山东省教育厅高校科研发展计划项目(J07YE06)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：山东医学高等专科学校南京医科大学镇江市第四人民医院更多>>
- 发文基金：山东省医药卫生科技发展计划项目山东省教育厅高校科研发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒表达载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的:构建表达虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为腺病毒中和抗体流行水平的定量检测奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPower Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用PCR的方法扩增虫荧光色素酶基因使其具备特定的CACC接头,以连接、转化、提取质粒等方法克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆,经PCR及测序鉴定正确后,用重组酶(LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆rAd-Luci。表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测rAd-Luci载体是否能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并检测此酶蛋白的功能活性。结果:用PCR的方法扩增到具有CACC接头的虫荧光色素酶基因,其重组入门和腺病毒表达克隆经PCR和测序鉴定构建正确,重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增后获得的病毒滴度为1.8×1011 pfu/ml,此病毒能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并且具有较强的功能活性。结论:成功构建了虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为此重组载体用于腺病毒中和抗体的定量检测奠定基础。
- 马春玲王芳刘琳琳王法权
- 关键词：腺病毒表达载体中和抗体
- CRTl80基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的构建表达CRT180基因重组的腺病毒载体，为肿瘤的基因治疗奠定实验基础。方法采用腺病毒表达系统（Vira Power Adenoviral Expression System）构建重组腺病毒表达载体。首先利用RT-PCR的方法在人肺腺癌细胞系A549细胞中扩增CRT180基因，以连接、转化等方法克隆入载体pENTR／D-TOPO以获得重组的入门克隆，经测序及PCR鉴定正确后，用重组酶（LR Clonase Ⅱ Enzyme Mix）进行入门克隆与腺病毒表达载体（pAd-CMV／V5-DEST）间的重组反应，以获得表达克隆（rAd—CRT180）质粒。重组表达克隆鉴定后，用限制性内切酶PacI是使之线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。用极限稀释法检测病毒滴度用Western Blot法检测rAd-CRT180载体是否能正确表达CRTl80蛋白。结果用RT-PCR的方法扩增到CRT180基因；重组入门和表达克隆经酶切和PCR鉴定构建正确，重组表达克隆转染HEK293A细胞获得病毒原液并扩增后测定病毒滴度为1．8×10^11pfu／mL，且这个病毒能正确表达CRT180蛋白。结论成功构建了CRTl80基因的重组腺病毒载体，可为此重组载体用于肿瘤基因治疗提供实验依据。
- 马春玲孙运芳姚伟马永臻于立玲
- 关键词：钙网蛋白重组腺病毒载体肿瘤基因治疗克隆包装细胞
- CRT180基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的构建表达CRT180基因重组的腺病毒载体，为肿瘤的基因治疗奠定实验基础。方法采用腺病毒表达系统（Vira Power^TM Adenoviral Expression System）构建重组腺病毒表达载体。首先利用RT-PCR的方法在人肺腺癌细胞系A549细胞中扩增CRT180基因，以连接、转化等方法克隆入载体pENTR／D—TOPO以获得重组的入门克隆，经测序及PCR鉴定正确后，用重组酶（LRClonase^TMⅡ Enzyme Mix）进行入门克隆与腺病毒表达载体（pAd—CMV／V5-DEST）间的重组反应，以获得表达克隆（rAd．CRT180）质粒。重组表达克隆鉴定后，用限制性内切酶PacⅠ是使之线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。用极限稀释法检测病毒滴度用Western Blot法检测rAd．CRT180载体是否能正确表达CRT180蛋白。结果用RT-PCR的方法扩增到CRT180基因；重组入门和表达克隆经酶切和PCR鉴定构建正确，重组表达克隆转染HEK293A细胞获得病毒原液并扩增后测定病毒滴度为1．8×10^11pfu／mL，且这个病毒能正确表达CRT180蛋白。结论成功构建了CRT180基因的重组腺病毒载体，可为此重组载体用于肿瘤基因治疗提供实验依据。
- 马春玲孙运芳姚伟马永臻于立玲
- 关键词：钙网蛋白重组腺病毒载体肿瘤基因治疗克隆包装细胞
- Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症相关性研究被引量：5
- 2011年
- 目的从免疫学角度探讨Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症（EM）的关系。方法应用流式细胞技术检测40例EM及40例对照组外周血中Th1/Th2型细胞的百分比。结果 EM组外周血中,Th1型细胞较对照组显著降低（P〈0.05）;而Th2型细胞较对照组显著升高（P〈0.05）;EM组Ⅲ~Ⅳ期患者外周血中,Th2型细胞明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者（P〈0.05）。结论 EM患者外周血中Th1型细胞明显减少,Th2型细胞明显增多,呈Th2优势漂移的现象,并且与疾病的分期相关,Th1/Th2型细胞模式失衡在EM的发病机制及疾病进展中可能具有重要的作用。
- 王洪珍王芳马春玲
- 关键词：子宫内膜异位症TH1细胞TH2细胞流式细胞术
