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腺病毒骨形态发生蛋白2绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质干细胞成骨及示踪作用被引量：4: 2009年; 目的观察腺病毒介导的人骨形态发生蛋白绿色荧光蛋白基因（Ad-GFP-hBMP-2）转染对骨髓间质干细胞（bMSCs）成骨能力的影响。方法取日本大耳白兔4只自双侧股骨远端抽取骨髓培养bMSCs。以Ad—GFP—hBMP-2基因（实验组）及Ad—GFP（对照组）基因转染bMSCs后，用ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性；原位杂交检测两组细胞Ⅰ型胶原的表达；Westernblot检测细胞中BMP-2的表达。将转染后24h的bMSCs接种到裸鼠体内，术后第4、8、12周观察成骨情况。结果转Ad—GFP—hBMP-2基因组和Ad—GFP组各时间段ALP分泌量差异分别有统计学意义（P〈0．01）；实验组Ⅰ型胶原原位杂交实验组为阳性。实验组成骨阳性率为90％，对照组为40％。结论bMSCs经Ad—GFP—hBMP-2基因转染后能高效表达BMP-2并诱导成骨。腺病毒介导人BMP-2转基因可以提高bMSCs的成骨能力。; 胡汉祥刘丹平张正李晖王栋梁巴彩凤; 关键词：基因转染骨形态发生蛋白-2

VEGF121和BMP2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及其在HEK293中的表达被引量：2: 2011年; 目的构建人血管内皮生长因子121(VEGF121)与人骨形态发生蛋白2(BMP2)双基因共表达腺病毒载体Adv-BMP2-IRES-VEGF121,并观察其在人胚肾细胞株(HEK293)中的表达情况。方法对腺病毒质粒pShuttle-CMV-BMP2的目的基因BMP2进行PCR扩增。腺病毒质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1经Kpn I/Xba I酶切后,将BMP2片段定向导入pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,构建pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,并注入大肠杆菌DH5a中扩增,提取质粒。通过酶切分析、PCR检测和序列分析进行鉴定。将构建所得的质粒转染HEK293,采用RT-PCR法检测HEK293中的BMP2、VEGF121 mRNA,Western blot法检测其蛋白。结果成功构建了Adv-BMP2-IRES-VEGF121。酶切分析及DNA序列测定证实重组质粒构建正确。质粒转染后的HEK293 BMP2和VEGF121表达阳性。结论成功构建了Adv-BMP2-IRES-VEGF121,其转染HEK293后,VEGF121、BMP2在HEK293中共表达阳性。; 栗刚吴秀成钟声王巍李媛刘丹平; 关键词：腺病毒载体质粒

地塞米松预培养兔BMSCs促进腺病毒介导BMP2转基因的高效表达被引量：3: 2007年; 目前，骨形态发生蛋白2（BMP2）的基因治疗在骨组织工程中正成为广泛研究的热点。国外最新研究表明，以腺病毒为载体转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）表达BMP2的效率取决于细胞的分化状态，1μmol／L地塞米松诱导培养人BMSCs后再进行腺病毒转染，其BMP2的表达量是单纯转染组的20倍。在此基础上，笔者首次利用同时表达绿色荧光蛋白（GFP）和BMP2的AdCMV—hBMP2-IRES—GFP-1转染兔BMSCs，通过流式细胞仪等方法，; 王栋梁刘丹平张正胡汉祥; 关键词：BMSCS BMP2 地塞米松骨髓间充质干细胞转基因

骨组织工程支架A-W-MGC/CS的体内成骨实验研究: 2016年; [目的]探讨多孔纳米磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷/壳聚糖复合支架材料(A-W-MGC∕CS)载体承载粘附腺病毒载体的种子细胞体内成骨能力。[方法]培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),转染Ad-GFPh BMP后接种于载体上,电镜观察贴附情况;MTT检测增殖情况;制备日本大耳白兔桡骨1.5 cm骨缺损模型,分三组。实验组1植入经Ad-GFP-h BMP转染的BMSCs载体;实验组2仅植入载体;空白组不植入任何载体,仅注射经Ad-GFP-h BMP转染的BMSCs。术后12周X线片观察骨缺损修复情况,取出缺损区标本行病理切片观察。[结果]A-W-MGC∕CS载体可较好贴附BMSCs且对细胞增殖无明显影响。实验组1骨缺损修复较好,支架材料完全降解;实验组2新生骨质量较差;空白组未见缺损修复,主要由纤维结缔组织填充。[结论]A-W-MGC∕CS构建的组织工程骨具有较好的骨缺损修复能力。; 郭威李谌刘丹平; 关键词：骨组织工程骨缺损

pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞前后生长特性的研究被引量：2: 2009年; 目的观察pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞前后的生长特性变化,为骨组织工程的种子细胞选择打下基础。方法抽取成年雄性新西兰大白兔髂骨骨髓,密度梯度离心获得骨髓基质细胞,培养传至第5代,按处理方法分为常规培养液组(A组),pcDNA3-hBMP2转染组(B组)。观察原代MSC及第5代的细胞形态等生长特性并与转染组进行比较。结果原代MSCs为短梭形,簇形生长,传代细胞呈长梭形,旋涡形生长。转染组细胞72 h后表达BMP2,瞬间表达为100%。转染细胞未经筛选培养4周细胞形态发生较明显地变化,细胞生长周期改变。结论pcDNA3-hBMP2成功转染兔骨髓基质细胞并改变其生物学特性。; 魏利成刘丹平蒲勤王朝燕蒋清尹建文张正; 关键词：骨髓基质细胞

腺病毒载体介导BMP-2基因修复骨缺损的研究进展被引量：2: 2007年; 腺病毒载体（Adv）介导的骨形态发生蛋白2（BMP-2）转基因方法被认为是目前最有效的转基因诱导成骨修复骨缺损的方法之一。进一步改造腺病毒载体，降低免疫原性，提高基因治疗的安全性，已成为目前研究工作的重点。在参考大量的相关文献基础上，现就腺病毒载体基因治疗骨缺损的研究概况、宿主免疫应答问题以及解决方案几个方面，对介导BMP-2基因修复骨缺损的腺病毒载体的研究进展作一综述。; 王栋梁刘丹平; 关键词：腺病毒载体骨形态发生蛋白2 成骨诱导

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国家自然科学基金(30672125)