国家自然科学基金(30471711)
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
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- 串联表达大鼠心肌细胞Kir2·1shRNA载体的构建及其体外效应被引量：11
- 2005年
- 目的构建串联表达5个针对大鼠kir2·1基因shRNA的真核表达载体,观察其对该基因表达的影响。方法选择5个针对大鼠kir2·1基因的RNA干扰位点,分别设计合成相应的5对寡核苷酸链,形成双链后分别连入带有U6启动子的相应载体,反复酶切连接将表达5个kir2·1shRNA的目的基因依次连接入载体pEGFP6-1,构建成串联真核表达载体pEGFP6-1Kir2·1,将其转染培养的大鼠心肌细胞,RT-PCR和Western印迹检测其对Kir2·1mRNA转录和蛋白表达的影响。结果成功构建串联表达5个大鼠Kir2·1基因shRNA的真核表达载体,该载体对大鼠心肌细胞Kir2·1mRNA转录的抑制率为83·5%,对心肌细胞Kir2·1蛋白表达的抑制率为68·1%。结论串联表达多个大鼠心肌细胞Kir2·1基因shRNA真核表达载体介导的RNA干扰可以特异性抑制该基因的表达,可能成为制造生物起搏器的一种新方法。
- 雷印胜张海洲王来城郭兰敏范全心邹承伟李红昕王安彪
- 关键词：基因疗法RNA干扰
- 质粒介导shRNA对心肌细胞kir2.1蛋白表达和搏动频率的影响被引量：2
- 2006年
- 目的构建抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的真核表达质粒pEGFP 6-k ir2.1,观察对大鼠心肌细胞k ir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白表达情况及搏动频率的影响。方法选择5个针对大鼠心肌细胞k ir2.1基因的RNA干扰(RNA in terference)位点,设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U 6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP 6-k ir2.1。转染大鼠心肌细胞,并将其分为3组:实验组、阴性质粒对照组和空白对照组。转染后72h,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(W estern-b lotting)检测k ir2.1mRNA和蛋白表达情况,并观察细胞搏动频率。结果转染后72h,实验组心肌细胞k ir2.1 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P<0.01),两对照组间比较差别无统计学意义;实验组搏动频率增加,并显著高于两对照组(P<0.01),两对照组之间搏动频率差别无统计学意义。结论真核表达质粒pEGFP 6-k ir2.1能明显抑制大鼠k ir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性。
- 李凡东雷印胜邹承伟范全心
- 关键词：KIR2.1生物起搏器
- 核糖核酸干扰抑制心肌细胞KCNJ2基因表达被引量：3
- 2005年
- 目的:构建抑制大鼠心肌细胞KCNJ2基因表达的真核表达质粒,应用RNA干扰技术观察其抑制心肌细胞KCNJ2基因表达的情况,为生物起搏器的研究提供一种新的思路和方法。方法:选择5个针对大鼠心肌细胞基因KCNJ2mRNA的干扰位点,构建含5个目的基因的重组质粒pEGFP61kir2.1。实验组:乳鼠心肌细胞转染pEGFP61kir2.1质粒,阴性质粒对照组:转染PEGFP6IC,空白对照组:未做任何处理。转染大鼠心肌细胞后72h,通过逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和Westernblot,在mRNA和蛋白质水平检测RNA干扰(RNAi)抑制KCNJ2基因表达的效果,并观察细胞搏动频率变化。结果:实验组心肌细胞KCNJ2mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P<0.01),两对照组无明显差异。转染后72h实验组搏动频率增加,显著高于两对照组(P<0.01),两对照组之间搏动频率无明显差异。结论:RNA干扰技术可用于抑制大鼠心肌细胞KCNJ2基因的表达,为生物起搏器的研究提供了一种新的思路和方法。
- 李凡东张海洲邹承伟雷印胜范全心李红昕
- 关键词：RNA干扰质粒生物起搏器
