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mTOR特异性siRNA重组表达载体的构建及鉴定: 2013年; 目的构建mTOR siRNA重组表达载体,为探讨RNA干扰技术抑制巨噬细胞mTOR基因的相关研究奠定基础。方法设计具有短发夹结构的DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,并进行序列测定。再转染入巨噬细胞RAW264.7,进行荧光摄像和阳性克隆筛选。Western blot方法检测巨噬细胞mTOR蛋白表达。结果 DNA测序结果及PCR鉴定证实成功构建小鼠mTOR siRNA重组表达载体。Western blot结果显示转染该重组载体的巨噬细胞mTOR蛋白表达下降约41%。结论mTOR靶向RNA干扰重组表达载体构建成功,可以进行稳定筛选,该载体对巨噬细胞mTOR蛋白表达有抑制作用。; 张才成陈静陈唐勇章登珊郑晓丰李俊明; 关键词：MTOR RNA干扰重组表达载体

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江西省自然科学基金(2009GQY0203)