国家自然科学基金(30471723)
- 作品数：21 被引量：51H指数：5
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- 补体在肠缺血再灌注损伤中的作用及机制被引量：4
- 2010年
- 肠缺血再灌注后补体经典途径、MBL途径和旁路途径有不同程度的活化,补体活化产物C3a、C4a、C5a和攻膜复合物(MAC)能引起组织炎症损伤,其机制有MAC介导的直接效应,有C3a、C5a和亚溶解数量的MAC刺激白细胞和血管内皮细胞产生一系列炎症介质,导致肠黏膜损伤,甚至累及远端器官功能障碍的间接效应。目前,已有多种补体抑制剂用于对肠缺血再灌注损伤的保护研究。
- 刘高科汪正清
- 关键词：补体缺血再灌注炎症补体抑制剂
- 双功能域小分子补体受体1型衍生物的构建、表达、纯化及生物功能鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型（complement receptor type 1，CR1）衍生物。方法从外周血提取总RNA，进行RT—PCR扩增出功能性片段I（CR1-SCR1—3）；以本室构建的pET-32a—CR1-SCR15—18为模板扩增功能性片段Ⅱ（CRl-SCR15—17）；利用重叠延伸PCR（SOE—PCR）法扩增出包含双功能域的融合基因。将融合基因重组于pET-32a（＋）载体，转化大肠杆菌Rosetta，经酶切及DNA序列测定鉴定后，IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western blot对表达蛋白质进行分析鉴定。蛋白质经Ni柱亲和层析及透析复性后，采用50％补体溶血抑制试验（CH50）进行功能鉴定。结果酶切及DNA序列测定证实成功构建出了pET-32a—CR1-SCR（1-3＋15-17）重组表达载体，IPTG诱导表达后在相对分子质量（Mr）为63×10^3处有一明显的条带，经Western blot鉴定为目的蛋白，Ni柱亲和层析获得纯度约为92％的目的蛋白，功能试验证实，在0～200μg／ml的融合蛋白剂量范围内，随着浓度的增加，补体抑制活性增强。结论成功构建并在大肠杆菌内表达了具有较高生物活性的重组双功能域小分子CR1衍生物，为体内保护实验研究提供实验数据。
- 杨永涛何莉刘高科谭兵汪正清
- 关键词：补体受体1型重叠延伸PCR原核表达蛋白纯化生物学活性分析
- 补体级联反应在脑缺血/再灌注炎症损伤中的作用被引量：1
- 2011年
- 缺血性脑血管疾病及缺血再灌注损伤严重危害人类的健康。补体系统过度激活的炎症效应片段是脑缺血再灌注损伤中最重要的始动因素之一。本文就脑内补体表达,脑缺血时脑内补体的激活,活化的补体片段对脑的损伤机制以及补体抑制剂在脑缺血再灌注中的应用研究进行综述。
- 鲜尽红何莉汪正清
- 关键词：脑缺血补体缺血再灌注炎症
- sCR1-SCR15-18蛋白减轻补体介导的大鼠脑缺血/再灌注损伤被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨补体在大鼠大脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的作用及重组人可溶性补体受体Ⅰ型SCR15-18蛋白(sCR1-SCR15-18)的保护作用。方法:75只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、I/R组和sCR1-SCR15-18保护组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion MCAO),缺血2h,再灌注24h后,进行神经功能学评分,测定脑梗死体积、大脑皮质髓过氧化物酶(myeloperoxi-dase,MPO)活性,观察大脑皮质区补体C3b沉积和病理改变。结果:缺血/再灌注24h后,sCR1-SCR15-18保护组神经功能学评分,脑梗死体积及脑皮质MPO活性明显低于I/R组(P<0.05);sCR1-SCR15-18保护组缺血脑组织补体C3b沉积明显减少,病理损伤减轻。结论:补体在脑I/R损伤中起一定作用,sCR1-SCR15-18蛋白对大鼠I/R损伤脑具有保护作用。
- 何莉杨永涛郭光金刘高科汪正清
- 关键词：补体脑缺血再灌注损伤炎症
- 补体在缺血再灌注损伤中的作用及机制被引量：2
- 2007年
- 补体系统在缺血再灌注时通过多种途径被激活,形成大量的活化片段。这些片段在缺血再灌注损伤中发挥着重要作用,它们通过直接作用和对白细胞与内皮细胞的间接作用造成组织器官损伤。目前抗补体的药物虽较多,但真正用于临床的十分有限。笔者现就缺血再灌注时补体的激活途径,活化补体成分引起损伤的作用机制及防治研究进展综述如下。
- 谭兵张德纯汪正清
- 关键词：补体补体激活缺血再灌注损伤
