教育部科学技术研究重点项目(212009)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544免疫原性蛋白的鉴定
- 2013年
- 克罗诺杆菌是一种新型的食源性致病菌。迄今为止,对阪崎克罗诺杆菌的免疫原和潜在毒力因子了解很少,而免疫原性蛋白在细菌的致病性方面发挥着重要的作用。本研究利用免疫蛋白组学的方法,鉴定了阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544的免疫原性蛋白。利用固定后的阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544菌体免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;采用蔗糖密度梯度离心法,提取蛋白质,并利用双向电泳对蛋白质进行分离;以制备的多克隆抗体作为一抗进行免疫印迹分析,对具有免疫反应的蛋白点进行质谱鉴定,结果共鉴定出7种具有明显免疫反应的蛋白质。
- 王健杜欣军王硕
- 关键词：双向电泳
- 阪崎克罗诺杆菌PCR-RFLP分型方法的建立
- 2013年
- 克罗诺杆菌是一种发现较晚的食源性致病菌。快速的分型方法对于食源性疾病暴发中致病菌的溯源和种内遗传变异具有重要的作用。本研究中,在充分考虑基因片段的长度、同源性、酶切位点及PCR扩增效率等因素的基础上,从65个候选基因(53个鞭毛相关基因和12个菌毛相关基因)中,筛选出2个菌毛相关基因(命名为P3和P4)作为限制性片段长度多态性(RFLP)分型的靶标基因。选择4种限制性内切酶,分别对2种基因进行限制性酶切,经非变性丙烯酰胺凝胶电泳和软件分析,对阪崎克罗诺杆菌进行8种PCR-RFLP分型,并分别构建系统树。将分型结果与BOX-PCR分型作比较,P3基因经限制内切酶HaeIII的分型结果与BOX-PCR分型结果具有较高的一致性。利用限制性内切酶HaeIII对P3基因进行酶切所建立的PCR-RFLP分型方法,可用于阪崎克罗诺杆菌的初步分型。
- 王健杜欣军王硕
- 关键词：分子分型
- 金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD的原核表达及抗体制备被引量：3
- 2015年
- 根据金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌标准菌株基因组为模板进行PCR扩增,获得了大小为2 043bp的基因片段。将基因片段连接至表达载体pET26b,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果表明,SdrD基因获得了较好的表达,重组蛋白的分子质量约为99ku。利用免疫亲和层析对目标蛋白进行纯化,获得了纯度较高的目标蛋白。用该蛋白免疫新西兰白兔制备了多克隆抗体,抗体效价达到1∶23 000,为金黄色葡萄球菌基因工程疫苗的开发与性能评价,以及该致病菌免疫检测技术的开发奠定了基础。
- 杜欣军王学连李萍耿洁洁张洪娟王硕
- 关键词：金黄色葡萄球菌表面蛋白抗体制备
- 不同培养基对紫色红曲霉发酵规律的影响被引量：5
- 2014年
- 通过液态培养,研究4种不同培养基(麦芽汁培养基、PDA培养基、蔗糖-酵母浸膏培养基及大米培养基)对紫色红曲霉YY-1菌体生长、红曲色素及桔霉素产生规律的影响。结果显示,YY-1在蔗糖-酵母浸膏培养基中菌体长势最好,发酵至20 d时达到最大生物量,为0.027 g/mL,而利用麦芽汁培养基培养生成的菌丝体最少;色素及桔霉素产生能力最强的是大米培养基,培养至第8天时,3种色素产量达到最大值,红色素、橙色素及黄色素色价分别为5833.05、4493.84、4423.27 U/g,培养至第4天时,桔霉素达到最高峰,其含量为159.755 mg/kg,在蔗糖-酵母浸膏培养基色素及桔霉素产生能力最弱;比较不同培养基产生的色素种类发现,大米培养基有利于红色素的产生,而麦芽汁培养基则利于产生橙色素和黄色素。
- 杨悦王硕杜欣军李萍程晓真梁彬
- 关键词：红曲色素桔霉素
