吴阶平医学基金(32067501285) 作品数:5 被引量:27 H指数:3 相关作者: 陆小霞 王莹 陈鹏 陈和斌 徐佳莉 更多>> 相关机构: 武汉市儿童医院 武汉市妇女儿童医疗保健中心 华中科技大学 更多>> 发文基金: 武汉市卫生局科研项目 吴阶平医学基金 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3mRNA表达在支气管哮喘中的作用 被引量:9 2014年 目的观察支气管哮喘(哮喘)患儿和哮喘小鼠外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)mRNA的表达,探讨Tim-3在哮喘中的作用。方法选取2012年1月至2013年6月于武汉市妇女儿童医疗保健中心呼吸内科住院或哮喘门诊患儿97例,哮喘发作期47例(哮喘发作组),哮喘缓解期50例(哮喘缓解组),健康体检儿童42例为健康对照组。检测3组儿童PBMC中Tim-3mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因-β(TGF-β)的水平,并分析Tim-3mRNA与IL-6水平的相关性,同时建立小鼠哮喘动物模型,分为正常对照组和哮喘组,每组10只,应用实时荧光定量PCR检测小鼠PBMC中Tim-3mRNA的水平,流式细胞分析技术检测CIM细胞中IL-17细胞比例反映Th17的水平,CD4细胞中CD25^+FoxP3^+反映调节性T淋巴细胞(Treg)的水平;并分析Tim-3的表达与Th17/Treg水平的相关性。结果儿童哮喘发作组PBMC中Tim-3mRNA吸光度值高于哮喘缓解组和健康对照组(P均〈0.05),儿童哮喘发作组血浆中IL-6水平高于哮喘缓解组和健康对照组(P均〈0.05),动物模型中哮喘组PBMC中Tim-3mRNA的水平高于正常对照组(P〈0.01),哮喘组CD4^+IL-17^+表达比例高于正常对照组,而CD4^+CD25^+FoxP3^+低于正常对照组(P均〈0.05),哮喘组Th17/Treg的比值高于正常对照组(P〈0.05),哮喘组PBMC中Tim-3mRNA的表达水平与CD4^+IL-17^+及Th17/Treg的比例呈正相关,与CD4^+CD25^+FoxP^3+的水平呈负相关。结论哮喘患儿PBMC中Tim-3mRNA表达增高,参与IL-6相关的呼吸道炎性反应。动物实验提示Tim-3与Th17/Treg失衡密切相关,表明Tim-3可能在哮喘的发生、发展中起着一定的作用。 韩锋 陆小霞 王莹关键词:支气管哮喘 MRNA T淋巴细胞 Tim-3在哮喘小鼠中的表达及与Th17/Treg细胞的关系 被引量:15 2015年 目的 :检测支气管哮喘小鼠外周血单个核细胞(PBMC)及肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞中T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域蛋白3(Tim-3)的表达及与Th17/Treg细胞的关系,探讨其在哮喘发病中的作用。方法 :建立小鼠哮喘动物模型,分为哮喘组和对照组。收集各组小鼠PBMC及BALF炎性细胞,应用实时荧光定量PCR检测PBMCs及BALF炎性细胞中的Tim-3 m RNA水平,流式细胞仪检测CD4细胞中IL-17(CD4+IL-17+)比例反映Th17水平,CD4细胞中CD4+CD25+Fox P3+反映Treg细胞水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMCs上清液中IL-10、IL-17、TGF-β水平,分析Tim-3的表达与Th17/Treg水平的相关性。结果:哮喘组PBMCs及BALF炎性细胞中Tim-3 m RNA水平、CD4+IL-17+表达及Th17/Treg比例、IL-17均高于对照组(P<0.05),而CD4+CD25+Fox P3+水平、IL-10显著低于对照组。哮喘组PBMCs及BALF炎性细胞中的Tim-3 m RNA表达分别与CD4+IL-17+表达及Th17/Treg比例呈正相关(r=0.76,r=0.87,r=0.71,r=0.82,P<0.05),而与CD4+CD25+Fox P3+的表达呈负相关(r=-0.84,r=-0.79,P<0.05)。结论:哮喘小鼠PBMCs及BALF炎性细胞中Tim-3 m RNA水平显著升高,Tim-3可能在哮喘发生发展中起着重要作用并与Th17/Treg失衡有关。 王艳丽 陆小霞 陈鹏 陈和斌 王莹关键词:哮喘 T淋巴细胞 TIM-3 TH17/TREG 短发夹RNA沉默Tim-3分子表达对哮喘小鼠外周血Th1和Th17细胞的影响 被引量:2 2013年 目的建立小鼠支气管哮喘模型,采用T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)特异短发夹RNA(shRNA)沉默外周血单个核细胞(PBMCs)中Tim-3的表达,探讨Tim-3对辅助性T细胞1(Th1)和Th17细胞分化的影响。