湖南省重点学科建设项目(07-985-2)
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
- 相关作者：汪世平高冬梅何卓罗四维周帅锋更多>>
- 相关机构：中南大学永州职业技术学院香港中文大学更多>>
- 发文基金：湖南省重点学科建设项目国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗日本血吸虫pVAX1/SjHGPRT·SDISP多价疫苗的构建方法探讨
- 2011年
- 目的:探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1/SjHGPRT.SDISP的构建方法并从基因与蛋白水平验证该构建方法是否成功。方法:分别以pcDNA3.0/SjHGPRT、pcDNA3.0/SjSDISP为模板,设计引物扩增SjHGPRT、SjSDISP,采用overlap方法扩增全长SjHGPRT.SDISP。将纯化后的产物SjHGPRT.SDISP以及pVax1质粒采用Kpn I和Xba I双酶切,1%低熔点胶回收目的 DNA片段以及酶切后Pvax1载体片段双胶连。连接产物转化至DH5α细胞。挑选阳性克隆采用双酶切以及测序方法从基因水平鉴定是否构建成功。将构建产物免疫观察动物,采用免疫组化方法从蛋白水平鉴定疫苗pVAX1/SjHGPRT.SDISP是否构建成功。结果:酶切方法以及测序结果均显示重组质粒的插入序列分别与目的基因完全一致,昆明小鼠肌肉组织酶免疫组织化学染色显示免疫组小鼠肌细胞中呈现较强的棕黄色颗粒,而阴性对照组肌细胞呈阴性。结论:真核重组质粒pVAX1/SjHG-PRT.SDISP构建成功,且在昆明鼠肌肉细胞内能够获得良好的表达。
- 罗四维汪世平
- 关键词：血吸虫多价疫苗
- 日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4、SjRPL7 DNA疫苗对小鼠免疫保护作用研究被引量：5
- 2010年
- 目的研究日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4、SjRPL7DNA疫苗对小鼠免疫保护作用。方法大量制备pcD-NA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7质粒DNA疫苗,昆明小鼠40只,随机均分为A、B、C和D组,A组为生理盐水(NS)组,每次肌肉注射100μL生理盐水;B组每只小鼠的股四头肌注射100μgpcDNA3.0裸质粒DNA;C组为pcDNA3.0/SjRPS4真核重组质粒组,每次肌肉注射质粒100μg/100μL;D组为pcDNA3.0/SjRPL7真核重组质粒组,每次肌肉注射质粒100μg/100μL。每隔2w同量加强免疫1次,共3次。末次免疫后第2w测定免疫各组血清特异性抗体效价后,经小鼠腹部皮肤人工感染20±1条日本血吸虫尾蚴。感染后第42d处死小鼠,计算减虫率和减卵率。结果与NS对照组比较,pcDNA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7免疫组小鼠均获得了较显著的减虫率、肝减卵率、肠减卵率、每雌子宫减卵率。统计学处理,均有显著性差异。结论pcDNA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7DNA疫苗对小鼠均有较强的免疫保护效果。
- 汪世平高冬梅何卓余路新陈秀春
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗免疫保护
- 抗日本血吸虫pVAX1/SjHGPRT·SDISP多价疫苗对昆明小鼠的保护作用及其机制探讨被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1/SjHGPRToSDISP对昆明小鼠的保护作用及其机制。方法:选取昆明小鼠30只,分别使用pVAX1/SjHGPRToSDISP、pVAX1以及生理盐水,每只小鼠100μg或等量经左腿股四头肌注射。处理2周后,采集动物模型血样检测IgG、IL-2,IL-4,IL-10以及INF-γ表达量。处理4周后,以20±1条尾蚴贴腹感染,感染6周后检测减虫率、减卵率。结果:尾蚴攻击动物后6周,pVAX1/SjHGPRToSDISP免疫组的肝脏减虫率为42.2%,子宫与肝脏减卵率分别为68.04%以及72.96%。与对照组比较,差异有显著性。pVAX1/SjHGPRToSDISP免疫组虫体内IgG、IL-4以及INF-γ表达量明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:pVAX1/SjHGPRToSDISP多价疫苗具有较好的免疫保护作用,且该类作用的机制与IgG、IL-4以及INF-γ的表达升高存在关联。
