河北省自然科学基金(H2013209180) 作品数:10 被引量:26 H指数:3 相关作者: 章广玲 王梅梅 熊亚南 刘志勇 张淑杰 更多>> 相关机构: 河北联合大学 华北理工大学 中南大学 更多>> 发文基金: 河北省自然科学基金 国家自然科学基金 唐山市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响 被引量:3 2021年 miR-199a-5p是miRNAs家族的一员。为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞。采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和CollagenⅠ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平。结果表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P<0.01)、迁移(P<0.01)和集落形成(P<0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)和集落形成能力(P<0.01)受到抑制。RTqPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P<0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达水平升高。以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖。 王源 刘章心怡 苏静慧 王密斯 张荣花 熊亚南 王梅梅 甄永占 章广玲关键词:肝星状细胞 细胞增殖 迁移 EB病毒阳性肺癌组织中LMP-1、p53、Bcl-2及MMP-9表达 被引量:3 2013年 [目的]检测EB病毒(EBV)阳性肺癌组织中EBV潜伏感染膜蛋白-1(LMP-1)、p53、Bcl-2及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达情况,分析它们与肺癌发生发展的关系。[方法]采用原位杂交法检测108例肺癌组织和22例癌旁正常肺组织中EBV编码的小RNA-1(EBV encoded small RNA-1,EBER-1)。免疫组织化学的方法检测EBER-1阳性和阴性肺癌组织中LMP-1、p53、Bcl-2及MMP-9的表达。[结果]108例肺癌组织中EBER-1阳性36例,阳性率33.3%;22例癌旁正常肺组织中EBER-1阳性1例,阳性率4.5%,差异有统计学意义(P<0.01)。EBER-1阳性和阴性的肺癌组织中LMP-1阳性率分别为11.1%和4.2%,差异无统计学意义(P>0.05);在EBER-1阳性肺癌组织中p53、Bcl-2的平均面积(AA)和积分光密度(IOD)均高于阴性组,差异有统计学意义。在EBER-1阳性肺癌组织中MMP-9AA和IOD均高于阴性组,但差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]EBV感染可能通过影响LMP-1、Bcl-2、p53和MMP-9在肺癌组织中的表达,进而在肺癌的发生、发展和转移中发挥作用。 王梅梅 熊亚南 朱丽华 袁丽杰 张淑杰 章广玲 甄永占 刘志勇低浓度力达霉素对人白血病细胞K562增殖的抑制作用 2015年 目的探讨低浓度力达霉素(LDM)对人白血病细胞K562增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法以不同浓度LDM处理K562细胞48 h,通过MTT法检测LDM对细胞增殖的抑制作用;利用苔盼蓝染色对细胞活性进行测定;利用瑞氏-姬姆萨染色法观察LDM对细胞形态的影响;Elisa法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在细胞培养上清中的表达;采用Western Blot检测凋亡相关蛋白TNF-α的表达。结果 LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,用10-12、10-11、10-10、10-9、10-8mol/L浓度的LDM分别作用K562细胞48 h,抑制率分别为(21.2±2.48)%、(37.5±0.88)%、(52.1±1.24)%、(64.5±1.61)%和(71.3±2.00)%。通过瑞氏姬姆萨染色,荧光显微镜下可见胞膜皱缩,有泡状突起及不规则凹陷,胞核染色质浓缩,固缩,浓染,断裂成团块分散在胞膜周边。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清,LDM处理组与对照组相比,TNF-α表达水平升高。Western Blot分析显示,分别用10-8、10-10、10-12 mol/L浓度的LDM处理细胞48 h后,TNF-α蛋白的表达量依次为0.42±0.01、1.67±0.13(P<0.01)和2.41±0.08(P<0.01),与对照组0.23±0.02相比,吸光度值比升高。结论低浓度LDM可能通过上调TNF-α表达水平诱导K562细胞凋亡抑制其增殖。 穆丹 张志斌 章广玲 刘志勇 陈静关键词:力达霉素 K562细胞 增殖 细胞凋亡 肺鳞状细胞癌预后相关miRNAs及其候选靶基因生物信息学筛选 2021年 目的筛选与肺鳞状细胞癌预后相关的miRNAs及其靶基因的预测。