方法用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘小鼠模型,分离哮喘小鼠PBMCs,用Tim-3特异的shRNA片段沉默哮喘小鼠PBMCs中高表达的Tim-3基因。Real-time PCR和Western blot检测Tim-3的表达,流式细胞分析技术(FACS)检测Th1和Th17的比例;ELISA检测细胞培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ),白介素-4(IL-4),和白介素-17(IL-17)的水平。结果哮喘组小鼠PBMCs中Tim-3 mRNA表达明显升高;使用特异Tim-3 shRNA沉默哮喘小鼠PBMCs后,沉默组PBMCs中Th1细胞比例显著升高,Th17细胞比例显著下降,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);沉默组PBMCs培养上清液中IFN-γ明显升高,IL-17明显降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),IL-4水平无明显变化。结论特异Tim-3 shRNA有效地沉默了Tim-3的表达,Tim-3表达的改变影响了T细胞的分化。 陆小霞 徐佳莉 董宗祈 陈鹏 王莹关键词:哮喘 TIM-3 RNA沉默 小鼠 Galectin-9基因转导干预呼吸道合胞病毒感染小鼠外周血 Th17细胞的研究 被引量:1 2014年 目的:观察重组9型腺相关病毒(rAAV9)携带Galectin-9基因转染小鼠外周血单个核细胞(PBMCs)的可行性,探讨Galectin-9对呼吸道合胞病毒(RSV)感染后辅助性T细胞(Th17)分化的影响。方法建立RSV感染小鼠模型,HE及PAS染色观察RSV感染小鼠肺炎症反应。分离小鼠PBMCs,利用携带Galectin-9基因的 rAAV9载体转染 PBMCs,荧光显微镜观察转染效率;real-time PCR 检测RORγt mRNA的表达;流式细胞分析技术( FACS)检测Th17和Treg的比例;ELISA检测细胞培养上清液中IL-10、IL-17及TGF-β1蛋白水平。结果与正常对照组相比,RSV感染组RORγt mRNA、Th17及IL-17的表达均明显升高( P 均<0.05), Treg 及 IL-10的表达均明显降低( P 均<0.05);使用 rAAV9-Galectin-9干预PBMCs后,RSV+Galectin-9组中RORγt mRNA、Th17及IL-17的表达较RSV 组均显著下降(P均<0.05),Treg及IL-10的表达均显著升高(P均<0.05)。结论 rAAV9-Galectin-9成功转染PBMCs,可以通过调控Galectin-9通路影响RSV感染Th17免疫应答。 陆小霞 许敬 胡维琨 王莹 徐佳莉 陈和斌 陈鹏 董宗祈关键词:呼吸道合胞病毒 TH17细胞 小干扰RNA干扰T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3基因表达对支气管哮喘小鼠辅助性T淋巴细胞17细胞分化及致炎功能的影响 被引量:3 2014年 目的 探讨T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3基因(Tim-3基因)对辅助性T淋巴细胞17(Th17)细胞分化及支气管哮喘(哮喘)呼吸道炎症、呼吸道高反应性的影响.方法 用卵清蛋白致敏并激发建立哮喘小鼠模型,用Tim-3特异的小干扰RNA(shRNA)片段经鼻腔滴入以干扰哮喘小鼠Tim-3基因.采用有创肺阻抗法检测小鼠的呼吸道阻力;流式细胞分析技术检测Th17水平;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中IL-17和TGF-β水平.结果 哮喘小鼠模型建立成功.使用Tim-3 shRNA干扰哮喘小鼠Tim-3,哮喘组呼吸道炎症减轻,呼吸道高反应下降.外周血单个核细胞中Th17细胞比例哮喘组[(6.43±1.01)%]较正常对照组[(1.75±0.02)%]明显升高,重组质粒干预后比例为[(2.36±0.28)%],明显降低,差异有统计学意义(F=40.05,P<0.05);哮喘组IL-17水平[(118.8±16.5)ng/L]较正常对照组[(72.5±13.6)ng/L]明显升高,重组质粒干预后为[(73.6±12.5)ng/L],明显降低,差异有统计学意义(F =32.80,P<0.05);TGF-β水平无明显变化.结论 沉默Tim-3基因表达可缓解呼吸道炎症及呼吸道高反应性,其机制可能与改变Th17细胞的分化有关. 吴小满 陆小霞 张智关键词:RNA干扰 辅助性T淋巴细胞