国家自然科学基金(81201304)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王慧李军张文宝张富春温浩更多>>
- 相关机构：新疆医科大学第一附属医院新疆大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细粒棘球蚴自发荧光观察及光谱特征分析被引量：1
- 2015年
- 目的研究细粒棘球蚴的自发荧光现象及共聚焦λ扫描特点,丰富细粒棘球蚴光谱学和生物学信息,为后期免疫荧光及医学光子学研究奠定基础。方法采集自然感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,在无菌条件下收集包囊内的原头蚴进行体外培养,亚甲基蓝染色确定原头蚴活力。激光扫描共聚焦显微镜下分别以405nm、488nm、514nm、561nm等不同激发光激发观察虫体自发荧光,并分别对这5种激发光激发的细粒棘球蚴做自发荧光λ扫描分析,同时采用全波长多功能酶标仪下分别以405nm、488nm、514nm、563nm、633nm等5种激发光激发细粒棘球蚴,绘制其自发荧光曲线。结果经亚甲基蓝染色测定原头蚴活力为100%。共聚焦显微镜观察不同激发光照射下细粒棘球蚴虫体能发出多种不同颜色的自发荧光。在相同的激发强度及探测器电压的情况下,以405nm激光激发的蓝色荧光效果最佳,虫体大体结构清晰;λ扫描分别以405nm、488nm、514nm、561nm、633nm等5种激发光激发样品,相应敏感的发射波长分别为490~520nm、520nm及580nm左右、580~600nm、610~630nm和650nm左右,其中405nm、488nm和561nm激发效果较好,514nm、633nm激发效果欠佳。全波长多功能酶标仪检测细粒棘球蚴做自发荧光曲线与共聚焦显微镜结果基本一致,但所测定的虫体自发荧光强度较共聚焦显微镜偏低。结论激光扫描共聚焦显微镜下可观察到细粒棘球蚴虫体自发荧光,其中以405nm激发的蓝色荧光最强;细粒棘球蚴虫体自发荧光光谱较宽,490~520nm、610~630nm,405nm、488nm和561nm为较适宜的激发波长。
- 杨宁张雪张传山吕国栋李亮刘欢元王慧
- 关键词：细粒棘球蚴自发荧光共聚焦显微镜
- 细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。
- 王慧李军张富春张文宝温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫毕赤酵母分泌表达抗氧化
