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上海市自然科学基金(05ZR14149)
作品数:
1
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姜治国
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2006
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重组人成纤维细胞生长因子-20的原核表达、生物学活性鉴定及抗血清制备
被引量:1
2006年
目的:表达具有生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子-20(rhFGF-20),并制备rhFGF-20抗血清。方法:应用RT—PCR从人前列腺组织总RNA中扩增FGF-20的cDNA,将其克隆到pET24a中,在大肠杆菌中诱导表达,经NTA—Ni^2+-琼脂糖亲和层析纯化,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、细胞增殖试验进行分析鉴定,并免疫新西兰雄性白兔制备多克隆抗体,免疫双扩散法测定抗体效价。结果:构建的pET24aFGF-20能在大肠杆菌中高表达;诱导表达的rhFGF-20蛋白主要存在于包含体中,经包含体溶解、Ni^2+-NTAHis—Bind Resins亲和层析后,纯化产物呈单一条带;细胞增殖试验显示其能促进成纤维细胞生长,并具有剂量依赖性(浓度为50~5000ng/ml);制备的抗血清效价为1:32,可与hFGF20产生免疫反应。结论:大肠杆菌表达的rhFGF-20蛋白具有刺激成纤维细胞增殖的活性,制备的抗血清具有特异性。
姜治国
殷正丰
钱海华
康晓燕
罗祥基
李瑾
关键词:
原核表达
免疫血清
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