国家自然科学基金(30960158)
- 作品数：9 被引量：45H指数：4
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- 蒙古沙冬青胰蛋白酶抑制剂基因AmTI的克隆及其功能分析被引量：2
- 2012年
- 蛋白酶抑制剂(Protein inhibitors,PIs)是一类小分子多肽或蛋白质,在植物抵抗生物和非生物逆境中起中起重要作用。利用PCR方法从强抗逆植物蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)中克隆到一个胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitors,TIs)基因AmTI,分析了其在非生物胁迫下的表达变化,构建了其植物表达载体。结果表明,AmTI的编码蛋白含197个氨基酸残基,分子质量为21.5kDa,在N端有信号肽序列,属于Kunitz型;在正常生长条件下,该基因只有微量的基础表达,但在脱水、低温和盐胁迫处理下,其表达量显著上调。本研究为进一步揭示AmTI的功能奠定了基础。
- 王学峰李记园李连国张锋王茅雁
- 关键词：沙冬青蛋白酶抑制剂基因克隆
- 沙冬青细胞与分子生物学研究进展被引量：25
- 2010年
- 沙冬青是我国西北荒漠区唯一的常绿阔叶灌木,具有极强的抗逆性和特殊的医疗保健作用。本文从细胞学与遗传多样性、抗逆性分子基础与基因克隆和药用成分及作用机制方面对沙冬青的研究进展进行了综述,并提出了今后的重点研究方向。
- 林清芳王茅雁刘佳杰赵欢欢王存芳
- 关键词：沙冬青抗逆基因药用成分
- 蒙古沙冬青总RNA提取与mRNA分离方法的研究被引量：10
- 2011年
- 蒙古沙冬青是分布于我国西北荒漠区的常绿旱生阔叶灌木,因其富含多糖和多酚等次生代谢物质,用常规RNA提取方法难以从中获得高质量总RNA。本研究通过在热酚法的RNA提取液中加入高浓度的KAc和β-巯基乙醇,从该植物的不同样品中提取到高质量总RNA,并用筛选到的合适试剂盒分离到高纯度的mRNA。所得到的总RNA和mRNA已被成功应用于基因克隆和SMART全长cDNA文库的构建。
- 林清芳王存芳赵欢欢刘佳杰王茅雁
- 关键词：总RNA提取
- 沙冬青C2H2型锌指蛋白基因AmZFP1的克隆与表达分析被引量：5
- 2017年
- 为了研究强抗逆植物沙冬青寒旱诱导表达基因AmZFP1(Zinc finger protein 1)的生理功能,通过转录谱分析,从中鉴定出一个受寒旱诱导的ZFP全长cDNA序列并命名为AmZFP1。利用半定量RT-PCR方法对AmZFP1进行了表达分析,结果表明,在室内正常培养的沙冬青幼苗中该基因有较高表达量,在低温或干燥处理2~48 h其表达量明显上调,尤其以干燥处理上调速度更快且上调幅度略高;在野外自然生长植株的嫩叶、花蕾和幼嫩果荚中AmZFP1均有较明显的表达,而在嫩枝和根中检测不到其转录本;在野外植株的嫩叶中,AmZFP1在严冬季节高表达,而在春、夏、秋温热季节表达水平低或很微弱。利用RT-PCR方法克隆到AmZFP1编码区cDNA(816 bp),推测其编码蛋白含有2个典型C2H2型锌指结构域及一个核定位信号。此外成功将该cDNA片段构建到植物表达载体p3300-353T上,为下一步深入开展该基因功能研究奠定了基础。
- 任美艳王志林郭慧琴薛敏殷玉梅王茅雁
- 关键词：沙冬青锌指蛋白基因克隆
- 蒙古沙冬青1R-MYB基因AmMYB1R的克隆与表达分析被引量：1
- 2018年
- MYB家族转录因子与植物抗逆性密切相关。本研究利用RT-PCR方法从强抗逆沙漠植物蒙古沙冬青中克隆到AmMYB1R基因的编码区cDNA(903 bp)。推测其编码蛋白含一个由单一MYB重复单元(含端粒盒)组成的DNA结合域和一个H15结构域,故属于1R-MYB亚族的端粒结合型转录因子。利用半定量RT-PCR方法进行表达分析,表明该基因在正常培养的蒙古沙冬青幼苗中有一定量的基础表达,低温胁迫可迅速诱导其表达量明显上调,干燥胁迫诱导其表达上调较为迟缓,而盐胁迫可诱导其表达量波浪式少量上调。将克隆到的cDNA片段成功构建到植物表达载体上,为深入研究其功能奠定了基础。
- 任美艳马利贾俊欣张锋王茅雁