方法采用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库收集人肺鳞状细胞癌miRNAs表达数据并进行差异表达分析;采用Kaplan-Meier分析差异表达的miRNAs与患者生存率的相关性;单因素方差分析差异表达的miRNAs与淋巴转移的相关性;采用DIANA TOOLS v5.0生物信息网站对筛选出的差异表达的miRNAs进行靶向基因预测、GO和KEGG功能富集分析;通过miRDB、miRwalk、TargetScan和microRNAs.org数据库进一步预测与预后相关性较高的miRNAs的靶基因;利用GEPIA在线工具评估miR-30a-3p候选基因的临床预后意义;候选靶基因与miR-30a-3p的相关性采用Pearson相关性分析。结果按照logFC>2、P<0.05标准筛选出差异表达显著的miRNAs共201个(173个上调、28个下调);其中下调的miR-144-5p、miR-30a-3p及上调的miR-210-3p、miR-9-5p与肺鳞状细胞癌患者生存率相关,且下调的miR-30a-3p与淋巴转移相关(P<0.05);miRDB、miRwalk、TargetScan和microRNAs.org数据库共同筛选出53个miR-30a-3p候选靶基因;高表达的USP38、SLMAP与更差的OS显著相关(P<0.05)。miR-30a-3p与RCN2、C8orf44和NAA25的表达量呈显著负相关(P<0.001)。结论miR-30a-3p可能通过负调控靶基因USP38、SLMAP、RCN2、C8orf44和NAA25参与肺鳞状细胞癌的发生发展过程,有望作为肺鳞状细胞癌预后相关分子标记物。 程远 张荣花 侯晓丽 韩向阳 卢鸿健 张青 刘志勇关键词:肺鳞状细胞癌 MIRNAS 预后 结核病和肺癌患者痰及胸腔积液中结核分枝杆菌L-型的检测 被引量:7 2013年 目的探讨结核分枝杆菌L-型(MTB-L)在结核病和肺癌患者痰、胸腔积液两种临床标本中检出的意义。方法选取华北石油总医院2007年2~11月门诊及住院确诊为肺癌的患者110例为肺癌组,选择同期该院健康体检者42例为健康健康对照组,选择同期门诊及住院101例肺癌胸腔积液患者为结核病组,比较3组的MTB-L的资料。结果结核病组IK抗酸染色检测痰和胸腔积液标本中阳性率分别为42.9%、34.4%,均高于肺癌组(26.8%,21.1%,P<0.05);结核病组痰和胸腔积液标本中MTB-L阳性率分别为57.1%、40.6%,均高于肺癌组(24.4%,26.3%,P<0.05)。结论 MTB-L感染在肺癌的形成过程中可能起到一定的作用。 王梅梅 田艳生 张淑杰 熊亚南 章广玲 刘志勇关键词:结核分枝杆菌 肺癌 结核病 miR-663对PG-LH7和PG-BE1细胞生长增殖和迁移侵袭的影响 被引量:1 2020年 目的:探讨microRNA-663(miR-663)对人肺巨细胞癌的低转移亚系PG-LH7和高转移亚系PG-BE1生长增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:实时定量RT-PCR检测A549细胞,PG-LH7细胞、PG-BE1细胞、miR-663ASO转染的PG-BE1细胞和miR-663mimics转染的PG-LH7细胞中miR-663表达水平;利用细胞计数、集落形成实验和CCK8法检测miR-663ASO或miR-663mimics转染后的PG-BE1细胞和PG-LH7细胞增殖;Transwell小室检测miR-663ASO或miR-663mimics转染后的PG-BE1细胞和PG-LH7细胞的侵袭和迁移能力。结果:miR-663在PG-LH7细胞中的表达低于A549细胞中的表达水平(P<0.05),miR-663在PG-BE1细胞中的表达高于A549细胞中的表达水平(P<0.05);miR-663mimics转染可以使miR-663在PG-LH7的表达水平增高(P<0.05),miR-663ASO转染可以使miR-663在PG-BE1的表达水平明显降低(P<0.05);miR-663mimics能够有效的促进PG-LH7细胞的增殖(P<0.05)、侵袭迁移能力(P<0.01);miR-663ASO能够有效的抑制PG-BE1细胞的增殖(P<0.05)、侵袭迁移能力(P<0.01)。结论:miR-663过表达能促进人肺巨细胞癌的低转移亚系PG-LH7的增殖、侵袭和迁移能力,而抑制miR-663表达抑制高转移亚系PG-BE1的生长增殖、迁移和侵袭能力。 王云朋 刘章心怡 张荣花 赵鹏 章广玲 刘志勇关键词:增殖 EB病毒感染与肺癌患者临床特征的相关性 被引量:2 2013年 目的探讨EB病毒(EBV)相关肺癌的临床特征。方法采用原位杂交法检测108例手术切除肺癌标本和22例癌旁正常组织的EBV编码小RNA1(EBER-1)的表达。结果肺癌标本中EBER-1阳性率为33.3%,高于癌旁正常肺组织的4.5%(P<0.01)。右肺癌EBER-1阳性率为40.3%,高于左肺癌的19.4%(P<0.05)。77例鳞癌和腺癌中,高、中、低分化癌的EBER-1阳性率分别为8.3%、47.2%、27.6%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EBV感染可能与肺癌的发病部位、分化程度相关。 王梅梅 熊亚南 张淑杰 朱丽华 刘志勇 章广玲关键词:肺癌 MiR-23a质粒的构建及其在胃腺癌细胞系MGC803中的表达 被引量:4 2014年 目的构建表达微小RNA-23a(miR-23a)的真核表达质粒,为进一步研究小RNA分子miR-23a在胃腺癌细胞系MGC803中的功能奠定良好的实验基础。