蓝排斥试验计数原头蚴杀伤率,光镜检测原头蚴形态结构变化。结果超声剂量一定时,加入适宜比例的微泡造影剂组原头蚴杀伤率比单纯超声辐照组高(P<0.05);随着微泡造影剂比例的增大,原头蚴杀伤率呈增高趋势;原头蚴结构损伤严重,台盼蓝染色深,被膜皱缩体积变小,甚至被膜崩解成碎片,小钩及钙颗粒散在分布。结论 HIFU结合微泡造影剂能增强对离体原头蚴的杀伤效应。 孔璟 叶彬 张静 韩秀敏 杨永海 李发琪关键词:高强度聚焦超声波 微泡造影剂 棘球蚴 原头蚴 高吸水性树脂联合超声造影剂对HIFU杀伤棘球蚴原头节的增效作用 2013年 为探索高吸水性树脂(superabsorbentpolymer,SAP)与超声造影剂(ultrasoundcontrastagent,UCA)协同增强高强度聚焦超声(highintensityfocusedultrasound,HIFU)杀伤棘球蚴原头节的效果,将30管棘球蚴原头节悬液(各含约6000--7500个原头节)分为5组,分别为A组(对照组,仅给予无功率HIFU普通超声辐照)、B组(单纯HIFU辐照,50W)、C组(HIFU辐照+10txlUCA)、D组(HIFU辐照+0.01gSAP)和E组(HIFU辐照+10μlUCA+0.01gSAP)。结果显示,B组超声图像灰度变化明显,悬液温度和原头节死亡率(26.0℃±012℃、30.4%)均比A组的(18.0℃±0.1℃、1.9%)高(P〈0.01)。C、D组的超声图像灰度变化比B组更为明显,悬液温度(27.0℃±0.2℃,28.2℃±0.2℃)和原头节死亡率(49.96%,53.69%)也比B组的高(P〈0.01)。E组悬液温度(28.4℃±0.3℃)与C、D组的差异无统计学意义(P〉0.05),但原头节死亡率(69.7%)远高于C、D组(P〈0.01),且死亡的原头节结构破坏较其余3组更为严重,内部结构消失。 蔡辉 陈露露 叶彬 赵海龙 刘爱波 张静 赵毅峰关键词:高吸水性树脂 超声造影剂 高强度聚焦超声 棘球蚴 原头节 自制高吸水性树脂对棘球蚴囊液吸水性能的测试 被引量:2 2011年 目的制备淀粉类高吸水性树脂,测试其对棘球蚴囊液吸水性能及影响因素。方法以玉米淀粉和丙烯酸为原料,N,N-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,过硫酸铵为引发剂,采用水溶液聚合法制备淀粉接枝丙烯酸高吸水性树脂。分别测定高吸水性树脂在不同环境温度(37℃、25℃、20℃)、不同粒径对去离子水、0.9%生理盐水、无水酒精和棘球蚴囊液吸水倍率,并测定了不同粒径高吸水性树脂吸水后凝胶的保水性能。并通过光镜观察吸水前后的凝胶结构。结果自制的淀粉类高吸水性树脂在去离子水中瞬时吸水倍率在700倍以上,在棘球蚴囊液中为200~300倍,生理盐水中为25倍左右,在无水乙醇中树脂颗粒几无吸水能力。160~180目大小的颗粒其对去离子水的最大吸水倍率可达到700倍,在4~8min内即可达到吸水高峰;80~120目大小的颗粒吸水倍率亦可达700倍,但在吸水后16min时才达到吸水高峰。160~180目大小的颗粒常压室温(25℃)放置2d保水率为55%,0.5mm×0.5mm×0.5mm颗粒常压室温(25℃)放置5d保水率为58%。20℃、25℃和37℃时同样大小的树脂颗粒其吸水倍率接近。10倍光镜即可观察到树脂颗粒吸液后形成的网格状结构。结论成功制备各种粒径的高吸水性树脂颗粒,其吸水倍率可达700倍;树脂颗粒越小,其吸水速度越快,但保水效果较差;颗粒越大,吸水速度越慢,但保水效果好。温度变化对吸水速率影响不大。溶液性质,尤其是溶液含水量对树脂颗粒吸水率影响较大,因此树脂颗粒在去离子水中吸水倍率最高,其次棘球蚴囊液,生理盐水和对无水酒精几乎无吸水能力。 张静 孔璟 叶彬 邹晓毅 武卫华关键词:高吸水性树脂 微泡造影剂对高强度聚焦超声杀伤离体棘球蚴的增强作用 被引量:4 2012年 目的比较超声造影剂(ultrasound contrast agent,UCA)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultra-sound,HIFU)与单纯HIFU辐照对离体细粒棘球蚴包囊的杀伤效果的不同,探索UCA增强HIFU杀伤棘球蚴的方法。