公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

NT4-GFP-Ant重组腺相关病毒载体的构建及病毒包装、滴度测定被引量：2: 2007年; 目的为使基因治疗时,较大分子的功能蛋白能通过血脑屏障,构建NT4-GFP-Ant重组腺相关病毒载体,包装重组病毒,并测定滴度。为进一步动物实验研究该重组病毒液感染鼻粘膜细胞,在鼻粘膜内表达的大分子融合蛋白沿“鼻-脑”通路人脑的可行性奠定基础。方法将已构建成功的NT4-GFP-Ant融合基因插入病毒载体质粒PSSHG中,构建重组腺相关病毒载体质粒,酶切电泳鉴定。用腺病毒辅助质粒PFG140、包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组腺伴随病毒载体质粒,三质粒磷酸钙共沉淀法转染80％融合的293细胞系,包装重组腺病毒（rAAV）。回收病毒、斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组腺相关病毒质粒PSSHG/NT4-GFP- Ant。包装、回收病毒后斑点杂交方法测定重组病毒滴度为3．36×10^9 PFU/ml。结论成功构建了PSSHG/NT4- GFP-Ant重组腺相关病毒载体,并成功包装了较高浓度的重组病毒。; 吴昊吴江杨宇孙欣杨广笑王全颖; 关键词：绿色荧光蛋白基因穿膜肽

携带信号肽NT4-GFP-穿膜肽Ant融合基因的重组腺相关病毒载体的构建及意义被引量：7: 2007年; 目的:构建携带具有穿膜功能的融合报告基因NT4-GFP-Ant基因的重组腺相关病毒载体。方法:应用PCR技术和T载体克隆法克隆绿色荧光蛋白(GFP)基因;用T4DNA连接酶将测序正确的GFP与已构建成功的Ant基因片段及PBV220/NT4线性质粒载体定向连接,构建PBV220/NT4-GFP-Ant融合载体,酶切获取融合基因,并将其连入腺相关病毒载体PSSHG中,构建PSSHG/NT4-GFP-Ant重组腺相关载体并进行酶切鉴定。结果:T-easy/GFP经EcoRⅠ酶切后,可得到730bp左右的片段,GFP基因经DNA测序证实与GenBank序列一致;pBV220/NT4-GFP-Ant经BamHI/EcoRⅠ联合双酶切后,得到约为1000bp的基因片段;PSSHG/NT4-GFP-Ant经BamHI/EcoRⅠ联合双酶切后,得到大小约为1000bp长度的基因片段。结论:成功克隆GFP基因,成功构建NT4信号肽-GFP-Ant穿膜肽融合基因和PSSHG/NT4-GFP-Ant重组腺相关病毒载体。; 吴昊吴江杨宇孙欣杨广笑王全颖; 关键词：绿色荧光蛋白穿膜肽

分泌表达神经保护短肽重组慢病毒对SK-N-SH细胞的保护作用被引量：2: 2007年; 目的构建分泌表达神经保护短肽NAP的重组慢病毒载体,观察重组慢病毒对APPsw转基因人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)的保护作用。方法采用PCR方法克隆融合基因NT4-NAP cDNA;磷酸钙沉淀法包装重组慢病毒Lent/NT4-NAP;平行包装含有报告基因EGFP的报告病毒;SK-N-SH细胞分为正常对照组、单纯APPsw转基因组、空慢病毒载体+APPsw转基因组和NT4-NAP慢病毒+APPsw转基因组,在倒置相差显微镜下观察形态学改变;MTT检测细胞增殖活力;AnnexinV/PI法流式细胞术检测各组细胞凋亡和坏死情况。结果基因测序证明克隆的NT4-NAP cDNA与实验设计完全一致;FACS检测重组病毒滴度为2×106U/L;单纯APPsw转基因组,大量细胞出现凋亡及坏死(与正常对照组比较P<0.01);NT4-NAP慢病毒+APPsw转基因组的细胞数量和活力明显较单纯APPsw转基因细胞改善(P<0.01);FACS检测无论凋亡还是坏死细胞的比率保护组都明显低于加害组(P<0.01)。结论成功构建了能够分泌表达NAP的重组慢病毒载体;重组病毒能够高效转染人神经母细胞瘤细胞;重组病毒表达的蛋白能对AD细胞模型起到很好的保护作用。; 杨宇吴江杨欣孙欣吴昊王全颖杨广笑; 关键词：NAP 慢病毒人神经母细胞瘤细胞

携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达被引量：7: 2007年; 目的:构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒(Lent/EGFP),感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平。方法:采用PCR方法克隆EGFP cDNA;将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在293ET细胞中包装出携带EGFP基因的重组慢病毒Lent/EGFP;重组病毒感染NIH 3T3细胞,FACS检测重组病毒滴度;Lent/EGFP感染体外培养的原代SD大鼠皮层神经细胞,共聚焦荧光纤维镜观察原代神经细胞内绿色荧光蛋白的表达情况。结果:基因测序证明克隆的EGFP cDNA与GenBank提供的序列完全一致;琼脂糖凝胶电泳结果证实EGFP正确插入pLenti6/V5TOPO;FACS检测病毒滴度为2×106;在体外分离培养的原代SD大鼠皮层神经细胞中,重组病毒感染72 h后可见较强的绿色荧光蛋白表达。结论:采用改良的4质粒共转染方法成功构建了携EGFP的重组慢病毒载体;Lent/EGFP对非分裂的神经细胞具有较强的感染能力,且携带的EGFP基因可以在神经细胞内有效表达。; 杨宇吴江杨欣孙欣吴昊王全颖杨广笑; 关键词：慢病毒属

步长脑心通对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠认知功能及神经细胞凋亡的影响被引量：31: 2007年; 目的:通过观察步长脑心通对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠认知功能及神经细胞凋亡的影响,探讨步长脑心通治疗血管性痴呆的疗效和机制。方法:采用双侧颈总动脉永久结扎法制备前脑缺血大鼠模型,将造模成功的Wistar大鼠随机分为1月和2月模型对照组及给药组(步长脑心通),另设1月和2月正常对照组,每组6只大鼠。应用Morris水迷宫评定不同时期大鼠认知功能;通过HE染色观察神经细胞的形态学改变;采用免疫组化方法对脑组织神经细胞凋亡率及Bcl-2蛋白表达水平进行检测。结果:Morris水迷宫检测结果表明,1月和2月给药组大鼠游迷宫平均潜伏期均明显低于模型对照组(P<0.01);HE染色观察发现,1月和2月给药组大鼠锥体细胞海马CA1区神经细胞缺血性改变较模型对照组改变轻,2月较1月给药组缺血改变明显;TUNEL染色观察发现,1月和2月给药组大鼠神经细胞凋亡率明显低于模型对照组(P<0.05);给药组Bcl-2蛋白阳性细胞灰度平均值明显低于模型对照组(P<0.05)。结论:步长脑心通可明显提高Bcl-2的表达,抑制神经细胞凋亡,可用于治疗慢性脑缺血所致的认知功能障碍。; 孙冰吴江周春奎房绍宽; 关键词：步长脑心通痴呆细胞凋亡 BCL-2

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(30371567)