方法首先设计并合成扩增miR-23a前体基因全长的PCR引物,提取胃腺癌细胞系MGC803基因组为模板,PCR扩增大小为324 bp的目的基因;PCR产物经过EcoR I和Bgl II酶切后,与线性化的pcDNA3载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒经脂质体方法转染MGC803细胞,实时定量PCR检测转染细胞MGC803中miR-23a的表达水平,经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及Transwell实验,观察过表达miR-23a后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果纯化质粒的相对分子质量为5.7 kb,酶切及测序鉴定结果符合目的条带大小(324 bp),插入的寡核苷酸序列与miR-23a前体基因序列完全相符;实时定量PCR结果表明pcDNA3/miR-23a能够有效表达miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,过表达miR-23a可以促进MGC803细胞活性;TUNEL实验结果显示,过表达miR-23a可以减少胃腺癌细胞MGC803凋亡的发生;Transwell实验结果显示miR-23a可以促进胃腺癌细胞MGC803的侵袭能力。结论构建的真核表达质粒在胃腺癌细胞MGC803中有效表达miR-23a,能够促进细胞活性及侵袭能力,并能抑制凋亡的发生。 陈力 王梅梅 周洪霞 熊亚南 章广玲 李淑英 袁丽杰 朱丽华关键词:细胞活性 凋亡 大鼠肝纤维化相关microRNA及其候选靶基因的筛选 被引量:2 2021年 microRNAs(miRNAs)是一类功能性非编码RNA,在多种生物过程中具有重要作用。然而,miRNA的表达模式、调控网络以及参与肝纤维化的miRNA仍有待阐明。为了探讨与肝纤维化相关的miRNA及其靶基因的功能,为临床肝纤维化治疗提供理论依据,本研究前期已采用胆管结扎法(BDL)建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型。从大鼠肝脏中提取总RNA,应用基因芯片技术对胆汁淤积性肝纤维化肝组织中miRNA和mRNA表达谱进行综合分析;结合生物信息方法分析在胆汁淤积性肝纤维化中差异表达miRNA可能的靶基因;实时荧光定量PCR技术检测TGF-β1处理人肝星状细胞LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平。结果表明,与正常肝组织相比,纤维化肝组织中有48个差异表达miRNA(FC>2,P<0.05),其中36个上调,12个下调;筛选出18个预测靶基因参与与纤维化相关的生物过程;TGF-β1处理LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平显著下调(P<0.05)。本研究筛选的差异表达miRNAs通过调节靶基因的表达在肝纤维化中可能发挥重要作用,将为miRNA在肝纤维化中的作用提供新的见解。 侯晓丽 苏静慧 刘章心怡 张荣花 王一同 刘雨潭 张海东 章广玲关键词:胆汁淤积 肝纤维化 MIRNA MRNA 赖氨大黄酸与大黄酸对大鼠胆汁淤积性肝纤维化的疗效比较 被引量:5 2019年 目的探讨赖氨大黄酸(rhein lysinat,RHL)和大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠肝脏的保护作用,比较RHL与大黄酸对大鼠胆汁淤积性肝纤维化的疗效。方法采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)的方法制造了大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,将大鼠随机分为5组:赖氨酸组、RHL组、大黄酸组、模型组、对照组。检测大鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL)的含量,HE染色观察肝脏组织病理学改变,Masson三色染色观察肝脏纤维结缔组织改变,使用酶标仪通过试剂盒检测肝脏羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,免疫组化染色观察α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)的分布与表达,Western blotting检测α-SMA相对表达量的变化。结果与对照组相比较,模型组大鼠生长速率、肝脏与体质量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL的含量升高(P<0.05),肝小叶的结构被破坏,纤维异常增生,Hyp的含量升高,免疫组化染色显示α-SMA分布于胞膜和胞质且表达增多,Western blotting结果显示模型组大鼠α-SMA相对表达量升高,提示肝星形细胞活化增多;与模型组相比,用药组大鼠生长率、肝脏与体质量比虽无显著变化,但是血清中AST、ALT、TBA、TBIL水平明显降低;用药组大鼠肝脏组织中纤维成分经治疗后减少,Hyp含量降低,用药后大鼠肝脏组织中α-SMA表达含量亦相应减少(P<0.05),提示肝星形细胞活化减少,且RHL组较大黄酸组降低显著。结论RHL和大黄酸通过抑制肝星形细胞激活、肝脏纤维变性、蓄积来发挥对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏的保护作用,且RHL的作用强于大黄酸,提示RHL有望成为防治胆汁淤积性肝纤维化的药物。 孔艺璇 刘章心怡 张荣花 王琳 卫敬泽 甄永占 章广玲关键词:胆汁淤积 肝纤维化