国家重点基础研究发展计划(2007CB914104)
- 作品数：13 被引量：47H指数：4
- 相关作者：钱小红张养军蔡耘秦伟捷卢庄更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京蛋白质组研究中心北京理工大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：理学生物学更多>>
- 同系物标记结合凝胶电泳和质谱技术用于蛋白质N端肽鉴定及相对定量被引量：1
- 2008年
- 通过酸酐同系物标记蛋白质的N-末端,经过凝胶电泳分离,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪进行鉴定,建立了一种基于化学标记和质谱技术的、用于蛋白质的N-末端鉴定和相对定量新方法。标记后的蛋白质的N端肽以相差14 Da的成对峰形式在质谱中出现,而非N-末端肽则是以单峰呈现,从而实现了末端肽的特异性识别;通过端肽的信号强度对3种标记蛋白质的不同比例的混合溶液实现了相对定量分析。
- 赵丽艳周春喜张养军刘新蔡耘钱小红
- 关键词：化学修饰电泳分离蛋白质组学
- 磺化修饰结合离子交换色谱和生物质谱富集鉴定含组氨酸肽段被引量：3
- 2009年
- 通过在肽段的N端引入磺酸基,从而使含组氨酸的肽段与其他肽段在pH<3.0的条件下产生电荷差异,建立了一种基于强阳离子交换色谱(SCX)结合生物质谱富集鉴定含组氨酸肽段的方法,并以含有组氨酸的标准蛋白质为模型,进行了方法学考察。结果表明,经N端磺酸化后,含组氨酸的肽段能有效地被阳离子交换色谱富集,且在肽的N端引入磺酸基促进了肽的裂解,使之产生简单而信息丰富的二级质谱图,从而得到完美的质谱鉴定结果。这说明磺化修饰结合强阳离子交换色谱用于含组氨酸肽段的富集鉴定是可行的,且具有在蛋白质组研究中应用的潜力。
- 曹冬周春喜张养军韩春光邓玉林钱小红
- 反相毛细管整体柱的制备及其在多肽混合物分离中的应用被引量：5
- 2009年
- 采用甲基丙烯酸月桂酯为基础功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,正十二醇、1,4-丁二醇及二甲基亚砜为致孔剂,在内径为75μm的石英毛细管内制备了具有良好机械性能及化学稳定性的反相毛细管整体柱。考察了致孔剂的种类、比例以及交联剂在单体混合物中的比例对柱压和分离效果的影响;以单体15%、交联剂15%、致孔剂70%(均为质量分数)作为优化配方,在70℃条件下反应24h;并对所合成的毛细管整体柱进行了电镜表征,测试了流速、柱长与柱压的关系。结果表明,毛细管整体柱的通透性良好,可通过延长柱长的方法提高分离效果。将所制备的毛细管整体柱装于纳升级高效液相色谱仪上进行牛血清白蛋白及血浆样本的胰蛋白酶酶切液的分离,获得了比较理想的分离效果。
- 谢晶鑫毕开顺钱小红张养军
- 关键词：毛细管整体柱
- 胸腺嘧啶在改进银溶胶溶液中的表面增强拉曼散射光谱信号与浓度的定量关系被引量：6
- 2009年
- 尝试使用高分子材料作为银溶胶的稳定剂，以吡啶作为内标化合物研究胸腺嘧啶浓度与其SERS信号强度的关系。在胸腺嘧啶的浓度为2×10^-4～1×10^-3 mol·L^-1的范围内，谱峰强度之比与胸腺嘧啶的浓度之间呈现良好的线性关系，线性回归方程为y=3.143x＋0.348 7, 线性相关系数R^2=0.975 4。
- 张磊张玉兰张伟王文明杜一平Yukihiro Ozaki
- 关键词：表面增强拉曼散射胸腺嘧啶稳定剂
- 麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽过程中的肽键裂解被引量：4
- 2009年
