国家自然科学基金(30471952)
- 作品数：18 被引量：29H指数：3
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- 互隔交链孢酚激活EC9706细胞DNA聚合酶β表达的信号通路初探被引量：1
- 2009年
- 目的:研究互隔交链孢酚(AOH)对食管癌EC9706细胞株中DNA聚合酶β(DNApolβ)表达的影响.方法:以PKA激活剂Forskolin(40μmol/L)为阳性对照,采用免疫细胞化学,WesternBlot方法检测20μmol/LAOH作用EC9706细胞16h后polβ蛋白水平的表达.以PKA特异性抑制剂H89(10μmol/L)预处理EC9706细胞1h,再以20μmol/LAOH作用细胞16h,观察H89阻断AOH激活polβ蛋白表达的作用.结果:免疫细胞化学结果显示,与溶剂对照组和H89处理组相比较,AOH处理组,Forskolin处理组的细胞中polβ表达增高.WesternBlot结果表明,AOH处理组,Forskolin处理组polβ表达分别是溶剂对照组的2.05和3.12倍(P<0.05),而H89组仅为对照组的1.32倍.结论:AOH可以激活食管癌EC9706细胞中polβ基因表达,这可能是通过PKA信号转导通路介导的.
- 赵继敏李沛杨洪艳黄幼田江亚南赵明耀郑智敏董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β互隔交链孢酚蛋白激酶A信号转导通路
- 食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建
- 2014年
- 目的构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β(DNA polβ)基因敲除载体,为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,根据DNA polβ基因序列,设计并合成2对特异性引物(UP1/UP2和DOWN1/DOWN2),通过PCR扩增获得上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN),其中上游同源序列长1 268 bp,下游同源序列长2 150 bp,将其插入骨架载体pcDNA3.1,从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ,最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选,限制性酶切及DNA测序鉴定,证实上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN)2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法,成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。
- 冯龙郭文涛路武豪孙萨迦董子明
- 关键词：基因敲除DNA聚合酶打靶载体
- 阻断PKA信号通路对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察蛋白激酶A(PKA)信号通路在食管癌EC9706细胞增殖和凋亡中的作用。方法利用PKA特异性阻断剂H89作用于食管癌EC9706细胞,倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学改变;WST-8检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,H89作用于食管癌EC9706细胞24 h后,部分细胞出现细胞形态缩小,细胞增殖减慢;细胞增殖实验显示,吸光度值降低(P<0.05),细胞存活率下降;细胞凋亡检测结果显示,阻断PKA通路,促进细胞早期凋亡和晚期凋亡(P<0.05)。结论利用H89阻断PKA信号通路,可以改变食管癌EC9706细胞生物学特性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。
- 刘康栋赵继敏王瑾瑾马艳英杨洪艳郑智敏赵明耀董子明
- 关键词：食管癌EC9706细胞蛋白激酶A信号通路
- 全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达被引量：4
- 2006年
- 目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。
- 金戈赵继敏杨洪艳黄幼田郑智敏赵国强赵勤吴景兰董子明
- 关键词：食管肿瘤全反式维甲酸二甲亚砜细胞分化
- 互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞的急性毒性作用被引量：3
- 2009年
- 目的研究互隔交链孢酚(AOH)对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3的急性毒性作用。方法将对数生长期的NIH/3T3细胞分为10、50μmol/L AOH处理组和溶剂对照组,观察染毒细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究细胞存活率,采用彗星实验观察细胞的DNA损伤程度,利用流式细胞术(FCM)检测对细胞周期的影响。结果细胞处理后,出现明显的细胞形态学变化。MTT结果表明,10、50μmol/L AOH处理组细胞抑制率(分别为19.88%,32.47%)显著高于溶剂对照组(P<0.05)。10、50μmol/L AOH组在彗星实验中细胞拖尾率为35.87%和71.83%,尾部DNA含量为(36.18±18.6)和(51.3±21.6),显著高于溶剂对照组的拖尾率(14.78%)和尾部DNA含量(21.29±15.60)(P<0.05);10μmol/L AOH处理组对NIH/3T3细胞周期影响不明显,而50μmol/L AOH处理组引起S期增高和明显的G2/M期阻滞(P<0.05)。结论AOH可诱导NIH/3T3细胞的DNA损伤、抑制细胞增殖,并诱导G2/M期细胞阻滞。
- 赵继敏马俊芬赵军杨洪艳郑智敏董子明
- 关键词：互隔交链孢酚NIH/3T3细胞急性毒性
