国家自然科学基金(30672134)
- 作品数：6 被引量：42H指数：5
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- 细胞因子表达谱在人脐带Wharton胶间质干细胞诱导分化成软骨细胞的变化
- [目的]观察从人脐带Wharton’s胶中分离的间质干细胞(WMSC)诱导分化成软骨细胞时表达细胞因子及生长因子的异同,从而为WMSC诱导的软骨细胞用于组织工程的构建以及其在临床的应用打下基础。[方法]从人正常足月分娩的...
- 侯克东郭全义张莉袁玫眭翔汪爱媛许文静刘舒云卢世璧
- 关键词：干细胞软骨细胞细胞因子蛋白芯片法
- 文献传递
- 人脐带Wharton胶中间充质干细胞体外无支架组织工程软骨的构建被引量：5
- 2010年
- 背景:构建组织工程软骨的方法多为自体种子细胞复合天然或合成物支架,目前多存在种子细胞来源有限、支架安全性和生物相容性、以及细胞在支架中分布不均的问题。目的:探讨人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导分化并体外构建无支架组织工程软骨的可行性。方法:分离培养人脐带Wharton胶中的间充质干细胞,进行流式细胞学鉴定。对软骨诱导前后的细胞进行组织学和免疫组织化学染色,对其表达的葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原进行定量研究,并应用RT-PCR检测软骨诱导前后Ⅱ型胶原和Sox-9mRNA的表达。采用密集诱导培养→离心管培养→生物反应器培养,进行体外构建无支架软骨组织。结果与结论:人脐带Wharton胶富含干细胞,流式细胞仪检测结果显示这些细胞不表达造血干细胞标志,表达CD44,CD105、CD271等间充质干细胞表面标志;HLA-ABC阳性表达,HLA-DPDQDR阴性表达。未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志,诱导后葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原显著增高。RT-PCR结果显示人脐带Wharton胶间充质干细胞诱导前后均表达Sox-9、Ⅱ型胶原mRNA。说明人脐带Wharton胶间充质干细胞具有前软骨细胞的特性。采用密集诱导培养结合生物反应器培养,不用支架,体外可以构建成大块组织工程软骨。表明人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种良好的构建组织工程软骨的种子细胞。
- 侯克东袁玫张莉郭全义彭江眭翔赵斌刘舒云卢世璧
- 关键词：脐带软骨组织工程软骨
- 人脐带Wharton胶中间充质干细胞的分离、培养与鉴定被引量：16
- 2008年
- 目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法去除新鲜人脐带动静脉和脐带外膜组织,获得Wharton胶,分别采用酶消化法和组织块培养法获得脐带Wharton胶中的干细胞,通过细胞传代培养、生长曲线测定、活细胞鉴定进行细胞生长动力学研究,流式细胞仪分析细胞表面分子特点,组织化学和免疫组化染色鉴定软骨特征性标志物表达情况。RT-PCR检测Sox-9及Col-2A1mRNA表达情况。结果采用酶消化法可以快速分离Wharton胶中MSCs,且细胞迅速贴壁生长;组织块法培养获得种子细胞时间较长。流式细胞仪检测显示所获得的细胞表达CD44、CD105等MSCs标志物,HLA-ABC表达阳性,HLA-DPDQDR表达阴性。经过冻存复苏后免疫表型无显著变化。组织化学和免疫组化染色显示脐带Wharton胶MSCs弱表达软骨特征性标志。RT-PCR显示Wharton胶MSCs表达Sox-9和Col-2A1。结论人脐带Wharton胶MSCs不向造血系分化,且具有前软骨细胞的特性,有望作为软骨组织工程新型的种子细胞。
- 侯克东卢世璧张莉袁玫孙明学彭江赵斌眭翔许文静
- 关键词：脐带间质干细胞细胞培养
- 人脐带Wharton胶间质干细胞的免疫特性研究被引量：2
- 2011年
- 目的 对人脐带Wharton胶间质干细胞（human umbilical cord Wharton＇s Jelly-derived MSC,hWJMSC）进行免疫特性的体外和体内研究,探讨其应用于临床的可行性.方法 取人脐带并分离Wharton胶,组织块法培养hWJMSC,通过细胞表面干细胞标志和多向分化实验对其进行鉴定;通过流式细胞术、免疫组织化学及RT-PCR等实验方法体外检测hWJMSC的主要组织相容性抗原（HLA-ABC和HLA-DPDQDR,即MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ）、表面共刺激分子（CD40、CD80、CD86）和免疫抑制分子（HLAC、IDO、PGE2）等的表达;通过细胞因子蛋白芯片和Western blot实验检测并验证hWJMSC中与免疫抑制相关的细胞因子（IL-10、TGF-β、VEGF、HGF）的表达;另外,还构建了hWJMSC-支架复合体,将其埋人家兔背部皮下,观察其在体内的免疫反应.结果 从人脐带Wharton胶中分离、培养获得长梭形细胞,经流式细胞术及多向分化实验鉴定其为间质干细胞;流式细胞术及免疫组化等检测显示所分离的hWJMSC不表达MHC-Ⅱ,表达MHC-Ⅰ,阳性表达免疫抑制因子HLA-G、IDO、PGE2以及免疫抑制相关细胞因子IL-10、TGF-β、VEGF、HGF,表明其具有低免疫原性和诱导免疫耐受的能力;hWJMSC-支架埋人家兔皮下未引起免疫反应.结论 hWJMSC的免疫原性低,具有抑制免疫排斥、诱导宿主免疫耐受的能力,可应用于异体移植.