- 蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切。凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用。麦胚凝集素(W GA)由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一。在本研究中,发现将W GA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败。本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端。这一结果提示:在糖蛋白质组研究中,如果应用W GA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适。
- 卢庄王京兰贾伟杨兵蔡耘邓玉林张玉奎钱小红
- 关键词：糖肽肽键蛋白质组学
- 分离分析技术在蛋白质组学研究中应用的新进展被引量：9
- 2009年
- 蛋白质组学研究的核心技术之一是分离分析方法。该综述重点评述了分离分析技术在蛋白质组学研究,即在蛋白质组表达谱构建、翻译后修饰蛋白质组研究、蛋白质复合体和相互作用研究、蛋白质组定量研究中应用的新进展,介绍了各种分离分析方法的优点、应用范围和有待解决的问题。引用文献89篇。
- 张养军张万军马岩彭博钱小红
- 关键词：蛋白质组学质谱蛋白质相互作用
- 改进的^18O同位素标记法标记蛋白质多肽被引量：3
- 2010年
- 针对18O同位素标记反应两个重要影响因素——肽段分散度和胰酶灭活方法,进行了标记条件的改进和灭活方法的优化。在H218O中加入RapigestTM SF助溶剂并微波辅助加热,使α-酪蛋白胰酶酶切肽段的标记效率得到明显改进(18O/16O峰面积比值>99%)。标记后,对胰酶进行还原烷基化化学修饰彻底灭活,使标记后的肽段稳定性显著提高,放置6d不发生回交反应。对标准蛋白质甲状腺球蛋白酶切肽段混合物标记后的质谱实验结果表明:优化的标记方法能快速稳定地标记蛋白质酶切多肽。
- 赵焱卢庄贾伟应万涛钱小红
- 关键词：多肽蛋白质组
- 高效硅胶化学键合固定相的研究进展被引量：5
- 2010年
- 对高效液相色谱用硅胶作为基质的化学键合固定相的研究进展进行了全面的评述。介绍了硅胶基质填料的物理化学性质及前处理过程,详细阐述了化学键合固定相的键合反应机制和种类,概括了化学键合固定相在高效液相色谱中的应用,并对我国的硅胶基质填料研究和应用前景进行了展望。
- 佟巍张养军秦伟捷钱小红
- 关键词：高效液相色谱
- 一种蛋白质质谱分析中快速胍基化新方法被引量：1
- 2011年
- 胍基化修饰在蛋白质组学鉴定及定量研究中发挥着重要的作用,本研究建立了一种蛋白质质谱分析中微波辅助快速胍基化的新方法。采用标准肽段系统地优化了反应溶剂pH值、O-甲基异脲的浓度及微波加热时间,发现标准肽段在pH 12的氨水溶液中,O-甲基异脲的浓度为1.5mol/L,微波高火加热1min的胍基化效率为99%。将此方法应用于马心肌红蛋白和牛血清白蛋白胰蛋白酶酶切肽段,质谱检测结果表明,含赖氨酸肽段的平均胍基化效率(95%)大于文献报道的平均胍基化效率(85%)。与传统水浴加热胍基化方法相比,微波辅助加热胍基化方法缩短了反应时间,提高了反应效率,降低了肽段N端副反应。
- 王雪颖张养军王昕佟巍秦伟捷毛心丽钱小红
- 关键词：微波辅助
- 规模化蛋白质生物质谱鉴定中肽段氨基端环化修饰现象被引量：2
- 2009年
- 对蛋白质样品制备中引入的氨基酸残基的一种现象——蛋白质酶切肽段氨基端的环化修饰现象的初步研究结果显示,很多以谷氨酰胺(Q)或氨乙酰化修饰的半胱氨酸(CAM_C)残基起始的肽段会发生氨基端的环化修饰,且修饰反应不完全,在同一样本中修饰与非修饰两种状态常同时存在,并且环化修饰后的肽段的反相色谱保留时间发生延迟。在数据库检索时添加环化修饰,可以提高蛋白质的鉴定成功率。本研究结果为大规模的蛋白质质谱数据解析提供了有价值的参考。
- 卢庄赵丽艳张养军蔡耘邓玉林张玉奎钱小红
- 关键词：环化规模化蛋白质鉴定