方法采集新鲜包囊按直径大小随机分为6个区组,每组25个,每5个包囊为1试验组随机接受以下试验:普通B超照射的空白对照,0.1mL UCA处理,单纯HIFU辐照,0.1mL UCA+HIFU辐照,0.2mL UCA+HIFU辐照。HIFU辐照后观察分析包囊灰度变化,光镜观察原头蚴形态变化并计数其死亡率。结果 HIFU辐照功率一定时,加入UCA能增加HIFU辐照包囊灰度变化和原头蚴的死亡率,并且该效果随UCA剂量的增加而加强。结论 UCA能增强HIFU对离体细粒棘球蚴杀伤效率,提高对原头蚴的杀伤效果。 蔡辉 张静 叶彬 赵毅峰 郭应兴 韩秀敏 张成武关键词:细粒棘球绦虫 棘球蚴 原头蚴 超声造影剂 高强度聚焦超声 两种棘球绦虫的水通道蛋白基因克隆及功能特性的比较 被引量:3 2018年 目的探索棘球绦虫水通道蛋白(aquaporin,AQP)在棘球蚴、泡球蚴囊液形成中的作用,为阐明棘球蚴、泡球蚴囊液的形成过程以及筛选棘球蚴病新的药物治疗靶点提供理论依据。方法利用RT-PCR扩增棘球蚴、泡球蚴AQPs基因,构建AQPs体外转录载体,并在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞中进行异源表达,以验证其水通道功能。利用生物信息学方法分析两种棘球绦虫水通道蛋白跨膜结构域特点及差异,并对棘球绦虫和人AQPs进行多序列比对,分析棘球绦虫AQPs序列结构与人AQPs的差异。结果通过RT-PCR成功克隆了棘球蚴EgAQP4和EgAQP9、泡球蚴EmAQP4和EmAQP9四个基因,注射了这些基因cRNA的卵母细胞与注射DEPC水的对照组卵母细胞的体积变化率(V/V0)差别无统计学意义(F=1.143,P>0.05),透水系数差别亦无统计学意义(F=1.416,P>0.05),这四个AQPs基因在非洲爪蟾卵母细胞中未表现出水通道的功能。跨膜结构域预测及多序列比对结果表明,与经典的水通道蛋白相比,EgAQP4和EmAQP4虽然N和C末端均位于胞质侧,但跨膜结构域数目为4个,NPA基序替换为NPM和NPT;而EgAQP9和EmAQP9虽然具有2个保守的NPA基序,但跨膜结构域数目为5个,N末端位于胞外侧、C末端位于胞质侧。棘球绦虫AQPs蛋白结构存在的这些差异,可能与其在卵母细胞中未表现水通道蛋白的功能有关。结论两种棘球绦虫基因组中都存在编码AQPs的基因,但这些AQPs基因的功能验证试验未见到水通道功能。该结果可能正好说明了囊液的水分子既不能通过AQPs进入生发层细胞而致使细胞肿胀坏死,也不能以AQPs为通道从生发层细胞转移出囊壁,致使囊液累积、棘球蚴包囊或泡球蚴囊泡体积长大。 刘许诺 王芬 吴宏烨 李锴 范俊杰 叶彬关键词:细粒棘球绦虫 多房棘球绦虫 多房棘球蚴 水通道蛋白 超声造影剂对高强度聚焦超声破坏棘球蚴囊壁的增强作用 被引量:2 2014年 目的观察高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)联用超声造影剂(ultrasound contrast agent,UCA)辐照细粒棘球蚴包囊后囊壁的损伤情况。方法 15个直径为30mm左右的包囊随机分为3组:对照组,接受超声假照;单纯HIFU组,接受100W HIFU辐照;HIFU+UCA组,注入0.1mL UCA后进行HIFU辐照。辐照后观察超声图像的灰度变化和囊壁的肉眼变化,并取囊壁组织制作病理切片、扫描电镜切片和透射电镜切片,观察其病理改变。结果 100 W HIFU辐照可破坏囊壁的部分生发层和角质层;加入UCA后进行100W HIFU辐照,生发层几乎无残留,角质层也遭到更严重的破坏。结论 UCA能增强HIFU对离体细粒棘球蚴囊壁的破坏作用。 