国家自然科学基金(30371482)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：万小平杨懿霞蔡斌于晓辉严沁更多>>
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- 酪氨酸激酶受体B与人卵巢癌OVCAR-3细胞侵袭能力的关系被引量：1
- 2008年
- 背景与目的:失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)能诱导正常上皮细胞的恶性转化并且使该细胞具有高转移能力。TrkB在神经母细胞瘤和其他多种人类高侵袭性恶性肿瘤组织中过度表达,TrkB在卵巢癌细胞中的表达及其与卵巢癌细胞的高侵袭能力的关系的研究鲜有报道。本研究探讨失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)与人卵巢癌OVCAR-3细胞侵袭能力的关系。方法:RT-PCR和Western印迹法检测卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞贴壁培养、细胞立体培养以及细胞立体培养得到的多细胞团簇经胰酶消化成单细胞后再次贴壁培养细胞TrkB的表达差异;体内、体外细胞侵袭实验检测通过RNAi技术沉默TrkB后OVCAR-3细胞侵袭及转移能力的改变。结果:RT-PCR结果表明,OVCAR-3多细胞团簇中TrkBmRNA的表达高于贴壁细胞(P<0.001);Western印迹结果显示,与OVCAR-3贴壁细胞比较,立体培养细胞中全长TrkB表达升高[(17.47±0.58)%vs(8.93±0.19)%,(P<0.001)]。体内、体外细胞侵袭实验表明,OVCAR-3细胞团簇的侵袭转移能力较普通贴壁细胞明显增强(P<0.01);TrkB沉默后OVCAR-3的侵袭及转移能力受到抑制(P<0.01)。结论:TrkB通过失巢凋亡抑制机制介导了卵巢上皮性癌细胞的侵袭和转移。
- 于晓辉蔡斌杨懿霞严沁万小平任海军刘天卿
- 关键词：酪氨酸激酶受体B失巢凋亡ANOIKIS多细胞团簇
- 酪氨酸激酶受体B在卵巢上皮性癌中的表达及其意义被引量：2
- 2008年
- 背景与目的:失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor, TrkB)能诱导正常上皮细胞的恶性转化并且使该细胞具有高转移能力。TrkB在良性肿瘤中及正常卵巢上皮中不表达,在癌组织中不但表达,并且与交界性肿瘤比较表达明显增高;转移灶和低分化癌组织中明显增高,如在神经母细胞瘤和其它多种人类高侵袭性恶性肿瘤组织中过度表达,本研究旨在探讨其过度表达与肿瘤组织分化及病人预后的关系。方法:选取卵巢癌石蜡标本73例(包括与原发灶相对应的8例腹水中的癌细胞团簇),其中低分化腺癌34例,28例卵巢交界性上皮性肿瘤;16例卵巢良性上皮性肿瘤及13例正常卵巢组织作为对照,行免疫组化ABC法检测TrkB的表达;随机选取上述病例中30例(包括4例与原发灶相对应的大网膜转移灶和腹水中的癌细胞团簇)、交界性上皮性肿瘤7例;卵巢良性上皮性肿瘤4例及正常卵巢组织(包括卵巢皮质和髓质)2例作为对照,行RT-PCR检测TrkB的表达。结果:RT-PCR结果表明,TrkB mRNA在卵巢癌与卵巢交界性肿瘤中的相对转录水平分别为(16.7±3.1)%和(4.6±0.4)%,在卵巢癌组织中表达明显增加(P<0.001);TrkB mRNA在大网膜转移灶和腹水中的癌细胞团簇中的TrkB mRNA相对表达量分别为(31.4±1.4)%和(28.2±0.7)%,与相应的原发灶(18.1±1.1)%比较,差异有显著性(P<0.001)。免疫组化结果表明,卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢上皮不表达TrkB;TrkB在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率分别为67.12%(49/73)和14.29%(4/28),两者比较差异有显著性(P<0.001),TrkB前体蛋白(表达于胞质)广泛地高表达于卵巢上皮性癌组织中67.12%(49/73),全长TrkB蛋白(表达于胞膜)在腹水中的癌细胞团簇100%(8/8)和低分化卵巢癌组织中100%(34/34)表达增强,与原发灶49.32%(36/73)和高分化癌7.69%(3/39)比较,差异有显著性(P<0.01)。TrkB阳性表达与卵巢�
