国家自然科学基金(30371552)
- 作品数：6 被引量：15H指数：4
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- 相关机构：四川大学青岛大学医学院附属医院四川大学华西口腔医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠胚胎腭突取材方法改进的研究被引量：4
- 2005年
- 目的:改进小鼠胚胎腭突取材的方法。方法:手术显微镜下,将断颈后的胎鼠头部剪去下颌及舌体,沿上颌中线剪至双侧腭突后缘,分别剪取腭突。结果:改进的方法减少了胚胎腭突取材时间,使取材精确性提高。结论:改进的胚胎腭突取材方法具有更好的可操作性,使操作更容易,并能保证精确的剪取腭突。
- 肖文林石冰鲁勇李盛
- 关键词：胚胎腭突显微外科小鼠
- 原代培养小鼠胚胎腭突间充质细胞的纯化方法研究被引量：1
- 2005年
- 目的:建立纯化原代培养的小鼠胚胎腭突间充质细胞的纯化方法。方法:应用D ispase酶4℃消化处理离体小鼠胚胎腭突18 h,通过振荡法使上皮和间充质分离,吸去上皮片。结果:应用流式细胞仪检测,胚胎腭突间充质细胞内几乎不含上皮细胞。结论:本方法为体外研究提供了理想的模型。
- 肖文林石冰李盛鲁勇
- 关键词：胚胎细胞培养纯化
- 亚甲基四氢叶酸还原酶基因在小鼠胚胎腭突间充质细胞中沉默效应的研究被引量：1
- 2009年
- 目的构建亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,体外观察其对MTHFR基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术,将合成的特异性MTHFR RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体PsiRNA-Hh1neo_G2,构建MTHFR siRNA真核表达载体。应用核转染技术将PsiRNA-MTHFR重组质粒分别导入原代培养的小鼠胚胎腭突间充质(MEPM)细胞。48h和5d后用实时定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)和Western blot技术检测MEPM细胞内MTHFR mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建PsiRNA-MTHFR真核表达载体。经检测48h和5d后转染PsiRNA-MTHFR的MEPM细胞MTHFR mRNA及蛋白表达均显著下调。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显干扰MTHFR mRNA及蛋白的表达,为进一步研究MTHFR的功能以及其调控胚胎腭突融合的机制奠定基础。
- 肖文林石冰王郑谦黄磊
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因RNA干扰真核表达
- MTHFR基因沉默对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:应用RNA干扰技术,从细胞水平研究5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因突变导致腭裂发生的机制。方法:构建MTHFR基因沉默载体,对13天胚胎的腭突间充质细胞进行RNA干扰实验。MTT法检测MTHFR基因沉默后细胞增殖的改变,流式细胞仪检测MTHFR基因沉默后对胚胎腭突间充质细胞凋亡的影响。实验结果采用SPSS11.0软件包进行分析,细胞增殖的比较用重复测量方差分析,凋亡率检测应用U检验。结果:MTHFR基因表达下调后,在无叶酸存在的情况下,腭突间充质细胞的增殖速度明显减慢,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);实验组的凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。结论:在外源性叶酸补充不足的情况下,腭突间充质细胞增殖减弱并发生凋亡,这可能是MTHFR基因突变与先天性唇腭裂发生相关的病理学基础。
- 肖文林石冰郑谦王(龙天)黄磊
- 关键词：先天性腭裂亚甲基四氢叶酸还原酶基因RNA干扰
- 叶酸拮抗亚甲基四氢叶酸还原酶基因沉默的实验研究被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨叶酸补充拮抗5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因下调的作用机制。方法:MTT法检测叶酸梯度补充后拮抗MTHFR基因功能下调对细胞增殖的影响;流式细胞仪分析MTHFR基因功能下调补充叶酸前后细胞周期的改变。结果:MTHFR基因功能下调后,不同剂量叶酸补充可以逆转MTHFR基因功能下调对EPM细胞的不良影响,影响程度与补充叶酸的浓度在一定范围内具有剂量依赖性。结论:MTHFR基因是重要的先天性唇腭裂候选基因,叶酸补充可以拮抗MTHFR基因功能下调对胚胎腭突发育的不良影响。
- 肖文林石冰郑谦王黄磊
- 关键词：先天性腭裂亚甲基四氢叶酸还原酶基因RNA干扰叶酸
- 小鼠胚胎腭突间充质细胞的分离与体外培养方法研究被引量：4
- 2006年
- 目的改进小鼠胚胎腭突取材方法,原代培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞并加以纯化。方法通过改良方法在显微镜下切取胚胎腭突,然后应用DISPASE酶消化离体腭突,纯化腭突胚胎间充质细胞,免疫荧光染色法鉴定腭突间充质细胞生物学特性。结果改良的取材方法使小鼠胚胎腭突取材更精确,操作更简单;纯化后的原代间充质细胞几乎不含上皮细胞;免疫荧光显示细胞HNK-1、S-100、波形蛋白标记阳性,角蛋白标记阴性。结论建立了一种小鼠胚胎腭突精确取材及纯化腭突外胚间充质细胞的方法,为下一步研究工作打下基础。
- 肖文林石冰黄磊郑谦李盛鲁勇
- 关键词：胚胎细胞培养纯化