- 人补体受体1型衍生分子融合基因CR1-SCR2D的构建、表达及生物学活性鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建和表达具有抑制补体生物活性的双功能域人补体受体1型衍生分子CR1-SCR2D。方法基于我室前期工作,将CR1-SCR1-3、人工α螺旋肽段linker、SCR15-17 3个DNA片段依次克隆到改造载体pPIC9k(+)和pPICZαB,构建出表达质粒pPICZαB-CR1-SCR2D;电转化毕赤酵母X-33得到阳性重组子,甲醇诱导目的蛋白CR1-SCR2D表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达结果;经纯化获得CR1-SCR2D并进行糖基化鉴定后,用CH50和AH50法鉴定目的蛋白在体外抑制补体的生物活性。结果成功构建了目的基因的表达质粒pPICZαB-CR1-SCR2D,基因测序正确;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中实现了分泌表达;经镍柱纯化后得到较纯的CR1-SCR2D,糖基化鉴定证明其存在糖基化;CH50法和AH50法结果显示CR1-SCR2D均有较CR1-SCR1-3和CR1-SCR15-17更好的抑制补体生物学活性。结论成功构建了双功能域人补体受体1型衍生分子融合基因CR1-SCR2D,在毕赤酵母中实现了CR1-SCR2D的分泌表达,该融合蛋白对经典/MBL途径及旁路途径补体激活均具有较好的抑制作用。
- 路延之李庆伟杨绍俊张璇汪正清
- 关键词：融合基因
- 人sCR1结合C3b结构域基因的克隆及在大肠杆菌中高效表达被引量：9
- 2005年
- 目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因。方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定。结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cD-NA序列一致。成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体。免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果。结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达。
- 罗雪汪正清
- 关键词：蛋白质表达
- 重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性。结果得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白。结论优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础。
- 谭兵张德纯汪正清
- 关键词：包含体纯化复性
- 人sCR1活性片段原核表达载体的构建与蛋白表达及生物活性鉴定被引量：1
- 2006年
- 汪正清罗雪谭兵
- 关键词：活性鉴定蛋白表达补体系统
- 重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段对心肌缺血再灌注损伤的保护作用被引量：12
- 2007年
- 目的探讨重组人可溶性补体受体1型 SCR15-18片段(sCR1-SCR15-18)对心肌缺血再灌注的保护作用。方法 36只 SD 大鼠随机分为假手术(SO)组,缺血再灌注(I/R)组和 sCR1-SCR15-18(sCR1)保护组。建立急性心肌缺血再灌注模型,结扎冠状动脉前立即注射磷酸盐缓冲液(0.1 ml/100 g)或 sCR1-SCR15-18蛋白(15 mg/kg)。测定心肌梗塞面积,血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK),心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性,HE 染色观察心肌病理改变和免疫组织化学法检测 C3c。结果(1)心肌梗死面积:I/R 组为(22.9±3.0)%,sCR1保护组为(16.1±3.3)%(P<0.05)。(2)血清心肌酶 CK(U/L):I/R 组为3400.9±534.9,sCR1保护组为2532.5±597.1(P<0.05)。LDH(U/L):I/R 组为6572.0±476.3,sCR1保护组为5436.2±611.3(P<0.05)。(3)心肌组织 MPO 活性(U/g):I/R 组为1.12±0.13,sCR1保护组为0.81±0.14(P<0.05)。(4)心肌病理改变:I/R 组心肌有断裂、坏死,间质肿胀,出血及中性粒细胞浸润,sCR1保护组心肌的以上病理变化明显较 I/R 组减轻。(5)与 VR 组比 sCR1保护组梗死区心肌组织 C3c 的沉积减少。结论 sCR1-SCR15-18蛋白对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
- 谭兵兰阳军张德纯汪正清
- 关键词：心肌缺血心肌再灌注损伤