- 于晓辉蔡斌杨懿霞严沁万小平
- 关键词：酪氨酸激酶受体B卵巢癌失巢凋亡多细胞团簇
- 人卵巢癌Skov3多细胞团簇对细胞外基质和人腹膜间皮细胞的黏附性研究及β1-整合素的影响被引量：4
- 2006年
- 目的:通过测定卵巢癌细胞系Sk-ov3多细胞团簇对细胞外基质(ECM)和人腹膜间皮细胞的黏附性,以及β1整合素抗体对此黏附性的影响,探讨多细胞团簇在卵巢癌扩散和转移中的作用,以及β1整合素的作用。方法:Skov3团簇通过液体重叠培养系统获得。无血清的Skov3团簇悬液加入覆以ECM、牛血清蛋白(BSA,作为对照)或单层腹膜间皮细胞的96孔板,镜下记数团簇,培养6或12h。PBS洗掉未黏附细胞,同法记数。为了检测β1-整合素对团簇黏附的影响,团簇悬液中分别加入CD29mAb或正常鼠免疫球蛋白(mIgG,作为对照)培养30min,再同法培养、记数。结果:Skov3团簇对ECM的黏附率为38%±12%,而对BSA的黏附率为8%±16%,P=0·001。mIgG组黏附率为37%±10%,CD29mAb组黏附率为14%±3%,P=0·001,CD29mAb的黏附抑制率为60%。团簇黏附于单层间皮细胞,mIgG组黏附率为41%±11%,而CD29mAb组黏附率为17%±5%,P=0·001。CD29mAb的抑制率为55%±2%。结论:本实验结果提示:卵巢癌多细胞团簇可通过β1整合素黏附于ECM和人腹膜间皮细胞。因此,团簇在卵巢癌播散和转移中具有不可忽视的作用。β1整合素介导这种黏附,阻断β1整合素的功能,可部分阻断团簇的黏附。提示,抗细胞黏附可能为治疗卵巢癌提供一种新方法。
- 刘召芬陈建利万小平
- 关键词：多细胞团簇细胞外基质Β1-整合素
- 人卵巢癌多细胞团簇在细胞外基质中的黏附性和扩散性
- 2006年
- 目的研究人卵巢癌多细胞团簇(MCAs)在细胞外基质(ECM)中的黏附性和扩散性。方法液体重叠培养获得MCAs。将MCAs悬液以及加入不同的细胞黏附分子(CD44、CD29、CD54、E-cad)单克隆抗体(mAb)和m IgG(作为对照)的MCAs悬液,接种至覆以ECM或牛血清蛋白(BSA)(作为对照)的96孔板,培养6 h,记录每孔0 h团簇和6 h的黏附团簇数,并计算黏附率;分别测定团簇0 h和24 h的面积,以其面积变化倍数确定团簇的扩散性。结果MCAs对ECM黏附率为38%,明显高于BSA对照组的8%(P=0.001);CD29 mAb和CD44 mAb对团簇黏附的抑制率分别为60%和29%;MCAs在ECM上24 h几乎完全扩散,面积扩大倍数明显高于BSA对照组(5.96±0.92vs1.34±0.9)(P<0.01);CD29 mAb和CD44 mAb对团簇扩散的抑制率分别为74%和33%。结论MCAs具有的黏附性和扩散性可能是卵巢癌难治的重要原因。CD29 mAb和CD44 mAb可抑制MCAs的黏附和扩散,为抗黏附治疗卵巢癌提供了新策略。
- 刘召芬陈建利席晓薇万小平
- 关键词：卵巢癌多细胞团簇细胞黏附分子
- 酪氨酸激酶受体B介导的卵巢上皮性癌OVCAR3细胞失巢凋亡抑制与其侵袭的关系
- 2008年
- 目的探讨失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B（TrkB）介导的卵巢上皮性癌（卵巢癌）OVCAR3细胞的失巢凋亡抑制与其侵袭的关系。方法采用RT—PCR和实时定量PCR技术检测4种细胞包括3种不同病理类型的卵巢癌细胞系OVCAR3、SKOV3（两者均为卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系）和ES2（卵巢透明细胞癌细胞系）细胞及神经母细胞瘤细胞系SK—N—DZ细胞中，以及经不同方式[贴壁培养和立体培养（培养后形成团簇细胞）]培养的OVCAR3细胞中TrkBmRNA的表达。转染TrkB小分子干扰RNA（siRNA）后，流式细胞仪检测OVCAR3细胞的凋亡率，以转染无意义的（scrambled）siRNA者为阴性对照；体内、体外侵袭实验检测不同方式培养的OVCAR3细胞的侵袭能力。结果（1）OVCAR3细胞中TrkBmRNA表达水平为0．0240±0．0017，明显高于SKOV3细胞的0．0030±0．