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国家自然科学基金(30471958)

作品数:2 被引量:0H指数:0
相关作者:李劲位全芳宋波杨劲陈志文更多>>
相关机构:第三军医大学西南医院第三军医大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇TET-ON
  • 1篇致突变
  • 1篇致突变作用
  • 1篇质粒
  • 1篇顺铂
  • 1篇突变
  • 1篇突变频率
  • 1篇PATHWA...
  • 1篇UV
  • 1篇CELL_L...
  • 1篇INDUCE...
  • 1篇C-
  • 1篇LUCIFE...

机构

  • 1篇第三军医大学
  • 1篇第三军医大学...

作者

  • 1篇陈志文
  • 1篇杨劲
  • 1篇宋波
  • 1篇位全芳
  • 1篇李劲

传媒

  • 1篇第三军医大学...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2008
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
Tet-on控制的Luciferase和SupF突变报告基因质粒的构建及其在顺铂致突变作用中的应用研究
2008年
目的研究TCR在顺铂导致的细胞内DNA损伤和突变过程中的分子机制,并为进一步研究转录偶联修复与突变发生的分子机制提供重要分子生物学依据。方法首先将SupF突变报告基因克隆到带有双向真核启动子的含有Tet调控元件TRE的表达载体pBI-L的多克隆位点(MCS)上,获得pTCR-1,再将SV40ori元件插入pTCR-1载体,最终获得pTCR-2质粒。酶切和DNA测序证实后,用顺铂将pTCR-2进行体外DNA损伤后瞬时转染至Tet-on293细胞,在Dox诱导下培养48h,从细胞内提取质粒,纯化后转化SY204菌株,蓝白斑筛选挑取白色突变斑,计算突变频率并进行DNA测序检测突变频谱。结果经酶切鉴定和测序分析,插入片段长度和序列正确。在Dox诱导下取得了SupF报告基因在转录偶联修复途径中的突变频率与频谱。结论重组的pTCR-2质粒具有在真核细胞中Tet启动的转录活性,应用于顺铂致突变研究中,使转录条件下的突变情况能够得以反映。
李劲宋波杨劲陈志文位全芳
关键词:质粒顺铂突变频率
Transcription-coupled repair pathway in UVC-induced SupF gene mutation in Tet-on 293 cell line
2008年
Objective: To explore the role of transcription-coupled repair (TCR) pathway in the UVC-induced SupF gene mutation in Tet-on 293 cell line, we designed and constructed a Tet-responsive plasmid DNA pTCR-C1, and utilized this pTCR-C 1 plasmid to obtain the mutation frequency of SupF reporter gene induced by UVC in Tet-on 293 cell line. Methods: SupF gene was cloned into a Tet-responsive plamid pBI-L, which include a bidirectional Tet-responsive promoter, and was named pTCR-C1. The pTCR-C1 plasmid was transfected into Tet-on 293 cell line, and the mutation frequency of SupF reporter gene was detected in the presence and absence of DOX. Results: The pTCR-C1 plasmid was identified with the methods of restriction digestion and DNA sequencing. The mutation frequency of SupF reporter gene in the presence of DOX was higher than in the absence of DOX. Conclusion: The TCR pathway takes part in the UVC-induced SupF gene mutation in Tet-on 293 cell line.
Li JinSong BoChen ZhiwenZeng YijunZhou HuchuanWei QuanfangYang Jin
关键词:TET-ON
共1页<1>
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