苏州市科技局社会发展基金(SZD0894)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：方纬吴锦昌周俊东孙康云钱丽娟更多>>
- 相关机构：南京医科大学中国医学科学院阜外心血管医院苏州大学更多>>
- 发文基金：苏州市科技局社会发展基金苏州市科技计划项目苏州市“科教兴卫工程”青年科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经突触结合蛋白Ⅰ-C2A区重组表达及其在心脏缺血-再灌注大鼠模型中的显像研究
- 2010年
- 目的 利用基因工程方法重组表达神经突触结合蛋白Ⅰ的C2A片段,探讨其在心肌细胞凋亡显像中的应用价值.方法 （1）将C2A基因连接到含有谷胱甘肽转移酶（GST）的重组原核表达载体pGEX-6P-1上,转化感受态细菌BL21,异内基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后纯化.（2）用异硫氰酸荧光素（FITC）标记纯化的蛋白,通过细胞结合实验鉴定蛋白质活性.（3）采用2-亚氨基噻吩方法,进行99TcmO-4标记C2A-GST融合蛋白,标记后的蛋白质用纸层析法测定其放化纯.（4）制备大鼠心肌缺血-再灌注模型,通过尾静脉注射99Tcm-C2A-GST,1 h后用SPECT仪进行显像 显像结束后,处死大鼠,取出心肌,用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,分离缺血心肌和存活心肌,测质量及其放射性计数,比较缺血心肌与正常心肌每克组织百分注射剂量率（%ID/g）值之间差别.采用SPSS12.0软件行统计分析,数据间比较采用t检验.结果 （1）成功表达的C2A-GST蛋白,相对分子质量约为3.8×104.（2）荧光显微镜下观察FITC-C2A-GST具有结合凋亡细胞的功能.（3）标记后的99Tcm-C2A-GST放化纯为（98.90±0.43）%.（4）大鼠显像示缺血损伤心肌显影清晰,体外测定缺血心肌摄取99Tcm-C2A-GST为（2.41±0.32）%ID/g,对照组99Tcm-C2A-GST-N-羟基琥珀酰亚胺（C2A-GST-NHS）的摄取为（0.82±0.24）%ID/g,两者之间差别具有统计学意义（t=10.6,P＜0.01）.结论 通过基因工程方法重组神经突触膜蛋白Ⅰ的C2A区域,重组后其具有监测缺血-再灌注大鼠模型中的心肌凋亡的作用.
- 孙康云周俊东沈飞方纬吴锦昌
- 关键词：心肌再灌注损伤锝放射性核素显像
- 99~Tc^m-SytI-C2A突变体蛋白在心肌缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡显像中的应用
- 2012年
- 目的探讨99Tcm标记突触结合蛋白I-C2A片段突变体(99Tcm-SytI-C2A-G4C)在心肌凋亡显像中的应用。方法 (1)采用亚锡还原法制备99Tcm-SytI-C2A-G4C。99Tcm-SytI-C2A-G4C经纯化后通过纸层析法测定放化纯;细胞结合实验测定99Tcm-SytI-C2A-G4C与磷脂酰丝氨酸的结合能力。(2)选用5头小猪制备心肌缺血-再灌注损伤模型,静脉注射99mTc-Cyt-C2A-G4C2h后进行图像采集,计算心肌异常高放射性区/本底(T/B)比值;同时使用原位末端标记法(TUNEL)分析损伤心肌中细胞凋亡情况。结果 (1)标记后的99Tcm-SytI-C2A-G4C放射化学纯度为(96.42±0.76)%;(2)99Tcm-SytI-C2A-G4C与喜树碱处理组细胞结合测定的放射性计数是未处理组细胞的5.23±0.38倍;(3)99mTc-Cyt-C2A-G4C注射后2h,心肌部位可见明显的局部放射性异常浓聚,T/B比值为3.40±0.43;高放射性心肌组织标本,TUNEL染色亦可见大量黄染的凋亡细胞。结论 99Tcm-SytI-C2A-G4C可用于心肌细胞凋亡显像。
- 钱丽娟周俊东方纬吴锦昌
- 关键词：心肌缺血再灌注凋亡显像锝
