湖南省科技厅重点项目(02SSY2001-1)
- 作品数：5 被引量：64H指数：3
- 相关作者：陈主初肖志强章晓鹏李建玲冯雪萍更多>>
- 相关机构：中南大学湖南师范大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅重点项目教育部跨世纪优秀人才培养计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转染LCRG1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质。方法:抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白。考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1075±43和1027±23,平均匹配率为91%。图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOFMS/MS鉴定了4个。对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质。结论:建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索。
- 章晓鹏肖志强陈主初李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞
- 关键词：喉肿瘤HEP-2细胞比较蛋白质组双向凝胶电泳差异表达蛋白
- 肿瘤蛋白质组学的研究进展
- 蛋白质组学作为后基因组时代研究的一个重要内容,已广泛深入到生命科学和医药学的各个领域,其理论和技术的发展完善为肿瘤的研究带来了新的思维方式和研究领域．它不仅可以从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度来研究肿瘤发病机理,而...
- 肖志强
- 关键词：肿瘤蛋白质组蛋白质组学
- 文献传递
- 用蛋白质组学方法解析磷酸化蛋白质被引量：2
- 2005年
- 蛋白质磷酸化和去磷酸化这一可逆过程参与了高等真核生物细胞信号转导、细胞分化和细胞生长等重要过程,并与许多疾病、肿瘤的发生密切相关。蛋白质组学技术的不断发展和完善,可以更好、更多地识别和鉴定磷酸化蛋白质,为解析磷酸化蛋白质提供了可能。文章综述了用于分离和鉴定磷酸化蛋白质的蛋白质组学方法。
- 章晓鹏肖志强陈主初
- 关键词：磷酸化磷酸化蛋白质质谱技术
- 肿瘤蛋白质组学的研究进展被引量：42
- 2004年
- 蛋白质组学作为后基因组学时代研究的一个重要内容,已广泛深入到生命科学和医药学的各个领域,其理论和技术的发展完善为肿瘤研究带来了新的思维方式和研究领域,它不仅可以从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度来研究肿瘤发病机理,而且能寻找用于肿瘤诊断和防治的生物标志物。
- 陈主初
- 关键词：肿瘤蛋白质组学双向凝胶电泳技术质谱技术生物信息学
- 人肺鳞癌组织的血清蛋白质组学的比较分析被引量：13
- 2005年
- 采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学(proteomics)研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(serologicproteomeanalysis ,SERPA)筛选肺癌分子标志物.对10例人肺鳞癌组织,应用双向凝胶电泳(two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)技术对同一肺鳞癌组织的细胞总蛋白同时进行电泳后获得3张相同的凝胶,其中一块2 DE凝胶经银染显色作为平行胶,其余两块2 DE凝胶经电转膜将凝胶中的蛋白质转至硝酸纤维素(NC)膜上,然后分别与肺癌患者的自身血清以及正常对照血清进行Western印迹分析,获取Western印迹反应图谱.经计算机图像分析识别差异反应的蛋白质,然后与平行胶比较找出相应的差异反应蛋白质点.获得了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的Western印迹反应图谱;图像分析共识别36±8个差异反应的蛋白质;在平行胶上找到了匹配的差异反应蛋白质点.对2 0个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出14个与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺鳞癌相关抗原.通过血清蛋白质组技术对肺鳞癌组织进行的研究,建立了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常血清的Western印迹反应图谱,成功鉴定14个肺鳞癌相关抗原,为进一步筛选用于肺鳞癌诊断。
- 李萃肖志强章晓鹏陈主初吴晓英冯雪萍张鹏飞李建玲易红梁宋平
- 关键词：人肺鳞癌血清蛋白质组双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS
- 应用磷酸化蛋白质组学方法初步研究喉癌相关基因LCRG1的功能被引量：8
- 2005年
- mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因LCRG1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,LCRG1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究LCRG1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep-2/LCRG1细胞,仍表达LCRG1,且LCRG1具有显著的抑制细胞增殖的能力.抽提Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系总蛋白质,应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2DGE),结合抗酪氨酸磷酸化抗体的免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),鉴定酪氨酸磷酸化的蛋白质.得到了分辨率较高、重复性较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的总蛋白质双向凝胶电泳图谱;结合免疫印迹反应、软件分析和质谱技术识别并鉴定了13个差异反应的酪氨酸磷酸化的蛋白质.这些蛋白质参与了细胞信号传导和细胞代谢等过程.推测LCRG1可能是通过调节这些蛋白质的酪氨酸磷酸化、去磷酸化状态,参与细胞增殖、代谢和凋亡等过程的调控,而发挥抑瘤作用.这为全面、真实地揭示LCRG1抑瘤作用的分子机理提供了新思路.
- 章晓鹏肖志强李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞陈主初
- 关键词：双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS免疫印迹蛋白质印迹