- 罗四维汪世平
- 关键词：血吸虫多价疫苗
- 日本血吸虫生殖相关抗原31～32kDa分子的质谱分析与鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫天然分子31～32kDa抗原组分。方法收集感染后32d的日本血吸虫成虫,制备成虫蛋白,经一维电泳、固相pH梯度双向凝胶电泳分离,选取31～32kDa附近的蛋白点进行质谱分析鉴定,通过凝胶图像分析软件进行结果比较。结果二维电泳结果显示31～32kDa附近有13个蛋白点,经MALDI-TOF-MS鉴定及分析,发现3个蛋白分子分别与曼氏血吸虫Actine-2、日本血吸虫3-磷酸甘油脱氢酶、曼氏血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶有高度的同源性。结论31～32kDa组分中含有这3个蛋白点,它们与日本血吸虫31～32kDa天然分子中起保护性的有效分子密切相关。同时,它们的发现也为天然分子疫苗向基因工程疫苗的推进奠定了基础。
- 李林汪世平周帅锋胡少敏何卓高冬梅冯明钊
- 关键词：日本血吸虫蛋白质组学二维电泳质谱
- pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB双价疫苗的构建及其免疫效果观察被引量：6
- 2009年
- 目的构建日本血吸虫天然分子疫苗相关靶基因的双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,并观察其免疫保护效果。方法分别以pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB为模板,设计引物扩增SjRPS4、SjCB,重叠PCR法将SjRPS4、SjCB拼接,扩增,经双酶切后与真核质粒载体pVAX1、pcDNA3.0连接,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆;提取双价重组质粒、空质粒及pVAX1/SjRPS4,经左腿股四头肌注射昆明小鼠,14d后取肌肉组织切片进行间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色,证实双价重组质粒的表达;提取pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB及相应空载体,100μg/只或等量PBS经左腿股四头肌注射昆明小鼠,4周后以(20±1)条尾蚴贴腹感染,6周后检测减虫率、减卵率。结果PCR、EcoRI/XhoI双酶切及测序证实双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB构建成功;肌肉组织间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色证实重组质粒能够在小鼠肌肉细胞内成功表达;与PBS组相比,pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB免疫小鼠各组间差异均有统计学意义(P<0.05),各组与相应的空质粒组相比各指标差异亦具有统计学意义(P<0.05);两种不同载体构建的双价疫苗之间比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建真核双价重组质粒pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,二者免疫昆明小鼠均可以产生比单价疫苗更好的免疫保护效果。
- 罗四维秦永华汪希雅高冬梅何卓周帅锋陈秀春余路新汪世平
- 关键词：日本血吸虫病疫苗
- 湖南省日本血吸虫线粒体atp6基因部分序列的多态性分析被引量：3
- 2011年
- 目的研究湖南省日本血吸虫不同地域自然隔离群线粒体ATP合成酶F0亚单位6基因(atp6)部分序列的遗传多态性,为湖南不同地域自然隔离群日本血吸虫的遗传特性研究提供实验依据。方法采用试剂盒抽提基因组总DNA,以特异性引物对线粒体atp6基因进行PCR扩增,通过单链构象多态性技术(SSCP)筛选出差异带型并进行测序,用DNAStar 5.0及Mega 4.0软件进行比对分析。结果湖南省5个流行区的日本血吸虫PCR扩增后获得了483 bpatp6部分序列,检测出17个变异位点,变异率为3.52%,雌雄虫之间的差异为0.0%～1.3%,不同地理来源虫株间的差异率为0.0%～1.5%。聚类分析结果表明:湖南不同地域自然隔离群日本血吸虫的种系发育不能按照其来源归为相应的系统发育进化树。结论湖南不同地域自然隔离群日本血吸虫的atp6基因存在明显的个体差异,是否由于生存环境的选择压力造成了同一地理来源日本血吸虫个体之间atp6基因的遗传差异,其原因尚有待于进一步研究。
- 夏英定汪世平李娟吴昌义田智尹铁球周云飞张树菊冯其梅
- 关键词：日本血吸虫PCR-SSCP