0006、ES2细胞的0．0027±0．0009及SK—N-DZ细胞的0．0087±0．0003（P〈0．01）；OVCAR3团簇细胞中TrkBmRNA表达水平为0．04374-0．0021，明显高于贴壁细胞的0．0240±0．0017（P〈0．01）。（2）转染TrkBsiRNA后，OVCAR3细胞的凋亡率为（46．3±5．9）％，明显高于阴性对照的（9．0±0．8）％（P〈0．01）。（3）体外侵袭实验显示，OVCAR3团簇细胞的穿膜细胞数为（71．8-4-0．8）个，明显多于贴壁细胞的（47．7±0．8）个（P〈0．01）；体内侵袭实验显示，转染TrkBsiRNA后，OVCAR3细胞在裸鼠体内形成的肿瘤体积为（6．0-4-1．4）mm3，明显小于阴性对照的（16．3±4．7）mm。（P〈0．01）。结论TrkB可能通过诱导卵巢癌OVCAR3细胞的失巢凋亡抑制而赋予其高侵袭能力。
- 于晓辉杨懿霞蔡斌严沁贺银燕万小平
- 关键词：卵巢肿瘤受体TRKB肿瘤侵润
- 人卵巢癌SKOV3细胞多细胞团簇黏附性和转移性的体外研究
- 2007年
- 目的:探讨卵巢癌SKOV3多细胞团簇是否具有黏附性和转移性,以及单细胞和多细胞团簇黏附性和转移性的差异,以确定二者在卵巢癌扩散和转移中的作用。方法:用液体重叠培养系统获得SKOV3团簇,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SKOV3单细胞和团簇对细胞外基质(ECM)的黏附性;用Boyden小室和MTT法测定二者的转移性。结果:SKOV3团簇和单细胞均可黏附于ECM,黏附性对比中团簇组光吸收值(OD490)明显小于单细胞组(0.34±0.03vs0.57±0.77,P=0.000)。单细胞和团簇均可通过Boyden小室发生转移。团簇转移后的细胞以单细胞形式存在,光镜下观察转移后的两组细胞形态相似。团簇组转移细胞数明显少于单细胞组(35.00±30.00vs97.00±54.00,P=0.000);团簇组转移细胞的光吸收值(OD560)明显低于单细胞组(0.28±0.03vs0.37±0.10,P=0.005)。结论:卵巢癌多细胞团簇具有黏附性和转移性,其黏附性和转移性低于单细胞;以悬浮状态存在于卵巢癌患者腹水中的癌单细胞或多细胞团簇,在卵巢癌扩散和转移过程中均发挥着一定的作用。
- 刘召芬陈建利万小平
- 关键词：卵巢肿瘤多细胞团簇
- 酪氨酸激酶受体B在OVCAR-3卵巢癌细胞中的表达及意义被引量：2
- 2008年
- 背景与目的:失巢凋亡抑制因子酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor,TrkB)能诱导正常上皮细胞的恶性转化并且使该细胞具有高侵袭能力。TrkB过度表达与神经母细胞瘤和其他多种人类高侵袭性恶性肿瘤的化疗耐药和不良预后有关。本研究旨在探讨TrkB及其配体脑源性神经营养因子(brain- derived neurotrophic factor,BDNF)在卵巢上皮性癌细胞系OVCAR-3中的表达及其意义。方法:检测卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞贴壁培养(AC)、细胞立体培养(AIC)以及细胞立体培养得到的多细胞团簇(CS)经胰酶消化成单细胞后再次贴壁培养(RAC)细胞中TrkB及BDN F的表达差异。结果:经RT-PCR检测,与贴壁培养细胞(adhesive cells)比较,TrkB mRNA高表达于OVCAR-3多细胞团簇中(multicellular-spheroids),两组数值分别(23.5±0.5)%,(35.3±0.7)%,差异有显著性(P<0.001);BDNF mRNA的表达则正相反,两组数值分别(41.4±0.6)%,(32.2±0.7)%,差异有显著性(P<0.001)。经Western blot检测,TrkB的前体蛋白(未发生糖基化的受体形式)广泛地高表达于上述3种不同培养方式的OVCAR-3细胞中;与贴壁培养细胞比较,OVCAR-3细胞立体培养全长TrkB(发生糖基化的完整受体形式,分子量145 000)明显高表达(P<0.001)。结论:卵巢癌细胞中存在TrkB及BDNF的自分泌环路,TrkB可能是介导卵巢癌失巢凋亡抑制的因子。
- 于晓辉蔡斌杨懿霞严沁万小平
- 关键词：酪氨酸激酶受体B卵巢癌失巢凋亡多细胞团簇