蔡辉 赵海龙 叶彬 刘爱波 陈露露 张静 王梦莹关键词:超声造影剂 高强度聚焦超声 囊型包虫病 棘球蚴 原头蚴成囊过程中内参基因的确定及水通道候选基因的转录表达 被引量:3 2018年 目的筛选合适的内参基因以检测细粒棘球绦虫水通道蛋白(aquaporins of Echinococcus granulosus,EgAQPs)基因在原头蚴发育为棘球蚴过程中的转录表达水平。方法通过geNorm软件分析5个候选内参基因(ND1、ATP6、elp、actin和ActⅡ)在原头蚴成囊过程中的稳定性,并运用RT-q PCR方法检测体外培养原头蚴及原头蚴在小鼠体内囊化形成的继发棘球蚴中EgAQPs基因转录表达量。结果actin和ActⅡ、ATP6和ND1分别为检测体外培养原头蚴和原头蚴囊化形成的继发棘球蚴囊壁生发层细胞EgAQPs基因转录表达状态的理想内参基因。EgAQP3和EgAQP9在体外培养第3天的原头蚴中转录表达量最高,随着培养时间的增加,转录表达量呈持续下降的趋势,且不同培养时间转录表达量的差异有统计学意义(P<0.05);EgAQP4在体外培养第25天的原头蚴中转录表达量最高(P<0.05),在体外培养第3、15、35天的原头蚴中转录表达量较低,这3个时间点的差异无统计学意义(P>0.05)。EgAQP3、EgAQP4和EgAQP9在原头蚴中转录表达量最高(P<0.05),随着感染时间的延长,EgAQP3、EgAQP4和EgAQP9的转录表达水平在接种原头蚴感染小鼠后第3~7个月的继发棘球蚴囊壁生发层细胞中转录表达水平很低,差异无统计学意义(P>0.05)。EgAQP、EgAQP1、EgAQPFA-CHIP和EgAQPAnG在原头蚴和继发棘球蚴囊壁生发层细胞中的转录表达水平均很低,基本上检测不到。结论通过geNorm软件筛选了原头蚴发育为棘球蚴过程中稳定的内参基因;原头蚴囊化的继发棘球蚴囊壁生发层细胞中EgAQPs基因的转录表达水平很低,可能与棘球蚴液形成或积累有关。 王芬 刘许诺 吴宏烨 李锴 范俊杰 叶彬关键词:细粒棘球绦虫 原头蚴 棘球蚴 水通道蛋白 内参基因 转录表达 高吸水性树脂对高强度聚焦超声杀伤肝包虫囊的增强效应 被引量:2 2013年 目的探索高吸水性树脂(superabsorbent resin,SAR)增强高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)热效应的可行性及杀伤棘球蚴内原头节效率。方法将囊径大小为4.5~5cm的新鲜肝包虫囊分为6个组。空白(采取普通超声照射,无SAR)对照组(Ⅰ组),空白(采取普通超声照射)对照组(囊内注入半饱和量SAR)(Ⅱ组),空白(采取普通超声照射)对照(囊内注入饱和量SAR)(Ⅲ组);单纯HIFU辐照对照组(Ⅳ组),以单纯HIFU辐照,HIFU照射+SAR半饱和量辐照(Ⅴ组),HIFU照射+SAR饱和量(Ⅵ)。各照射试验组均采用200w声功率、点扫的方式照射整个包囊。照射后立即测定距包囊5mm部位肝组织、囊液、囊壁的温度,并抽取囊液涂片,经台盼兰染色后计数原头节的死亡率。结果 HIFU照射后,棘球蚴囊壁、囊液、包囊周围肝组织的温度均有升高,HIFU+SAR作用组的各测量点温度分别为:囊壁(49±0.87)℃和(55±0.81)℃,囊液(38.9℃±1.02)℃和(44.6±1.82)℃,肝(34.5±0.88)℃和(37.88±0.67)℃,均显著高于单纯HIFU照射组和超声假照组(P<0.05)。HIFU照射各组原头节杀伤率明显高于对照组,各组(从Ⅰ到Ⅵ组)原头节死亡率分别为22.94%、23.11%、24.43%、55.28%、63.4%、74.2%,Ⅳ、Ⅴ组(即SAR协同HIFU照射)原头节杀伤效率高于单纯HIFU照射组,且达囊液饱和状态时,其内原头节杀伤效率高于半饱和状态,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SAR协同HIFU照射能使棘球蚴包囊的囊壁、囊液产生明显的升温效应,协同HIFU杀伤囊液内的游离原头节,SAR的剂量越大,HIFU照射杀伤原头节的效应越强。 张静 叶彬 蔡辉 张成武 赵毅峰 韩秀敏 李发琪 王琦关键词:包虫 高强度聚焦超声 高吸水性树脂