- DNA聚合酶β基因表达对NIH3T3细胞增殖影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察不同类型DNA聚合酶β(DNA Polymerase β,DNA pol β)在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的表达及细胞增殖特性的变化。方法用脂质体转染的方法,将野生型(wild type,wt)和食管癌缺失突变型(delete mutional type,dmt)的polβ重组荧光载体pEGFP-C3-polβ转染NIH3T3细胞,建立稳定表达polβ的细胞系,通过荧光倒置显微镜观察其定位,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法绘制生长曲线,流式细胞仪测定其细胞周期。结果转染2种类型polβ的NIH3T3细胞株中,均有外源基因mRNA水平和蛋白水平的表达;荧光倒置显微镜结果显示,野生型的以细胞胞核为主,缺失突变型的polβ表达以细胞胞浆为主,从第3d开始,缺失突变型的细胞生长速度较野生型和对照组明显增快(P<0.05);转染缺失突变型NIH3T3细胞的S期细胞比例为68.29%,明显高于野生型的57.18%、对照组的58.12%和未转染NIH3T3细胞的57.35%(P<0.05)。结论外源野生型polβ基因表达后对NIH3T3细胞的增殖速度无明显影响,而缺失突变型则使其增殖速度加快。
- 赵军路静杨洪艳黄幼田赵继敏赵明耀赵国强张曦董子明
- 关键词：基因表达细胞增殖
- 鼻咽癌组织中DNA聚合酶β基因的突变被引量：3
- 2007年
- 目的研究鼻咽癌中是否存在DNA聚合酶β(DNA poly meraseβ,polβ)的突变及变异情况。方法采用RT-PCR法(逆转录-DNA聚合酶链反应)、PCR-SSCP(聚合酶链-单链构象多态性分析)、DNA序列分析法对26例鼻咽癌组织进行polβ基因突变研究。结果鼻咽癌组织中存在polβ基因突变,且基因突变率与癌组织的病理分级有关,高分化(G1)、中度分化(G2)、低分化及未分化(G3)鼻咽癌组织中polβ基因突变率分别为12.5%(2/16)、21.4%(3/14)、80%(8/10)。G1与G2比较,差异无统计学意义(P>0.01),G1与G3、G2与G3比较,差异均有统计学意义(P<0.005)。测序结果表明,polβ基因的第454位核苷酸由T变为C,其氨基酸变异为第114位氨基酸由Phe变为Ser;第466位核苷酸由G变为A,其氨基酸变异为第118位氨基酸由Gly变为Glu;第148位核苷酸由A变为G,其氨基酸变异为第28位氨基酸由Asn变为Ser。结论发现在鼻咽癌组织中存在多种形式的polβ突变,导致氨基酸序列、空间结构的改变,可能与鼻咽癌的发生、发展相关。
- 郑红李明善赵国强董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β鼻咽癌基因突变
- 人DNA聚合酶β基因启动子碱基位点突变对萤光素酶表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察人DNA聚合酶B基因（DNApolymerasebeta，polB）启动子-37位C→A突变对萤光素酶表达的影响。方法从25例人正常食管黏膜及食管癌组织中提取基因组DNA，PCR扩增及测序分析，获得野生型及含-37位C→A的突变型polβ启动子序列。分别构建含人野生型和突变型的polβ启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3（W／M）polβ／promoter，转染食管癌细胞Eca9706及G418筛选，检测萤光素酶活性。结果野生型及突变型的polβ启动子片段正确插入萤光素酶报告载体pGL3-neo-enhancer。对照组pGL3-neo-enhancer、野生组pGL3Wpolβ／promoter和突变组pGL3Mpolβ／promoter萤光素酶活性分别为2743．50±227．30、1112976．00±82900．20和7882559．00±201824．90，三组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论polβ基因启动子对萤光素酶基因表达具有较强的启动活性，polβ启动子区-37位C→A碱基突变可显著增强萤光素酶的表达。
- 李月白张海风于雅丽赵国强董子明赵松
- 关键词：DNA聚合酶Β启动子萤光素酶报告基因突变
- 互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞毒性的作用被引量：3
- 2008年
- 目的研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的毒性作用,为互隔交链孢霉的致癌机制提供理论依据。方法以互隔交链孢酚(alternariol,AOH)为阳性对照,采用形态学观察,噻唑蓝法,生长曲线,流式细胞术(FCM)等方法检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞生长的影响及细胞周期的改变。结果ALT对NIH/3T3细胞的半数抑制率为76.4、50和100μmol/L的ALT染毒24 h可使NIH/3T3细胞生长曲线明显下降,并有明显的形态学改变;以10.0、20.0和50.0μmol/L的ALT染毒24 h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALT对NIH/3T3细胞有毒性作用,可抑制细胞增殖并诱导G2/M期细胞阻滞,其细胞抑制作用可能与细胞周期阻滞有关。
- 刘康栋马艳英赵继敏王瑾瑾杨洪艳黄幼田董子明
- 关键词：NIH/3T3细胞细胞毒性细胞周期
- 调控食管癌EC9706细胞DNA聚合酶β表达的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:观察DNA聚合酶β(DNA polβ)对食管癌EC9706细胞生物学特性的影响。方法:以pSINsi-hU6为载体构建DNA polβ靶向的siRNA表达质粒,转染EC9706细胞,G418筛选。流式细胞术和裸鼠体内成瘤实验检测细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测细胞DNA polβmRNA的表达。结果:与空载体组和对照组相比,实验组1和实验组2(转染siRNA重组表达质粒)DNA polβmRNA的表达显著下降(P<0.05),DNA polβ高表达组中mRNA的表达显著升高(P<0.05);实验组1、实验组2和DNA polβ高表达组细胞周期S期比例显著增加(P<0.05),肿瘤重量亦显著增加(P<0.05)。结论:DNA polβ的高表达和过低表达,都会增加细胞的遗传不稳定性,可能在食管癌的发生中起一定作用。
- 王涛董子明赵国强
- 关键词：食管肿瘤DNA聚合酶ΒRNA干扰SIRNA表达载体