- 关键词：沙冬青基因克隆
- 蒙古沙冬青J蛋白基因AmJ20的克隆与表达分析
- 2017年
- DNA J蛋白是植物中广泛存在的一类分子伴侣,对于维持正常和逆境条件下蛋白质的稳态具有重要作用。我们在前期通过对强抗逆植物蒙古沙冬青进行转录组分析,发现一个寒旱诱导表达的J蛋白即Am J20编码序列,但其3'端编码区不完整。本研究通过3'RACE获得其c DNA全长序列(800 bp),推测其编码蛋白由179个氨基酸残基组成,含一个典型的J结构域,属于Ⅲ型J蛋白,此外还具有叶绿体和细胞核双定位信号;利用半定量RT-PCR方法检测该基因在野外生长植株中的时空表达模式,发现其在春、夏、秋季只有微量表达,甚至检测不到转录本,而在严冬时节高表达,此外在叶片中的表达量明显高于根、嫩枝、花蕾和幼嫩果荚;利用RT-PCR方法克隆到该基因编码区c DNA并将其插入到植物超表达载体上,为通过转基因植物分析该基因的功能提供了理论依据。
- 殷玉梅郭慧琴任美艳薛敏王茅雁
- 关键词：沙冬青基因克隆
- 沙冬青RING型锌指蛋白基因AmRFP1的克隆与功能初步分析被引量：2
- 2017年
- 利用RT-PCR方法,从强抗逆植物蒙古沙冬青克隆到1个受寒旱诱导的锌指蛋白基因AmRFP1。预测其编码蛋白由366个氨基酸残基组成,其中含有1个C3H2C3型锌指结构域,故属于RING-H2(C3H2C3)型锌指蛋白。该蛋白还含有2个跨膜区,很可能定位于细胞质膜。半定量RT-PCR分析表明,在不同季节野外生长沙冬青植株嫩叶中,AmRFP1在夏季只有低水平表达,进入秋季后表达量明显增加,尤其在秋末冬初其表达量迅速增加并达到全年最高峰,但在进入最寒冷的隆冬后又回落至秋季水平并维持到翌年春季基本未变。将该基因在拟南芥中超表达,则明显降低了转基因拟南芥的抗冻性。
- 任美艳杨晓茹殷玉梅郭慧琴张艳霞薛敏王茅雁
- 关键词：沙冬青基因克隆功能分析
- 蒙古沙冬青冷冻胁迫SMART cDNA文库的构建及序列分析被引量：11
- 2011年
- 以强抗逆植物蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)为材料,用SMART技术构建了其在冷冻胁迫下的全长cD-NA文库。原始文库滴度为9.44×106pfu/ml,重组率为98.3%,插入片段长度在0.5～2.5kb,平均达到1kb。扩增文库滴度为1.98×1010pfu/ml。从原始文库中随机挑取480个阳性克隆进行序列分析,获得348个Unigene,其中有些是逆境应答相关基因和新基因。此外,以扩增文库为模板,经PCR方法克隆到读码框为1083bp的沙冬青类RD22基因。结果表明所建文库质量较高,可以满足后续研究的要求。
- 刘佳杰林清芳李连国白薇王茅雁
- 关键词：沙冬青CDNA文库
- 蒙古沙冬青干旱胁迫全长cDNA文库构建及序列分析被引量：3
- 2012年
- 为了规模化分离强抗逆植物蒙古沙冬青Ammopiptanthus mongolicus(Maxim.)Cheng f.的抗旱基因并探讨其抗旱性分子机理,用SMART(Switching mechanism at 5′-end of RNA transcript)技术构建了其在干旱胁迫下的全长cDNA文库。原始文库滴度为1.6×107PFU/mL,重组率为97.7%,插入片段长度多数接近和超过1 kb。对3 000个阳性克隆进行了5′端测序和序列分析,共获得1 450条Unigene序列。在Nt、Nr和Swissprot等数据库中进行Blast搜索,结果有919条(占63.4%)与已知或推测功能的基因具有同源性,其余531条(占36.6%)为功能未知的新基因。将Unigene进行Gene Ontology(GO)功能分类,其中与生理过程、细胞过程、结合、催化活性和细胞组分相关的基因所占比例较高,其次是与细胞器、蛋白复合体、运输和结构分子活性相关的基因,与刺激应答、基因表达调节、生理生化调节和信号转导相关的基因也占相当比例。许多有功能注释的Unigene属于抗逆相关基因,用半定量RT-PCR方法分析其中6个基因的表达变化,证明其均参与对干旱胁迫的应答反应。为进一步开展表达谱分析和克隆、鉴定抗旱基因奠定了基础。
- 林清芳王学峰李记园赵鸿彬王茅雁
- 关键词：沙冬青干旱CDNA文库
