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腺病毒和慢病毒载体感染骨髓间质干细胞的比较被引量：30: 2006年; 目的比较腺病毒和慢病毒载体感染骨髓间质干细胞(rMSCs)的荧光病毒基因表达的稳定性及持续时间。方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体质粒同辅助质粒一起共感染293T细胞,重组包装;将慢病毒和腺病毒载体分别感染rMSCs,培养5周,分别在1、3、5周通过流式细胞仪检测GFP的表达情况。从GenBank中调出人骨形态发生蛋白2(hBMP2)基因序列,设计带有NheI、AgeI双酶切位点引物。从人肝脏组织中抽提总RNA,再逆转录成cDNA,扩增出hBMP2基因的全长序列。测序验证后克隆到慢病毒载体pHIV-CS-CDF-CG-PRE上,通过PCR扩增、酶切、测序等方法鉴定重组慢病毒载体。将该重组慢病毒载体质粒同辅助质粒一起共感染293T细胞,通过重组而包装成能表达hBMP2基因的有活性的慢病毒。结果两种病毒载体感染后1周,绿色荧光蛋白表达分别是90%和71%,到5周时,慢病毒载体的绿色荧光蛋白表达明显高于腺病毒载体,分别是79%和0.05%。扩增出1.2kb左右的hBMP2全长基因与GeneBank中的hBMP2阅读框架序列完全一致;成功克隆和构建了含hBMP2基因的慢病毒载体pHIV-hBMP2;对慢病毒载体进行了成功包装和分析。结论含hBMP2基因的慢病毒载体可成功构建。慢病毒载体对大鼠骨髓间质干细胞的转染效率明显优于腺病毒载体。; 马晓生姜建元吕飞舟马昕李小康黄煌渊; 关键词：慢病毒属腺病毒科干细胞骨形态发生蛋白质类

不同基因载体系统对脐带血间充质干细胞转染效果的初步研究被引量：3: 2008年; 目的比较慢病毒载体和腺病毒载体转染人脐带血间充质干细胞后,外源基因的表达。方法采用人脐带血分离培养间充质干细胞,制备表达GFP的慢病毒载体和腺病毒载体,用以转染间充质干细胞,观察其外源基因的表达。结果脐带血间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;转染5周后,慢病毒载体转染的GFP阳性表达明显高于腺病毒载体。结论慢病毒载体较腺病毒载体作为基因转导系统更有优势。; 马晓生吕飞舟姜建元李小康; 关键词：脐带血间充质干细胞慢病毒载体腺病毒载体

人类脐带血间充质干细胞的培养及鉴定被引量：1: 2007年; 目的对人类脐带血中的有核细胞进行分离培养及鉴定,观察能否得到间充质干细胞。方法抽取人类脐带静脉血,进行细胞分离和培养,并进行荧光激活细胞分析。结果脐带血中间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;流式细胞术鉴定结果表明这种细胞能表达CD29、CD44、CD90、CD95、CD105、CD166以及MHCⅠ(组织相容性抗原复合体Ⅰ),但不能表达CD14、CD34、CD40、CD45、CD80、CD86、CD117、CD152以及MHCⅡ(组织相容性抗原复合体Ⅱ);并且具有分化成骨细胞和脂肪细胞的潜能。结论可以从人类脐带血中成功分离培养得到间充质干细胞。; 马晓生姜建元吕飞舟李小康; 关键词：人脐带血间充质干细胞成骨细胞脂肪细胞

携带BMP-2基因的慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞定向分化被引量：1: 2006年; 目的构建含有人骨形态发生蛋白2(human bone morphogenetic protein 2,hBMP2)cDNA的重组慢病毒DNA,在293T细胞中进行慢病毒包装和表达检测。用慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞后,观察其向成骨细胞分化的情况。方法从GenBank中调出hBMP2基因序列,设计带有NheⅠ、AgeⅠ酶切位点引物。从人肝脏组织中抽提总RNA,再反转录成cDNA,扩增出hBMP2 cDNA的全长序列。测序验证后克隆到慢病毒载体pHIV-CS-CDF-CG-PRE上,通过PCR扩增、酶切、测序等方法鉴定重组慢病毒DNA。将该重组慢病毒DNA同辅助质粒一起共感染293T细胞,通过重组而包装成能表达hBMP2基因的有活性的慢病毒。慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞,通过碱性磷酸酶(AP)、钙沉积定量测定、Ⅰ型胶原蛋白表达观察干细胞向成骨细胞转化的情况。结果①扩增出1.2 kb左右的hBMP2全长cDNA与GeneBank中的hBMP2阅读框架序列完全一致;②成功构建和克隆了含hBMP2基因的慢病毒重组DNA(pHIV-hBMP2);③对重组慢病毒DNA进行了成功包装和分析。④大鼠骨髓间质干细胞感染慢病毒后,碱性磷酸酶分泌增加,钙沉积增加,Ⅰ型胶原蛋白表达增加,成功向成骨细胞转化。结论重组慢病毒携带hBMP2基因感染大鼠骨髓间质干细胞可以使其向成骨细胞定向分化,为组织工程研究提供良好的种子细胞。; 马晓生吕飞舟李小康黄煌渊姜建元; 关键词：人骨形态发生蛋白2 体外表达骨髓间质干细胞

慢病毒介导骨形成蛋白-2基因转染骨髓间质干细胞修复大鼠颅骨骨缺损被引量：7: 2008年; 目的观察携带人骨形成蛋白-2（hBMP-2）基因的慢病毒（lentivirus）转染骨髓间质干细胞构建的组织工程化骨对大鼠颅骨极量骨缺损的修复效果。方法300～350g雄性SD大鼠取股骨骨髓体外培养扩增骨髓间质干细胞（BMSC），以lentivirus载体介导hBMP-2基因转染BMSC，诱导其向成骨细胞分化。将细胞接种于经纤维连接蛋白修饰的β-磷酸三钙（β-TCP），共同培养10d。30只大鼠均造成颅骨极量缺损（直径8mm）模型，分为Lev—BMP2转染细胞＋β—TCP组（A组：n=10）；BMSC ＋β-TCP组（B组：n=10）；β—TCP组（C组：n=10）于第4、8、12、20周从影像学及组织学角度观察比较颅骨缺损修复情况。结果无论X线摄片及组织切片均表明，A组颅骨骨缺损修复优于同期的B组和C组。在各时间点A组和B组在植骨区均有新骨形成，而C组仅见边缘区成骨。术后20周新生骨小梁相对体积（TBV，％）A组为（60．83±11．49），B组为（40．37±9．02），C组为（18.37±6.02），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Lev-BMP2转染BMSC复合β-TCP构建的组织工程化骨对大鼠颅骨极量骨缺损有较好的修复效果。; 王立勋吕飞舟马晓生黄煌渊姜建元; 关键词：骨形成蛋白-2 慢病毒载体

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国家自然科学基金(30371434)

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