- 刘舒云卢世璧袁玫张莉侯克东郑希福赵斌眭翔许文静郭全义
- 关键词：脐带间质干细胞免疫耐受
- 新型种子细胞——脐带间充质干细胞在组织工程中的应用被引量：6
- 2007年
- 侯克东卢世璧袁玫
- 关键词：脐带间质干细胞
- 人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导的实验研究被引量：11
- 2007年
- 目的研究人脐带Wharton胶中间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）向软骨诱导分化的特性。方法去除新鲜人脐带动、静脉和外膜组织，获得Wharton胶并剪碎，胶原酶消化法进行原代培养。经传代培养、流式细胞检测表面标志、克隆形成率测定后，用软骨诱导培养液使MSCs向软骨细胞分化，并以组织化学和免疫组织化学染色进行鉴定。逆转录聚合酶链反应（reverse transcription—polymerase chain reaction，RT-PCR）检测软骨特征性标志。结果人脐带Wharton胶富含干细胞。采用酶消化法可快速分离培养原代细胞。流式细胞检测表明这些细胞不表达造血干细胞标志，表达CD44、CDl05、CD27l等间质干细胞表面标志；HLA-ABC阳性表达，HLA—DPDQDR阴性表达。不同代MSCs的克隆形成率差异无统计学意义（P〉O．05）。未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志，经软骨诱导分化后，组织化学和免疫组织化学检测表明其能够较好地表达软骨细胞标志。RT—PCR结果显示人脐带Wharton胶中MSCs诱导前后均表达Sox-9、Col-2Al。结论人脐带Wharton胶中MSCs来源广泛，无伦理学限制；且具有前软骨细胞的特性，有望成为软骨组织工程新型的种子细胞。
- 侯克东许文静张莉袁玫孙明学彭江赵斌眭翔郭全义卢世璧
- 关键词：脐带间质干细胞软骨
- 细胞因子表达谱在人脐带Wharton胶间质干细胞诱导分化成软骨细胞的变化被引量：5
- 2009年
- [目的]观察从人脐带Wharton’s胶中分离的间质干细胞(WMSC)诱导分化成软骨细胞时表达细胞因子及生长因子的异同,从而为WMSC诱导的软骨细胞用于组织工程的构建以及其在临床的应用打下基础。[方法]从人正常足月分娩的脐带中分离间质干细胞,在体外以条件培基诱导分化成软骨细胞,免疫组化法鉴定其特性,应用细胞因子蛋白芯片方法检测WMSC及其诱导分化的软骨细胞所表达细胞因子及生长因子,并取成年人正常关节软骨为对照。[结果]78种细胞因子和生长因子在WMSC及其诱导分化的软骨细胞均有表达,两者表达谱相同,而表达量则多少有不同。诱导分化后表达量增多的因子为:MIP-3α,ENA-78,VEGF,PDGF-BB,SCF,FGF-7,GCP-2及SDF-1。减少的因子为MIP-1βHGF,NT-4,IL-10及MIP-δ。其共同表达的具免疫抑制作用的因子对降低异体移植时的免疫排斥可能有一定作用,其共同表达的金属蛋白酶抑制因子对其移植于体内时可具有保护作用。而共同表达的肿瘤生长抑制因子则可减少对干细胞移植后瘤变的担心。[结论]从人脐带wharton’s胶中分离的间质干细胞(WMSC)诱导分化成软骨细胞时表达细胞因子及生长因子谱相同,是一种理想的可替代自身软骨细胞的新型种子细胞,用于构建工程软骨组织。
- 侯克东郭全义张莉袁玫眭翔汪爱媛许文静刘舒云卢世璧
- 关键词：干细胞软骨细胞细胞因子蛋白芯片法
